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膀胱移行细胞癌CDH1基因启动子C/A单核苷酸多态性与其蛋白表达关系的研究
目的探讨膀胱移行细胞癌(BTCC)中E-钙粘连素(CDH1)基因启动子-160处C/A单核苷酸多态性(SNP)与CDH1表达的关系.方法BTCC患者36例,男24例,女12例,分别取血液和膀胱肿瘤组织标本.对照组36例,为非肿瘤患者,男30例,女6例,取膀胱组织标本.PCR-限制性片段长度多态性分析法检测血液标本中CDH1基因启动子上游-160处C/A SNP.免疫组化方法检测组织CDH1的表达情况.比较2组组织CDH1表达情况,分析BTCC组C/A SNP与CDH1表达的关系.结果BTCC组和对照组CDH1阳性率分别为61%(22/36)和86%(31/36),P＜0.05.BTCC组14例CDH1表达阴性者中,AA基因型8例、AC型3例、CC型3例,A等位基因频率为68%(19/28);22例CDH1表达阳性者中,AA型3例、AC型11例、CC型8例,A等位基因频率为39%(17/44);2组中AA基因型发生率与AC、CC基因型比较差异均有统计学意义(P＜0.05),A等位基因频率比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论CDH1基因启动子-160处C/A SNP在TBCC的CDH1表达过程中可能具有重要作用,A等位基因对CDH1表达下调可能发挥主要作用.
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白细胞介素1β诱导肾小管上皮细胞的转分化
目的:观察白细胞介素1β对肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化及细胞分泌功能的影响.方法:实验于2005-06/2006-01在泸州医学院附属医院传染免疫研究室完成.以体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)为研究对象,给予白细胞介素1β(10 μg/L)刺激,12,24,48,72 h后在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;免疫双标法检测α-平滑肌肌动蛋白和E-钙粘连素的表达;ELISA法测定培养细胞分泌的纤维连接蛋白含量.结果:白细胞介素1β刺激48 h后肾小管上皮细胞转变为明显类似成纤维细胞形态;刺激12 h即可见α-平滑肌肌动蛋白的表达由64.80±2.19增加到83.23±2.71(P＜0.05),E-钙粘连素的表达由81.77±1.27减少到64.50±1.31(P＜0.05),随刺激时间延长上述变化越明显,72 h α-平滑肌肌动蛋白表达增加到170.53±3.94;E-钙粘连素表达减少到26.20±2.32.细胞培养上清液中纤维连接蛋白含量随时间延长增加(P＜0.05),白细胞介素1β刺激72 h时纤维连接蛋白增加1倍.结论:白细胞介素1β可诱导肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化,增加纤维连接蛋白的分泌.
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转化生长因子β1诱导人肾小管上皮细胞转分化：Notch1受体阻断剂的影响
背景：研究发现，在病理状态下各种细胞可通过转化生长因子β1的介导，促进肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化为肌成纤维细胞，进而加速肾小管间质纤维化的进展。
目的：验证Notch1受体特异性阻断剂γ-分泌酶抑制剂DAPT能否有效阻断、部分逆转或者完全逆转转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化。
方法：以体外培养的人近端肾小管上皮细胞株HK-2细胞为观察对象，建立转化生长因子β1诱导的肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化体外模型，实验分为空白对照组、10μg/L转化生长因子β1组、转化生长因子β1(10μg/L)+γ-分泌酶抑制剂DAPT(5μmol/L)组、转化生长因子β1(10μg/L)+γ-分泌酶抑制剂DAPT(5μmol/L)部分延迟加入组、转化生长因子β1(10μg/L)+γ-分泌酶抑制剂DAPT(5μmol/L)延迟加入组。分别于12，24，48，72 h，在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化；用免疫组织化学法和RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白、E-钙粘连素蛋白和mRNA表达变化。
