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Reelin与小脑发育——Notch1信号通路的调节作用
目的 探讨Reelin在小脑放射状胶质细胞、神经干细胞和普肯耶细胞迁移和分布中的作用,并探讨Notch信号通路在其中的作用.方法 取WT小鼠和reeler小鼠胚胎9d至生后60d的脑部共148例,运用免疫荧光技术检测两组小鼠小脑发育中放射状胶质细胞、神经干细胞、普肯耶细胞及激活型Notch1受体的表达.结果 Reeler小鼠小脑发育中放射状胶质细胞极性紊乱导致迁移阻滞于内颗粒层,过早分化,分子层中数量减少(P＜0.01);Sox2阳性的干细胞启动迁移较慢,随后未得到适当的终止信号越过普肯耶细胞层进入外颗粒层,野生型小鼠该细胞并不迁移进入外颗粒层;普肯耶细胞多数不能迁移至分子层大量阻滞于内颗粒层中形成细胞团;激活型的Notch1受体在reeler小鼠小脑中表达减少.结论 Reelin在小脑神经干细胞、胶质细胞、普肯耶细胞发育和片层化分布中有重要作用,并且Notch1信号通路参与Reelin介导的小脑发育.
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Reelin在阿尔茨海默病小鼠发病中的作用
目的 探讨阿尔茨海默病(AD)小鼠病理改变、Reelin和Notchl的表达变化及DNA甲基化状态的改变,为深入了解阿尔茨海默病的发病机制提供理论依据.方法 以淀粉样蛋白前体(APP)/早老素-1(PS1)双转基因小鼠为AD模型、同窝野生型小鼠为对照组,两组小鼠共计184只,利用高尔基染色、透射电子显微镜、免疫荧光染色、免疫印迹等技术检测AD模型鼠病理改变、Reelin和Notchl的表达变化及DNA甲基化状态的改变.结果 AD小鼠在约6个月时开始出现淀粉样斑沉积、神经元纤维出现缠结等病理改变;AD小鼠发病后,星形胶质细胞和小胶质细胞在淀粉样斑周围聚集增多,随病情加重逐渐增加;Reelin在淀粉样斑周围聚积形成斑块,随病情加重逐渐增多;全长Notchl受体和其活性Notch细胞内片段(NICD)在AD鼠脑部表达减少;AD小鼠脑部甲基化状态减弱,淀粉样斑中有DNA片段,但甲基化状态消失,DNA甲基转移酶1(Dnmt1)和Dnmt3a在AD小鼠中表达减少.结论 AD小鼠脑内淀粉样斑沉积,促使胶质细胞聚集、Reelin聚积形成斑块、Notchl受体表达下降及甲基化状态减弱,进一步加剧AD神经功能紊乱.
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转化生长因子β1诱导人肾小管上皮细胞转分化：Notch1受体阻断剂的影响
背景：研究发现，在病理状态下各种细胞可通过转化生长因子β1的介导，促进肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化为肌成纤维细胞，进而加速肾小管间质纤维化的进展。
目的：验证Notch1受体特异性阻断剂γ-分泌酶抑制剂DAPT能否有效阻断、部分逆转或者完全逆转转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化。
方法：以体外培养的人近端肾小管上皮细胞株HK-2细胞为观察对象，建立转化生长因子β1诱导的肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化体外模型，实验分为空白对照组、10μg/L转化生长因子β1组、转化生长因子β1(10μg/L)+γ-分泌酶抑制剂DAPT(5μmol/L)组、转化生长因子β1(10μg/L)+γ-分泌酶抑制剂DAPT(5μmol/L)部分延迟加入组、转化生长因子β1(10μg/L)+γ-分泌酶抑制剂DAPT(5μmol/L)延迟加入组。分别于12，24，48，72 h，在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化；用免疫组织化学法和RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白、E-钙粘连素蛋白和mRNA表达变化。
结果与结论：①在干预后在12，24，48，72 h，与空白对照组相比较，转化生长因子β1组α-平滑肌肌动蛋白蛋白和mRNA表达均明显增加(P <0.05), E-钙粘连素蛋白和mRNA表达逐渐减少(P <0.05)。②转化生长因子β1+γ-分泌酶抑制剂DAPT组α-平滑肌肌动蛋白的蛋白和mRNA、E-钙粘连素蛋白和mRNA的表达各时间段均接近空白对照组(P >0.05)。③γ-分泌酶抑制剂DAPT部分延迟加入组，α-平滑肌肌动蛋白的蛋白和mRNA的表达在12 h增加(P <0.05)，之后其表达逐渐减少(P <0.05)，E-钙粘连素蛋白表达在24 h开始减少(P <0.05)，之后逐渐增加，E-钙粘连素mRNA各时间段都与空白对照组相接近，72 h时α-平滑肌肌动蛋白与E-钙粘连素的蛋白及mRNA表达均与空白对照组无显著差异(P >0.05)。④与空白对照组相比较，延迟加入组各时间点的α-平滑肌肌动蛋白的蛋白表达逐渐增加(P <0.05), E-钙粘连素蛋白的表达逐渐减少(P <0.05)，但72 h时E-钙粘连素蛋白表达接近空白对照组。结果表明Notch1受体阻断剂γ-分泌酶抑制剂DAPT能够阻断、部分逆转转化生长因子β1所诱导的肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化，但不能完全逆转其所诱导的肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化。 -
