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人参皂苷降低β淀粉样蛋白诱导THP-1单核细胞ERK的磷酸化和细胞因子含量
目的观察人参皂苷对β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)1-40诱导的THP-1单核细胞系表达细胞因子和磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)的影响.方法用Western blotting方法测定磷酸化ERK的表达,放射免疫法测定细胞培养上清液中的细胞因子IL-1β、IL-8和肿瘤坏死因子(TNF)-α的浓度.结果Aβ刺激组磷酸化ERK和细胞因子IL-1β、IL-8和TNF-α的表达明显高于对照组.人参皂苷(50、100和150 mg/L可减少Aβ诱导THP-1细胞磷酸化ERK和细胞因子IL-1β、IL-8和TNF-α的表达.与模型组比较,人参皂苷治疗组Aβ1-40诱导的THP-1细胞磷酸化ERK和细胞因子(IL-1β、IL-8和TNF-α)的表达明显降低.结论人参皂苷可抑制Aβ诱导的ERK磷酸化,进一步减少细胞因子的产生.
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牙龈卟啉单胞菌感染对THP-1源性巨噬细胞胆固醇代谢的影响
目的 以THP-1来源的巨噬细胞为研究对象,初步研究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)感染促进巨噬细胞形成泡沫细胞的影响.方法 以160 nmol/L佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导THP-1单核细胞48 h,使其分化为巨噬细胞.在负荷50 μg/mL低密度脂蛋白的条件下,建立P.g感染巨噬细胞的体外模型,采用胆固醇测定法检测细胞内胆固醇酯含量的变化.结果 经160 nmol/L PMA诱导48 h后,THP-1单核细胞成为巨噬细胞.6h时P.g感染组细胞胆固醇酯(CE)与总胆固醇(TC)比值(CE/TC)为0.445±0.386,24 h时,P.g感染组CE/TC值为0.557±0.430,均显著高于空白对照组和6h组(P＜0.05).结论 本研究成功建立了P.g感染巨噬细胞的体外模型,P.g感染可显著促进巨噬细胞总胆固醇和胆固醇酯含量增加,从而可能参与心血管疾病(cardiovascular diseases,CVD)发生和发展.
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IL-6/STAT3通路对THP-1单核细胞环氧化酶2表达的影响
目的 探讨人THP-1单核细胞中白细胞介素6(IL-6)/信号转导与转录激活子3(STAT3)通路与环氧化酶2(COX-2)表达之间的关系.方法 以人THP-1单核细胞株作为研究对象,分别设置0至48 h不同时间点,检测IL-6对STAT3磷酸化和COX-2表达的时效性影响.用100 μmol/L S3I-201(STAT3通路选择性抑制剂)对THP-1单核细胞预处理24 h,再经10 μg/L IL-6作用相应时间,将THP-1单核细胞分为4组:对照组、S3I-201组、IL-6组及IL-6+S3I-201组,检测STAT3磷酸化及COX-2表达水平变化.采用实时荧光定量PCR方法检测THP-1单核细胞COX-2的mRNA表达量,Western blot方法检测THP-1单核细胞STAT3磷酸化水平与COX-2的蛋白表达量.结果 THP-1单核细胞经IL-6作用后STAT3的磷酸化及COX-2的表达均出现时效性激活,IL-6刺激5 min后STAT3磷酸化水平即显著增加(P＜O.001),同时COX-2 mRNA和蛋白水平均明显上调,分别于1h和2h达到峰值(P＜0.001).与对照组相比,S3I-201组COX-2 mRNA及蛋白表达水平均降低(P＜0.01);与IL-6组相比,IL-6+S3I-201组STAT3磷酸化水平下降(P＜0.001),COX-2 mRNA表达水平降低(P＜0.001),同时COX-2蛋白表达受到明显抑制(P＜0.05).结论 IL-6能够激活THP-1单核细胞STAT3通路,其可能通过催化下游COX-2的表达影响动脉粥样硬化性疾病进程.
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亲环素A启动单核细胞炎症性募集的机制
目的 探讨亲环素A在单核细胞参与氧化应激炎症反应中的作用.方法 人类单核细胞系THP-1细胞常规体外培养,以亲环素A作为氧化应激炎症反应的主要活性氧诱导刺激因子,Transwell法检测亲环素A对单核细胞迁移趋化的影响；ELISA检测单核细胞培养液中主要炎症反应因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量变化；明胶酶谱法测定基质金属蛋白酶9(MMP-9)的活性变化；Western blot检测核因子κB(NF-κB)炎症信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)炎症信号通路的激活.结果 亲环素A可以诱导单核细胞迁移趋化,促进单核细胞分泌炎症反应因子IL-6;亲环素A通过MAPK-NF-κB炎症信号通路增强MMP-9活性.结论 亲环素A诱导单核细胞迁移趋化,促进单核细胞分泌炎症因子,显示了其启动单核细胞炎症性募集的作用.
