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重组甲型流感病毒基质蛋白1和2通过ERK信号因子诱导小鼠气管上皮细胞产生IFN-γ
探讨重组甲型流感病毒基质蛋白1和2(rM1和rM2)通过细胞外信号调节蛋白激酶(Extracellular signal regulated kinase,ERK)诱导小鼠气管上皮细胞产生γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)作用及机制.以原代小鼠气管上皮细胞为实验模型,实验分为6组(rM1组、rM2组、甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)组、rM1+IAV组、rM2+ IAV组和正常对照组).在各组分干预细胞4h、8h、24h时,采用半定量RT-PCR法检测各组细胞中IFN-γmRNA的表达和免疫印迹法检测各组细胞中IFN-γ、ERK、磷酸化ERK (phospho-ERK,p-ERK)蛋白的表达;用抑制剂阻断ERK信号因子信号传导,观察对各组分诱导小鼠气管上皮细胞产生IFN-γ的影响.各组分干预细胞4h、8h、24h,rM1组、rM2组、IAV组、rM1+ IAV组、rM2+ IAV组细胞的IFN-γ mRNA和IFN-γ蛋白表达水平高于正常对照组(P＜0.01或P＜0.05);rM1+ IAV组、rM2+ IAV组细胞的IFN-γ mRNA和IFN-γ蛋白表达水平高于IAV组(P＜0.01或P＜0.05).在干预细胞4h,仅rM2组细胞中ERK磷酸化水平显著高于正常对照组(P＜0.01),在干预细胞8h、24h,rM1组、rM2组、IAV组、rM1+IAV组、rM2+ IAV组细胞中ERK磷酸化水平均显著高于正常对照组(P＜0.01或P＜0.05).加入ERK抑制剂,rM1组、rM2组、rM1+ IAV组、rM2+ IAV组细胞的IFN-γ mRNA和IFN-γ蛋白表达水平显著低于非抑制剂组.本研究数据表明rM1和rM2可通过上调ERK信号因子的磷酸化水平诱导小鼠气管上皮细胞中产生IFN-γ,该诱导作用在于预4h即显著表现,并维持至少24h.
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人参皂苷降低β淀粉样蛋白诱导THP-1单核细胞ERK的磷酸化和细胞因子含量
目的观察人参皂苷对β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)1-40诱导的THP-1单核细胞系表达细胞因子和磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)的影响.方法用Western blotting方法测定磷酸化ERK的表达,放射免疫法测定细胞培养上清液中的细胞因子IL-1β、IL-8和肿瘤坏死因子(TNF)-α的浓度.结果Aβ刺激组磷酸化ERK和细胞因子IL-1β、IL-8和TNF-α的表达明显高于对照组.人参皂苷(50、100和150 mg/L可减少Aβ诱导THP-1细胞磷酸化ERK和细胞因子IL-1β、IL-8和TNF-α的表达.与模型组比较,人参皂苷治疗组Aβ1-40诱导的THP-1细胞磷酸化ERK和细胞因子(IL-1β、IL-8和TNF-α)的表达明显降低.结论人参皂苷可抑制Aβ诱导的ERK磷酸化,进一步减少细胞因子的产生.
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伴颈动脉粥样硬化脑梗患者CD4+CD28null T细胞CD158j表达和ERK磷酸化水平的关系
目的 探讨伴颈动脉粥样硬化(CA)脑梗患者CD4+CD28null T细胞上CD158j的表达百分率和ERK磷酸化(p-ERK)水平的关系及对颈动脉粥样斑块不稳定的影响.方法 采用流式细胞术检测106例伴CA脑梗、33例颈动脉正常脑梗患者和50例健康人外周血CD4+CD28null T细胞数量,以及CD4+CD28null T细胞CD158j和穿孔素(perforin)的表达,36例斑块不稳定患者CD4+T细胞p-ERK水平.ELISA法检测血清IFN-γ水平.B超检查以上人群颈动脉血管内壁粥样硬化情况.结果 脑梗患者CD4+CD28nullT细胞数量、CD4+CD28null T细胞CD158j和perforin的表达,以及血清IFN-γ水平,均明显高于健康对照组(P均<0.01);CD4+CD28null T细胞数量、CD4+CD28null T细胞CD158j和perforin的表达,以及血清IFN-γ水平,在脑梗患者中由高到低依次为颈动脉不稳定斑块组、颈动脉稳定斑块组、颈动脉内-中膜厚度(IMT)增厚组和颈动脉正常组.颈动脉不稳定斑块脑梗患者CD4+CD28null T细胞CD158j的表达与p-ERK水平呈显著性正相关(P<0.01).结论 伴CA脑梗患者CD4+CD28null T细胞数量明显增多.CD158j可能通过上调p-ERK水平,促进CD4+CD28null淋巴细胞增殖,产生细胞毒效应和分泌细胞因子,终导致颈动脉粥样斑块不稳定.
