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Jagged1对海马放射状胶质细胞增殖和向神经元分化的影响
目的：探讨Jagged1在体外培养的海马放射状胶质细胞增殖和向神经元分化中的作用。方法体外培养海马放射状胶质细胞，在培养液中加入Notch信号通路的激动剂Jagged1和（或）抑制剂｛氮-[氮-（3，5-二氟苯乙酰）-L-丙氨酰]-S-苯基甘氨酸丁酯，DAPT｝，将细胞分为空白对照组、Jagged1组、Jagged1联合DAPT组、DAPT组；细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测各组细胞活力；免疫荧光法检测脑脂结合蛋白（BLBP）／Ki67双标阳性细胞数及分化所得的微管相关蛋白-2（MAP-2）阳性细胞数。结果 Jagged1组中细胞活力明显高于其他各组，并且Jagged1组中BLBP／Ki67双标阳性细胞及分化所得的MAP-2阳性细胞数也多于其他各组。结论 Jagged1能够促进体外培养的海马放射状胶质细胞增殖，并且能够促进其更多地向神经元分化。
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大鼠创伤性脑损伤后海马齿状回中脑脂结合蛋白的表达变化
目的 观察大鼠创伤性脑损伤(TBI)后不同时间点海马结构齿状回中脑脂结合蛋白(BLBP)的表达变化.方法 将72只SD大鼠随机分为脑损伤组、假手术组和空白对照组,制备大鼠颅脑液压损伤模型,伤后1、3、7、14d分别行海马组织Western blotting和BLBP、波形蛋白(Vimentin)免疫荧光双标检测.结果 Western blotting结果显示,伤后1d BLBP蛋白含量相对于空白对照组下降(P＜0.01),后逐渐上升,至伤后7d BLBP蛋白含量与其他各组比较达到高峰(P＜0.01),伤后14d又下降低于空白对照组水平(P＜0.01).BLBP和Vimentin双标阳性细胞数量变化趋势基本与Western blotting结果相一致.损伤侧海马BLBP和Vimentin双标阳性细胞主要分布于海马齿状回颗粒下层,多数呈放射状胶质细胞(RGCs)形态; 伤后7d,齿状回门区也出现BLBP和Vimentin双标阳性细胞,大多为反应性星形胶质细胞形态.结论 大鼠创伤性脑损伤后,损伤侧海马齿状回中BLBP的表达呈现先下降后上升,至伤后7d达到高峰,后又急剧下降的规律,BLBP的表达变化可能与海马神经再生和神经功能恢复有关.
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海马放射状胶质细胞激活后Rest和Runx1t1基因的表达变化
目的 探讨经切割穹隆海马伞侧海马提取液诱导而激活的海马放射状胶质细胞的基因表达变化.方法 将分离、纯化后的海马放射状胶质细胞分别加入正常侧和切割穹隆海马伞侧海马提取液,7d后利用免疫荧光法检测两组细胞的数量和生长情况;利用基因芯片分析细胞内基因表达情况;利用实时定量PCR分析神经干细胞向神经元分化的相关基因Rest和Runx1t1的转录情况.结果 与正常组相比,切割组放射状胶质细胞的数量明显增多,胞体增大,突起增粗变长.基因芯片结果显示,在所检测的709个基因中,切割组中10个基因表达明显上调,10个基因明显下调;实时定量PCR结果表明,切割组Rest和Runx1t1的转录水平均显著高于正常组(P＜0.05).结论 切割穹隆海马伞海马提取液可诱导海马放射状胶质细胞的激活,提高Rest和Runx1t1基因转录水平.
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切割穹隆海马伞海马提取液促进放射状胶质细胞增殖和向神经元分化
目的 探讨海马微环境的变化对体外培养的放射状胶质细胞增殖和分化的影响.方法 本实验在成功制备正常侧和切割穹隆海马伞侧海马提取液的基础上,分别使用正常侧和切割侧海马提取液,观察其在体外培养的放射状胶质细胞增殖和分化过程中所起的作用.结果 在放射状胶质细胞增殖阶段,切割组与正常组及对照组相比,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的增殖细胞比例明显提高(P＜0.05);在放射状胶质细胞分化阶段,切割组与正常组及对照组相比,Tuj1阳性神经元数量明显增多(P＜0.05).结论 切割穹隆海马伞侧海马提取液对大鼠放射状胶质细胞的增殖和向神经元的分化有明显促进作用,提示海马微环境对海马放射状胶质细胞的增殖和分化有重要影响.