苦参碱对Raji细胞增殖及Notch信号通路的影响
目的 探讨苦参碱对淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖及Notch信号通路的影响.方法 试验分为5组:对照组(0 g/L)和4个苦参碱组(0.5、0.75、1.0、1.5 g/L),分别于苦参碱作用于Raji细胞24、48、72 h后,采用MTr法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布,RT-PCR法及Western blot法检测Notch1受体及下游靶基因Hes1 mRNA转录及蛋白的表达.结果 不同浓度苦参碱均有抑制Raji细胞增殖的作用,且随药物浓度增加及作用时间延长,抑制作用更明显;苦参碱可明显诱导Raji细胞凋亡;经苦参碱1.0g/L处理48 h后,G1期细胞减少(P＜0.05),S期细胞增多(P＜0.05),Notch1受体及下游靶基因Hes1 mRNA转录水平及蛋白表达水平均明显下调(P＜0.01).结论 苦参碱可抑制淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖,且呈浓度-时间依赖性,并诱导细胞凋亡,使细胞周期停留于S期,可能通过直接或间接下调Notch信号通路相关基因表达而实现.
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小分子干扰RNA沉默Notch1后增加胰腺癌细胞凋亡活性而提高吉西他滨化疗敏感性
目的:探讨应用小分子干扰RNA (siRNA)沉默Notch1信号通路对胰腺癌吉西他滨化疗敏感性的影响及其可能机制.方法:Notch1 siRNA转染AsPC-1、BxPC-3、MIAPaCa-2和Panc-1这4种胰腺癌细胞株.实时PCR检测胰腺癌细胞株Notch1受体相对表达量;应用Notch1 siRNA转染后,CCK-8法计算吉西他滨(10μmo1/L)作用时细胞抑制率,蛋白质印迹法检测促凋亡蛋白Bax表达水平,CaspACETM比色法检测caspase 3活性.结果:4株胰腺癌细胞中BxPC-1Notch1受体相对表达量高,Panc-1低.Notch1 siRNA转染组吉西他滨作用抑制率较对照siRNA转染组明显增高,同时伴随促凋亡蛋白Bax表达上调,caspase 3活性明显增高(均P＜0.05).结论:应用siRNA降低Notch1信号通路活性可通过激活凋亡活性而增加胰腺癌吉西他滨化疗敏感性.
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Notch1受体对兔皮片移植模型血管密度影响的实验研究
目的:在兔皮片移植模型中,通过使用γ-分泌酶阻断剂阻断Notch1/Notch信号通路,研究Notch1受体表达对皮片移植中血管密度的作用,进一步探讨其对血管新生的影响.方法:将60只实验兔按随机分为4组,即阻断剂组、假手术组、模型组和正常对照组,每组15只.造模后分组干预,并于术后2、5、8d从每组随机抽取5只实验动物,心脏采血和切取移植皮片吻合区皮片组织.通过ELISA检查血清样品中Notch1受体蛋白的含量,用免疫组化检测皮片吻合区的血管密度.结果:术后2、5、8d的血管密度阻断剂组与模型组、假手术组及正常对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);模型组和假手术组、正常对照组术后2、5、8d的血管密度两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);模型组术后5、8d移植皮片的血管密度逐渐增高,与术后2d比较,差异有统计学意义(P＜0.05),但术后第5、8天相比较,差异无统计学意义;假手术组和正常对照组2、5、8d的血管密度两两比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).阻断剂组与正常对照组血清Notch1受体蛋白含量比较,差异无统计意义(P＞0.05),但假手术组、模型组与阻断剂组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);模型组术后5d与术后2d血清Notch1受体蛋白含量比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:Notch1受体在兔皮片移植模型中可促进血管新生,在术后5d内其血清中蛋白表达浓度与血管密度成正比;抑制Notch1受体的表达,可明显降低兔皮片移植模型中的血管密度.
