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三带喙库蚊中分离的西藏环状病毒全基因序列测定及分析
西藏环状病毒(Tibet orbivirus,TIBOV)是环状病毒属中的新成员,首次分离自中国西藏自治区的圆斑按蚊,本研究首次对从三带喙库蚊标本中分离到的西藏环状病毒(HN11121株)进行全基因组序列测定和分子遗传进化分析.结果显示除第2节段以外,三带喙库蚊分离的HN11121病毒株与从圆斑按蚊分离的西藏环状病毒原始分离株(XZ0906)第1～10节段核苷酸和其编码的氨基酸序列长度相同,核苷酸和氨基酸同源性分别为70.3％(S6)～98.7％(S5)和79.8％(S6)～99.8％(S10);而HN11121病毒株与XZ0906病毒株第2节段核苷酸长度分别为2 850bp和2 838bp,分别编码950和946个氨基酸,核苷酸和氨基酸同源性分别为55.8％和47.1％.病毒VP2蛋白氨基酸位点差异结果显示从三带喙库蚊分离的HN11121病毒与从圆斑按蚊分离的XZ0906相比存在390个氨基酸差异位点.基于HN11121病毒株VP1基因和VP3基因核苷酸序列的系统进化分析结果显示HN11121属于环状病毒属西藏环状病毒,但是从三带喙库蚊分离的HN11121病毒与在圆斑按蚊分离的西藏环状病毒原始分离株(XZ0906)处在不同的进化分支.以上结果提示,从三带喙库蚊分离的西藏环状病毒(HN11121)与从圆斑按蚊分离的西藏环状病毒在病毒基因组和病毒基因组分子遗传进化均存在较大差异,鉴于三带喙库蚊是我国乙脑病毒的主要传播媒介,同时该蚊种也是我国南方广泛存在的蚊虫种类,因此加强三带喙库蚊中西藏环状病毒监测对于了解西藏环状病毒的生物多态性具有重要意义.
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秦皇岛港采获外国蠓种及一新种的记述(双翅目:蠓科)
本文报道在渤海湾秦皇岛港锚地从来自美国、澳大利亚以及东南亚地区的船舶上检获外国蠓种,其中有狂怒库蠓Culicoides furens (Poey)、马克库蠓Culicoides marksi Lee et Reye,细齿蠛蠓Lasiohelea tenuidentis Yu et Wirth和丰硕细蠓Leptoconops grandis Carter等国外蠓种,以及海神蠛蠓新种Lasiohelea cymodocea Yu,Li et Nie sp.nov.,这是我国在入境国际航船上发现蠓类的首次报道.由此提示,要重视外国蠓种的入侵.
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峨眉山的库蠓及一新种描述
本文描述了采自中国四川省峨眉山的库蠓属一新种：蓝腹库蠓Culicoides cyancus Liao， Wang et Yu sp nov．和3种四川省新纪录：棒须库蠓Culicoides clavipalpes Mukerji，1931，冲绳库蠓Culicoides okinawensis Mukerji，1931，东方库蠓Culicoides orientalis Mukerji，1931的描述。所有标本均保存于军事医学科学院微生物流行病研究所医学昆虫标本馆。
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基于线粒体COⅠ基因序列进行库蠓亚属(双翅目:蠓科)近似种的分子鉴定
为了更快速、 准确地鉴别库蠓近似种以及弥补传统形态学在种类鉴定中存在的操作繁琐、 难度大等不足,本文采用DNA测序的方法获得库蠓亚属的刺螫库蠓Culicoides punctatus、 灰黑库蠓C.pulicaris和新替库蠓C.newsteadi等3种库蠓近似种的部分线粒体COⅠ基因序列,并对其进行分子鉴定;基于Kimura 2-parameter模型分析遗传距离,同时应用MEGA 6.0软件构建系统发育树.结果显示,序列经过Clustal W比对及人工校对后,上述3种库蠓的COⅠ序列长度为394 bp;遗传距离在种内和种间具显著差异(P﹤0.05);系统发育树中不同库蠓种类各自构成单系(群),同种类不同地理种群聚为一支.本研究初步证实了线粒体COⅠ序列可应用于库蠓近似种的分子鉴定.
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rDNA?ITS序列在吸血蠓分子鉴定中的应用研究
以海南、 福建等省常见库蠓为研究对象,构建基于ITS的吸血库蠓成虫分子鉴定体系.共24种库蠓的72条序列用于比较分析、 遗传距离和系统发育分析显示:24种库蠓的种间遗传距离为0.05～0.39,平均遗传距离0.25;种内遗传距离为0～0.13,平均遗传距离0.07.种间遗传距离为种内遗传距离的3.57倍,表明ITS基因具有较大的种间甚至种内变异性,是理想的靶标基因,可作为库蠓种类鉴定的分子标记.