结果与结论：①在干预后在12，24，48，72 h，与空白对照组相比较，转化生长因子β1组α-平滑肌肌动蛋白蛋白和mRNA表达均明显增加(P <0.05), E-钙粘连素蛋白和mRNA表达逐渐减少(P <0.05)。②转化生长因子β1+γ-分泌酶抑制剂DAPT组α-平滑肌肌动蛋白的蛋白和mRNA、E-钙粘连素蛋白和mRNA的表达各时间段均接近空白对照组(P >0.05)。③γ-分泌酶抑制剂DAPT部分延迟加入组，α-平滑肌肌动蛋白的蛋白和mRNA的表达在12 h增加(P <0.05)，之后其表达逐渐减少(P <0.05)，E-钙粘连素蛋白表达在24 h开始减少(P <0.05)，之后逐渐增加，E-钙粘连素mRNA各时间段都与空白对照组相接近，72 h时α-平滑肌肌动蛋白与E-钙粘连素的蛋白及mRNA表达均与空白对照组无显著差异(P >0.05)。④与空白对照组相比较，延迟加入组各时间点的α-平滑肌肌动蛋白的蛋白表达逐渐增加(P <0.05), E-钙粘连素蛋白的表达逐渐减少(P <0.05)，但72 h时E-钙粘连素蛋白表达接近空白对照组。结果表明Notch1受体阻断剂γ-分泌酶抑制剂DAPT能够阻断、部分逆转转化生长因子β1所诱导的肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化，但不能完全逆转其所诱导的肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化。 -
转染miR-544a对肺癌细胞侵袭和转移能力的影响
目的 探讨miR-544a对肺癌细胞的侵袭和转移能力的影响及其分子机制.方法 用miRNA芯片对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系95C和95D进行miRNA谱系分析,并用荧光定量PCR验证其miR-544a表达水平;用Targetscan软件预测miR-544a的靶基因;Transwell实验观察细胞的侵袭转移能力的变化;western blot验证其表达.结果 miRNA芯片及荧光定量PCR结果显示,与95C细胞(1.00±0.00)比较,miR-544a在95D细胞中表达上调(2.95±0.26,t=12.94,P＜0.05);Transwell实验结果显示,95C转染miR-544a mimic后增加(32.00±1.00,q=18.67,P＜0.01),95D转染miR-544a inhibitor后,侵袭和转移能力降低(11.00±1.00,g=13.67,P＜0.01);Targetscan软件预测E-钙粘连素(CDH1)可能为miR-544a的靶基因;western blot显示,95C转染miR-544amimic后,CDH1表达下调,vimentin表达上调(0.202±0.017,0.574±0.009,q分别为63.86,9.45,P均＜0.01);而95D转染miR-544a inhibitor后,CDH1表达上调,而vimentin表达下调(0.769±0.014,0.320±0.020,q分别为18.67,5.99,P均＜0.01).结论 miR-544a可能通过下调CDH1和上调vimentin的表达来促进肺癌细胞的侵袭和转移.
关键词： 微小RNA-544a 非小细胞肺癌 E-钙粘连素 波形蛋白 侵袭 -
核因子-κB和E-钙粘连素在膀胱移行细胞癌中的表达
目的:探讨核因子-κB(NF-κB)及E-钙粘连素(E-cadherin)在膀胱移行细胞癌中的表达和意义.方法:应用免疫组化SABC法检测60例膀胱移行细胞癌组织及10例正常膀胱组织中的NF-κB蛋白及E-cadherin蛋白的表达.结果:60例膀胱移行细胞癌组织中46例(76.7%)NF-κB蛋白阳性表达,正常膀胱组织中1例(10.0%)(P<0.05).60例膀胱移行细胞癌组织中24例(40.0%)E-cadherin蛋白阳性表达,正常膀胱组织中8例(80.0%)(P<0.05).60例膀胱移行细胞癌标本中,NF-κB蛋白及E-cadherin蛋白的表达在不同性别及年龄分组中差异无统计学意义(P>0.05),随着组织学分级、临床分期的升高和淋巴结转移的出现,NF-κB蛋白表达增加,E-cadherin蛋白表达减少(P<0.05);两者的变化趋势呈统计学负相关(r=-0.428,P<0.05).结论:NF-κB和E-cadherin与肿瘤的组织学分级、临床分期、琳巴结转移有无有关,但与年龄、性别无关.NF-κB蛋白与E-cadherin蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达呈统计学负相关,与肿瘤的进展有关,是判断其侵袭性及转移趋势极具价值的指标.