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Notch1在喉癌组织中的表达及意义
目的 探讨喉癌组织中Notch1蛋白的表达及与患者临床病理资料的关系和对预后的影响.方法 采用免疫组化Envision二步法检测62例喉癌标本中Notch1的表达,同时选取15例不典型增生、10例声带白斑、10例声带息肉标本作对照,结合患者临床病理资料分别进行分析.结果 62例喉癌组织中Notch1蛋白高表达率61.3％ (38/62),低表达38.7％(24/62),其高表达率与不典型增生、声带白斑及声带息肉相比差异均有统计学意义(P＜0.01),Notch1高表达与T分级、临床分期及病理分级显著相关(P＜0.05).单因素分析Notch1高表达组总生存率较低表达组高(P＜0.05),无瘤生存率两组差异无统计学意义(P＞0.05),多因素分析复发、临床分期及Notch1表达情况对生存率影响较大,复发、高分期患者和Notch1低表达组生存期短.结论 Notch1在喉癌发生、发展中起重要作用,在评估喉癌预后方面有一定价值.
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Notch1受体和配体分子Jagged1蛋白在肝癌组织中的表达及意义
目的 探讨Notch1及Jagged1蛋白在肝脏肿瘤中的表达特点及其与肝癌的临床病理学特点的关系.方法 采用免疫组织化学SP法检测65例肝癌组织及其相应癌旁正常组织中Notch1和Jagged1蛋白的表达.结果 在肝癌和癌旁正常组织中,Notch1的阳性表达率分别为16.9％和90.8％；Jagged1的阳性表达率分别为10.9％和86.2％,两组间差异均有显著性(P=0.000).Notch1受体和Jagged1配体分子的表达与患者年龄、性别,肿瘤大小无关；Notch1受体表达与肝癌组织学分型、Edmondson分级及有无淋巴结转移无关(P＞0.05)；而Jagged1配体表达则与肝癌组织学分型、Edmondson分级及有无淋巴结转移有关(P＜0.05)；在肝癌组织中Notch1与Jagged1的表达呈正相关(r1=0.301,P =0.005).结论 Notch1蛋白和Jagged1蛋白可以作为诊断肝癌的特异性指标,也有望成为肝癌基因治疗的新靶点.
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Notch1受体在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系
目的 探讨Notch1受体与乳腺癌患者的临床病理特征及预后的关系.方法 应用免疫组化技术检测106例乳腺癌组织中Notch1受体、ER、PR、CerbB-2受体表达情况,分析其与临床病理特征及预后的相关性.结果 乳腺癌组织中Notch1受体表达明显高于癌旁正常组织(P＜0.05);Notch1受体表达与CerbB-2具有相关性(P＜0.05),与ER、PR无显著相关性(P＞0.05);Notch1受体高表达组5年生存率低于低表达组(P＜0.05).结论 乳腺癌组织中Notch1受体表达明显高于癌旁正常组织;Notch1受体表达与CerbB-2具有相关性,推测Notch1受体可能与CerbB-2存在交互作用;Notch1受体高表达与预后不良有关.
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加味凉血消风散调控寻常型银屑病(血热证)治疗前后外周血白细胞Notch通路中Notch1、Hes-1表达的初探
目的:探讨寻常型银屑病(血热证)患者外周血中性白细胞Notch信号通路Notch1受体及下游靶基因Hes-1表达情况,以及“加味凉血消风散”对其治疗前后Notch1受体及s下游靶基因Hes-1表达的影响.方法:分离30例寻常型银屑病(血热证)患者治疗前、后外周血白细胞,以β-actin为内参,采用RT-PCR定量检测Notch1受体及下游靶基因Hes-1的表达,治疗前并与健康人相比较.结果:健康人与寻常型银屑病(血热证)患者Notch1的表达(P＜0.05),两者有统计学意义;健康人与寻常型银屑病(血热证)患者Hes-1的表达(P＜0.05),两者有统计学意义,寻常型银屑病(血热证)患者外周血中性白细胞Notch信号通路Notch1受体及下游靶基因Hes-1高表达.经配对t检验Notch1在治疗前后(P＜0.01),有统计学意义;采用非参数Wilcoxon符号配对设计资料的秩和检验,治疗前后Hes-1扩增值(P＜0.05),有统计学意义,表明“加减凉血消风散”可下调Notch1基因、Hes-1基因的表达.结论:我们推测加味凉血消风散可能通过减少银屑病患者外周血中性白细胞的活化来发挥其抗炎作用.但中性白细胞是否将通过细胞间Notch信号通路调控影响着角质形成细胞的角化,加味凉血消风散是否能阻断其分化信息的传递有待我们进一步研究.