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磷酸化JAK和磷酸化ERK及CyclinD1蛋白表达与舌鳞状细胞癌的关系
目的:探讨磷酸化JAK和磷酸化ERK及CyclinD1蛋白在舌鳞状细胞癌(SCC)发生、发展中的作用及其表达的相互关系.方法:应用免疫组织化学技术,检测舌鳞状细胞癌30例,正常口腔舌黏膜组织20例,轻度上皮异常增生10例,中-重度上皮异常增生20例组织中磷酸化JAK和ERK及CyclinD1蛋白的表达情况.结果:与正常口腔舌黏膜相比,pJAK在舌鳞状细胞癌组织和上皮异常增生组织中阳性率明显增高(χ2=37.54,P＜0.01),且舌SCC中pJAK的阳性率又明显高于上皮异常增生(χ2=12.28,P＜0.05).中-低分化鳞状细胞癌中pJAK的染色强度较高分化鳞状细胞癌显著升高(χ2=6.83,P＜0.05).pERK在正常口腔舌黏膜上皮、SCC组织和上皮异常增生组织中的阳性率差异无显著性.在SCC中,pJAK和CyclinD1的阳性强度呈正相关(rs=0.619,P＜0.05).pERK和CyclinD1的阳性强度无相关性(rs=0.231,P＞0.05).结论:SCC的发生与发展可能与pJAK信号传导途径诱导CyclinD1过度表达,从而促使该肿瘤细胞维持高增殖状态有关.ERK信号途径在舌鳞状细胞癌中可能不是主要的致瘤途径.
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磷酸化ERK,p38MAPK在婴幼儿血管瘤组织中的表达及意义
目的:探讨磷酸化ERK和p38MAPK信号通路在小儿血管瘤增生、消退中的作用.方法 应用免疫组化SP法检测47例血管瘤（增殖期26例、消退期21例）组织中磷酸化ERK和p38MAPK的表达情况.结果 磷酸化ERK阳性定位于细胞核,其在增殖期和消退期的阳性细胞指数分别为(67.71±12.68)％和(21.54±6.85)％；磷酸化p38MAPK阳性定位于细胞核,其在增殖期和消退期的阳性细胞指数分别为(83.78±5.25)％和(57.79±7.63)％；增生期磷酸化ERK与p38MAPK阳性表达呈正相关,而消退期呈负相关.结论 磷酸化ERK和p38MAPK参与血管瘤的增生、消退过程；ERK通路可介导内皮细胞的增生和存活,而p38MAPK可能主要在消退期传递内、外源性凋亡信号,诱导内皮细胞凋亡.
关键词： 血管瘤 婴幼儿 磷酸化ERK 磷酸化p38MAPK 免疫组化 -
ERK1/2信号通路对亚急性帕金森病MPTP模型小鼠黑质COX-2,PGE2表达的影响
目的:研究ERK1/2信号通路对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)小鼠模型中脑黑质环氧合酶2(COX-2)和前列腺素E2(PGE2)的表达调控作用,探讨多巴胺(DA)能神经元变性失活的可能机制.方法:采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型,应用免疫组织化学和免疫蛋白印记法观察小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH),COX-2,PGE2以及磷酸化ERK1/2(P-ERK1/2)的表达变化;并观察给予ERK特异性抑制剂U0126对上述因子变化的影响.结果:模型组小鼠出现典型PD样症状,在MPTP第3次注射后1 h,黑质区p-ERK1/2阳性细胞数明显增加,在MPTP第5次注射后24 h,黑质区出现大量COX-2,PGE2阳性细胞,伴有约50%的TH阳性神经元丢失;给予ERK特异性抑制剂U0126后小鼠PD样症状减轻,p-ERK1/2,COX-2,PGE2阳性细胞数明显减少,MPTP第5次注射后24 h,TH阳性细胞数较对照组仅下降25%.结论:ERK1/2通路可能参与调控COX-2及PGE2的表达而在PD发病过程中发挥重要作用,抑制ERK信号通路对帕金森病小鼠具有一定的神经保护作用.