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新皮质的发育与片层化构筑的形成
新皮质由神经上皮经过增殖、分化和神经细胞的迁移后逐步发育而来,新增殖的有丝分裂后神经元沿着放射状胶质细胞按照由内向外的迁移原则在皮质板定居下来.Cajal-Retzius细胞在新皮质发育及片层化过程中起着关键作用,Cajal-Retzius细胞分泌的reelin是迁移中神经元的终止信号和化学趋向信号,reelin的这些功能使得从大脑皮质的细胞构筑和纤维构筑得以形成.
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鸡胚发育过程四种放射状胶质细胞标记物的对比分析
目的:比较脑脂结合蛋白(Brain lipid binding protein,BLBP)、放射状胶质细胞标记物2(Radial glial cell marker-2,RC2)、巢蛋白(Nestin)和胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)在鸡胚不同发育时期视顶盖胶质细胞(Glial cell,GC)中表达的差异.方法:从鸡胚发育的第8天(E8)开始到E18,分别进行取材、固定、包埋,振荡切片,采用免疫荧光技术对不同发育时期的鸡胚视顶盖的胶质细胞进行标记,同时采用活体原位电转的方法对E8、E10和E12的放射状胶质细胞(Radial glial cells,RGCs)进行标记.结果:从E8开始,BLBP、RC2、Nestin和GFAP均开始表达.BLBP和GFAP抗体标记GC从E8到E18均可表达,BLBP标记的细胞从E14开始出现变化,呈现迁移中神经元的特点,GFAP标记的细胞在E18开始出现变化,呈现星形胶质细胞形态.自E8-E16,RC2和Nestin标记RGCs,但E18时标记RGCs已不明显.结论:4种抗体均可标记E8-E18的GC,在E12之前4种抗体标记RGCs效果相似,而在E12后RC2,Nestin与BLBP标记RGCs开始出现差异,从E18开始GFAP开始标记星形胶质细胞(Astrocyte).
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大鼠创伤性脑损伤后损伤区周围脑组织脑脂结合蛋白的表达变化口
目的 观察大鼠创伤性脑损伤(TBI)后不同时间点脑损伤区周围脑组织脑脂结合蛋白(BLBP)的表达变化.方法 采用大鼠颅脑液压损伤模型,在伤后l、3、7、14 d用Western blot检测损伤区周围脑组织BLBP的表达,.用免疫荧光双标法检测BLBP和波形蛋白.结果 TBI后ld,BLBP含量显著下降,后逐渐上升,至伤后7d达到高峰,伤后14 d又急剧下降(均P＜0.01).BLBP和波形蛋白双标阳性细胞主要分布在损伤区周围皮质及损伤侧胼胝体,损伤侧皮质阳性细胞大多为反应性星形胶质细胞形态；损伤侧胼胝体阳性细胞基本呈放射状胶质细胞(RGCs)形态.结论 TBI后损伤区周围脑组织RGCs样细胞可能与皮质神经再生和神经功能恢复有关.
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海马放射状胶质细胞体外诱导激活后的PEBP mRNA表达变化
目的:探讨切割穹窿海马伞侧海马提取液对海马放射状胶质细胞中磷脂酰乙醇胺结合蛋白(PEBP)mRNA表达的影响.方法:将培养的海马胶质细胞接种于培养板中.分成诱导组和对照组,诱导组中加入含5%切割穹窿海马伞侧海马提取液的DMEM～12培养液,对照组加入单纯的细胞培养液.培养7d后,提取总RNA,然后逆转录合成cDNA,用real-time PCR观察诱导组及切割组中PEBP mRNA的表达情况.结果:PEBP mRNA在放射状胶质细胞中能够表达,诱导组的表达比对照组明显增加(P<0.05).结论:表达增加的PEBP mRNA可能与切割侧海马提取液"激活"的放射状胶质细胞向胆碱能神经元分化有关.
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神经前体细胞迁移研究现状
神经前体细胞(NPC)迁移是神经干细胞(NSC)分化过程中必经阶段。NPC迁移模式包括放射状迁移和正切迁移。放射状胶质细胞和Slit及Nephrin蛋白具有NPC迁移导向作用。研究NPC迁移机制对于发育神经生物学和NSC临床应用治疗中枢神经系统疾病具有重要的意义。
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放射状胶质细胞的研究进展
脊椎动物中枢神经系统(central neural system,CNS)发育过程中,有一类细胞与CNS的发育密切相关一神经干细胞(neural stem cells,NSCs),目前已知的NSCs主要有3种:神经上皮细胞、放射状胶质细胞(radial glial cells,RGCs)、基祖细胞.