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脱氢表雄酮通过抑制血管细胞粘附分子1的表达发挥抗动脉粥样硬化作用
目的 研究脱氢表雄酮能否通过抑制血管细胞粘附分子1的表达发挥抗动脉粥样硬化作用以及维甲酸受体激动剂对这一作用有无影响.方法 高脂饮食构建兔动脉粥样硬化模型并加脱氢表雄酮干预,10周后检测各组兔血清脂质水平及主动脉斑块情况.采用免疫组织化学及逆转录聚合酶链反应方法观察脱氢表雄酮对高脂喂饲兔主动脉壁血管细胞粘附分子1表达的影响.体外培养THP-1单核细胞,采用免疫细胞化学及逆转录聚合酶链反应方法观察不同浓度脱氢表雄酮对氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1细胞表达血管细胞粘附分子1的影响.结果 脱氢表雄酮干预的高脂喂饲兔主动脉内膜厚度及粥样斑块面积相对动脉粥样硬化模型组兔分别降低59%和48%;同时兔主动脉血管细胞粘附分子1蛋白的表达在脱氢表雄酮干预后(0.1920±0.0034)较高脂喂饲兔(0.3846±0.0198)显著减弱,血管细胞粘附分子1 mRNA的表达(0.6856±0.0286)与高脂喂饲兔(1.0893±0.1089)相比也明显减少.体外培养的THP-1细胞中,加入不同浓度的脱氢表雄酮均可降低氧化型低密度脂蛋白诱导细胞的血管细胞粘附分子1表达,在脱氢表雄酮浓度为5 μmol/L时THP-1细胞中血管细胞粘附分子1 mRNA的表达(0.2988±0.0312)较氧化型低密度脂蛋白诱导组(0.6236±0.0237)下降明显.加入全反式维甲酸对脱氢表雄酮的作用没有显著影响(P＞0.05).结论 脱氢表雄酮能够抑制高脂喂饲兔主动脉壁及氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1细胞内血管细胞粘附分子1的表达,这可能是其发挥抗动脉粥样硬化作用的机制之一,而补充维甲酸受体激动剂对这一过程中血管细胞粘附分子1的表达没有明显影响.
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膜表面核仁素对脂多糖所致TNF-α和IL-1β表达的影响
目的:观察人THP-1细胞膜表面核仁素对脂多糖(LPS)所致TNF-α和IL-β表达的影响.方法:采用免疫荧光、免疫印迹等方法观察核仁素在THP-1细胞膜表面表达.利用抗体封闭策略使膜表面核仁素失活,以LPS刺激THP-1细胞的炎症细胞模型,采用逆转录PCR和酶联免疫吸附实验观察炎症因子TNF-α和IL-1β的表达与分泌.结果:免疫荧光结果显示核仁素呈斑点状位于细胞膜表面;免疫印迹检测显示核仁素和Fas存在于THP-1细胞膜蛋白中.逆转录PCR结果显示LPS(1 000μ/L)处理1,2,3,4 h后,IL-1β和TNF-αmRNA均表达上调,而核仁素抗体封闭明显抑制二者的表达.酶联免疫吸附检测发现,LPS(1 mg/L)刺激4,12,24 h后,促进THP-1细胞分泌TNF-α和IL-1β,而核仁素抗体封闭显著抑制LPS所致的炎症因子释放(P<0.05).结论:THP-1细胞膜表面核仁素参与介导LPS所致早期炎症介质IL-1β和TNF-α的表达与分泌.
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血红素氧化酶-1抑制氧化低密度脂蛋白诱导THP-1单核细胞表达单核细胞趋化蛋白-1mRNA
目的:探讨血红素氧化酶(HO)-1对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的THP-1单核细胞上单核细胞趋化蛋白(MCP)-1 mRNA表达的影响.方法:不同浓度(0、25、50、100、200 mg/L) ox-LDL,作用不同时间(0、12、18、24、48h),刺激THP-1单核细胞;实时荧光定量(RT)-PCR检测MCP-1 mRNA表达.用锌原卟啉和钴原卟啉(CoPP)Ⅸ(均为10 μ mol/L)干预THP-1单核细胞12h后,再用ox-LDL (100 mg/L)刺激24 h;RT-PCR分别检测MCP-1和HO-1 mRNA表达.结果:ox-LDL呈浓度-时间依赖性上调MCP-1 mRNA表达(P＜0.01).与对照组比,CoPP IX组HO-1 mRNA表达明显升高(P＜0.01);与100mg/L ox-LDL组比,CoPP IX组MCP-1 mRNA表达明显下降(P＜0.01).结论:ox-LDL可上调THP-1单核细胞MCP-1的表达;诱导HO-1高表达可抑制ox-LDL诱导的THP-1源单核细胞MCP-1 mRNA表达.
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Fonsecaea monophora色素对人巨噬细胞炎症细胞因子表达的影响
目的 探究Fonsecaea monophora(F.monophora)色素对THP-1来源的人巨噬细胞炎症细胞因子表达的影响.方法 将THP-1人单核细胞诱导为巨噬细胞,分别与F.monophora的标准株、色素株和白化株进行共培养,细胞免疫荧光检测细胞膜表面分子CD14和CD68的表达;定量PCR检测各组中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10和TGF-β 的表达.结果 THP-1人单核细胞诱导为巨噬细胞后,膜表面分子表达由CD14转变为CD68.与F.monophora共培养后,标准株上调IL-6、IL-10和TGF-β 的表达(P均<0.05),色素株上调IL-6和TGF-β 的表达(P均<0.05),白化株上调IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-10的表达(P均<0.05);白化株较标准株能上调IL-1β 的表达(P<0.05),标准株较色素株和白化株能上调IL-10和TGF-β 的表达(P均<0.05).结论 F.monophora标准株能促使人巨噬细胞往抗炎状态发展,白化株能促使人巨噬细胞往促炎状态发展,色素株则使人巨噬细胞处于促炎和抗炎的平衡状态,F.monophora色素可能会导致宿主炎症状态紊乱.