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青藏公路沿线部分地区蠓类昆虫调查研究
目的:了解青藏公路沿线部分地区蠓科种群组成、数量动态和危害情况.方法:网捕法.结果:格尔木、纳赤台和沱沱河有细蠓、库蠓和非吸血蠓分布,其中细蠓数量多(93.96%),非吸血蠓次之(4.38%),库蠓居第3位(1.66%);随海拔高度的增加,细蠓数量递增,而库蠓和非吸血蠓减少.危害以沱沱河为严重,从时间分布看,上午10时至晚20时均有细蠓活动,并以14～17时密度高;纳赤台危害次之,从10～19时均有活动,也以细蠓为多,在11～13时密度较高;在格尔木蠓密度比上述两地为低,但从10～21时均有细蠓、库蠓和非吸血蠓交替刺叮骚扰.结论:此次调查为开展有针对性的防制,提供了科学依据.
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库蠓中盖塔病毒的分离及其分子鉴定
目的 探讨1株(SZC30)云南省库蠓分离病毒的分类及分子特征.方法 2013年7月采用灯诱的方法在云南省曲靖市师宗县五龙乡采集库蠓,采用BHK-21和C6/36细胞进行病毒分离,阳性分离物脑内接种1日龄乳鼠;分别用甲病毒属和盖塔病毒特异性引物对阳性分离物进行RT-PCR扩增、测序,用Clustal X1.83、BioEdit、DNAStar、Mega5.1等生物信息学软件进行序列分析.结果 采集到库蠓共3 500只,库蠓分为41批进行病毒分离,其中分离到一株病毒(SZC30)对BHK-21与C6/36细胞产生明显病变;分别用甲病毒属和盖塔病毒NS1特异性引物进行RT-P C R扩增结果为阳性;NS1基因序列分析结果显示SZC30株病毒与YN0540及SC1210两株中国分离的盖塔病毒位于同一进化分支内,核苷酸同源性在97％～100％之间,氨基酸同源性在97％ ～100％之间.结论 从云南省采集库蠓中分离到的SZC30株病毒为盖塔病毒.
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渤海新区库蠓采集与初筛方法讨论
目的 本文旨在讨论渤海新区库蠓采集与初筛的优方法,做好标本制作与种类鉴定的前期工作.方法 分别使用帐诱法、人诱法、挥网法和灯诱法进行采集,采用1 mm孔径(16目)分样筛进行初筛,对调查结果予以对比.结果 2017年使用四种采集法在综合港码头、隔离场、屠宰场均未捕获库蠓,2018年4-6月采用挥网法、灯诱法配合分样筛成功捕获库蠓2056只.结论 采用网扫法、灯诱法配合1 mm孔径分样筛能有效分离出库蠓样本,对标本制作和种类鉴定提供样本保障.
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基于线粒体COI基因序列进行库蠓二囊亚属近似种的分子鉴定
目的 通过采用线粒体COI基因进行库蠓近似种分子鉴定的方法,来弥补传统形态学在种类鉴定中存在的操作繁琐、难度大等不足,从而实现库蠓近似种的快速、准确鉴别.方法 采用DNA测序的方法获得库蠓属二囊亚属的林岛库蠓(C.gaponus)、标翅库蠓(C.insignipennis)、无害库蠓(C.innoxius)、连斑库蠓(C.jacobsoni)、南山库蠓(C.lansangensis)、新竹库蠓(C.liui)、长喙库蠓(C.longirostris)、异域库蠓(C.peregrinus)等8种库蠓近似种的部分线粒体COI序列,并对其进行分子鉴定;基于Kimura 2-parameter模型分析遗传距离,同时应用MEGA 6.0软件以荒川库蠓C.arakawai为外群构建系统发育树.结果 8种库蠓COI序列长度约650 bp;遗传距离在种内和种间具有统计学差异(t=119.452,P＜0.05);系统发育树中不同库蠓种类各自构成单系(群),同种类不同地理种群聚为一支.结论 本研究证实了线粒体COI序列可用于进行库蠓近似种的分子鉴定.
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库蠓核糖体DNA内转录间隔区1序列的测定与分析
目的 测定核糖体DNA内转录间隔区1(nuclear ribosomal DNA internal transcribed spacer 1,rDNA-ITS1)序列进行库蠓种类鉴别与系统发育分析,以探究rDNA-ITS1序列在库蠓分子鉴定和系统发育研究方面的适用性.方法 采用DNA扩增、纯化、克隆及测序的方法获得荒川库蠓Culicoides arakawai、凹缘库蠓C.holcus、连斑库蠓C.jacobsoni、印度库蠓C.indianus、霍飞库蠓C.huffi和肩宏库蠓C.humeralis等6种库蠓的rDNA-ITS1序列,基于Kimura 2-parameter公式计算种内和种间遗传距离,应用MEGA 6.06软件分析DNA序列碱基组成并以环纹埃蠓Allohelea annulata为外群构建系统发育树(邻接法和大似然法).结果 上述6种库蠓的rDNA-ITS1序列经过Clustal W比对及人工校对和编辑后的长度为352 bp,其中T、C、A、G4种碱基的含量分别为36.8％、13.0％、30.0％和20.1％,A+T的含量(66.8％)高于C+G的含量(33.1％);K-2p遗传距离在种内和种间具显著差异(t=32.430,P＜0.05);系统发育树中不同种类库蠓各自构成单系(群),同种类不同地理种群聚为一支,其与形态学鉴定结果一致.结论 本研究证实了rDNA-ITS1序列可用于进行库蠓及其近似种的分子鉴定和系统发育分析.