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肝脏X受体β对围生期小鼠海马细胞增殖以及放射状胶质细胞纤维形成的影响
目的 观察肝脏X受体β(liver X receptor β,LXRβ)对围生期小鼠海马细胞增殖以及放射状胶质细胞纤维形成的影响.方法 在胚胎发育18.5 d(E18.5)和生后第2天(P2)行海马免疫组织化学方法检测,分别采用细胞增殖标记增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA),放射状胶质细胞或前体细胞标记Nestin以及放射状胶质细胞标记脑脂质结合蛋白(brain lipid binding protein,BLBP),比较野生小鼠和LXRβ敲除小鼠的表达差异.结果 在小鼠E18.5和P2,LXRββ在海马有丰富表达；在小鼠E18.5,LXRββ敲除小鼠中海马齿状回PCNA细胞数量明显减少(P＜0.01),BlBP标记的放射状胶质细胞纤维数量减少(P＜0.05),胞体无明显改变(P＞0.05).P2与E18.5相比,PCNA阳性细胞数轻微增加,敲除小鼠与野生小鼠相比,PCNA阳性细胞数明显减少(P ＜0.05);BLBP标记的放射状胶质细胞胞体数量轻微增加,但敲除小鼠与野生小鼠相比,胞体数量无明显改变(P＞0.05),纤维数量明显减少(P＜0.05),在E18.5和P2,Nestin阳性细胞的分布与BLBP一致,但敲除小鼠中纤维出现断裂.结论 LXRββ参与围生期小鼠海马的细胞增殖以及放射状胶质细胞纤维形成.
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切割穹窿海马伞后海马齿状回内Lhx8的表达变化及其对RGCs向胆碱能神经元分化的影响
目的:明确Lhx8在SD大鼠切割穹窿海马伞后海马齿状回颗粒下层和门区中的表达变化.方法:切割SD大鼠穹窿海马伞,成功制备海马去神经支配动物模型后,通过Western Blot的方法检测切割后第1、3、7、14、21、28 d海马中Lhx8蛋白的表达变化;通过免疫组织化学方法检测切割后第7天海马齿状回颗粒下层和门区中Lhx8阳性细胞的表达定位,并通过免疫荧光化学方法检测Lhx8/ChAT双标阳性细胞的共定位情况;切割SD大鼠穹窿海马伞并制备海马提取液,将其加入至细胞培养液中,模拟体内海马神经再生微环境,检测培养的海马放射状胶质细胞(radial slia cells,RGCs)向胆碱能神经元分化的情况.结果:切割穹窿海马伞后第7d,Lhx8蛋白表达量较其他各时相点明显增高;海马齿状回颗粒下层和门区中Lhx8阳性细胞数目和光密度也明显高于正常侧,Lhx8/ChAT双标阳性细胞数目也较正常侧增多;体外细胞培养,切割穹窿海马伞侧海马提取液也较正常侧海马提取液更能促进海马放射状胶质细胞向胆碱能神经元的分化.结论:切割穹窿海马伞后,Lhx8表达明显上调,与海马齿状回的胆碱能神经再生有关.
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海马放射状胶质细胞的体外诱导激活及其意义
为探讨海马放射状胶质细胞在切割穹窿海马伞侧海马提取液的诱导下形态发生的变化,将培养的海马胶质细胞接种于24孔培养板中,分成诱导组和对照组,诱导组加入含5%切割穹窿海马伞侧海马提取液的DMEM/F12培养液,对照组加入单纯的细胞培养液,分别于培养后1、3、7和14 d时行BLBP免疫荧光检测和Hoechst标记.计算两组各天时BLBP阳性细胞占Hoechst阳性细胞的百分比,并用Leica Qiwn 图像处理软件检测BLBP阳性细胞的周长和面积(含突起).Stata8.0统计软件行组间比较.结果显示,1 d时诱导组BLBP阳性细胞的比例稍高于对照组,两组细胞胞体均较小,突起均较短较细,无明显差异;3 d时,诱导组BLBP阳性细胞的比例明显高于对照组,且胞体较大,突起较粗较长;7 d时诱导组BLBP阳性细胞的比例明显高于对照组达到高峰,胞体更大,突起更粗更长交织成网;14 d时两组BLBP阳性细胞的比例均稍有降低,但诱导组的比例仍明显高于对照组,两组细胞的胞体稍变小,突起稍变细变短.上述结果提示,切割穹窿海马伞侧海马提取液可明显地诱导BLBP阳性放射状胶质细胞增殖,并使胞体变大,突起变粗变长,呈"激活"状态.
