首页 > 文献资料
-
Sulfiredoxin-1通过调节peroxiredoxins表达提高大鼠星形胶质细胞抗氧化作用
目的 探讨内源性抗氧化小分子蛋白Sulfiredoxin-1(Srxn1)对H2O2诱导的星形胶质细胞的抗氧化作用以及对内源性氧化应激防御系peroxiredoxins的调节作用.方法 Srxn1干扰慢病毒载体转染体外培养的大鼠原代星形胶质细胞;构建H2O2氧化应激模型,采用LDH方法检测细胞损伤程度,用超氧化物歧化酶(SOD)分析细胞内氧化应激状态;Western blot检测Srxn1的表达与Prdx Ⅰ～Ⅳ和Prdx-SO2/3H(过氧化Prdx)活性的关系.结果 1)ShSrxn1干扰后,Srxn1蛋白水平下调59.2％ (P＜0.01),基因水平下调63.6％ (P＜0.01).2)干扰Srxn1增加H2O2后LDH漏出率(P＜0.01)并使氧化应激损伤显著加重、使Prdx Ⅰ ～Ⅳ的表达降低,Prdx-SO2/3H的表达显著增高(P＜0.01或P＜0.05).结论 Srxn1减轻H2O2诱导的星形胶质细胞的氧化应激损伤,并可能是通过调节Prdxs的活性来完成的.
-
抗氧化蛋白Peroxiredoxin家族研究进展
Peroxiredoxin是新近发现的抗氧化酶系,广泛存在于各种生物体内.根据分子所具有保守半胱氨酸数目的不同,哺乳动物的6个Peroxiredoxin分为2个亚类.Peroxiredoxin除了具有共同的抗氧化功能外,它还具有其它的功能如细胞增殖与分化、细胞信号转导及保护其它蛋白的氧化等.对该类蛋白分子结构的深入研究已初步揭示其抗氧化的作用机制.Peroxiredoxin与肿瘤关系密切,它可能成为一个肿瘤标记物,可为肿瘤的治疗提供新的思路.
关键词： peroxiredoxin 抗氧化 蛋白家族 -
重组刚地弓形虫Peroxiredoxin蛋白的纯化及抗血清制备
目的:对原核系统表达的重组刚地弓形虫Peroxiredoxin(rTgPrx)蛋白进行镍亲和层析纯化,免疫大鼠,制备抗血清.方法:优化rTgPrx表达条件,获得大量的可溶性蛋白,经镍亲和层析法纯化后皮下注射免疫Wistar大鼠,间接ELISA法测定血清抗体效价.结果:在表达菌液Asoo为0.5,IPTG浓度为0.2 mmol/L,37℃诱导10h时,可溶性rTgPrx表达量较高;用镍亲和层析纯化获得纯的目的:蛋白,免疫大鼠后诱导产生高滴度抗体血清,效价达1:12800以上.结论:镍亲和层析法纯化的rTgPrx具有免疫原性,用该蛋白免疫大鼠可获得高效价的抗rTgPrx血清.
关键词： 刚地弓形虫 peroxiredoxin 蛋白纯化 抗血清 -
重组弓形虫Peroxiredoxin蛋白诱导小鼠的免疫应答及其抗弓形虫感染的保护作用
目的 观察不同剂量重组弓形虫Peroxiredoxin蛋白(rTgPrx)诱导小鼠的体液免疫、细胞免疫应答及其抗弓形虫感染的保护作用.方法 BALB/c小鼠60只,随机分为5组,分别用20、40、60、80 μg rTgPrx(溶于100μl PBS中)和100μlPBS皮下免疫小鼠3次,间隔2周.末次免疫后第14天,用1×10~4个速殖子/只灌胃攻击,逐日观察小鼠健康状况.攻击后第30天,ELISA法检测小鼠血清IsG和小肠冲洗液siIgA水平,分离并计数脾淋巴细胞和小肠上皮内淋巴细胞(IEL),分离肝、脑组织内弓形虫速殖子并计数.结果 60μg rTgPrx组小鼠血清IgG水平显著高于PBS、20μg和40 μg rTgPrx组,小肠冲洗液sIgA组间比较差异无统计学意义;80μg rTgPrx组小鼠脾淋巴细胞数量明显高于PBS和20 μg rTgPrx组,IEL数量各组间差异无统计学意义;60 μg和80 μg rTgPrx组小鼠脑和肝组织虫荷均低于PBS和20μg rTgPrx组.结论 60μg和80μg rTgPrx皮下免疫小鼠可诱导有效的体液免疫、细胞免疫应答,且抗弓形虫感染的保护作用效果良好.
关键词： 刚地弓形虫 peroxiredoxin 重组蛋白 免疫应答 免疫保护 -
寄生性原虫中peroxiredoxin的研究进展
Peroxiredoxin(Prx)属于一个广泛存在的过氧化物酶家族,对许多病原体在有氧环境下的生存起重要作用.该文综述了Prx的结构、分类及其在寄生性原虫中的研究进展.
关键词： 寄生虫 原虫 活性氧 活性氮 peroxiredoxin -
针刺保肝护脑对脑缺血再灌注肝损伤大鼠抗氧化蛋白Peroxiredoxin表达的影响
目的 探讨针刺保肝护脑对脑缺血再灌注大鼠抗氧化蛋白Peroxiredoxin表达的影响. 方法 将40只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺对照组、针刺保肝护脑组.线栓法制作缺血再灌注大鼠模型,测试大鼠行为学、血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、Peroxiredoxin、肝组织Peroxiredoxin含量. 结果 模型组、针刺对照组和针刺保肝护脑组缺血2h(电针治疗前)时神经功能缺损评分无显著性差异；经10次电针治疗后,与模型组比较,针刺对照组和针刺保肝护脑组神经功能缺损评分有非常显著性差异(P＜0.01)；与针刺对照组比较,针刺保肝护脑组神经功能缺损评分变化更为显著(P＜0.05).电针治疗前,与假手术组、针刺对照组和针刺保肝护脑组比较,模型组血清ALT、AST水平显著增高(P＜0.01),而血清、肝组织Peroxiredoxin含量明显降低(P＜0.01)；经10次电针治疗后,与模型组比较,针刺对照组和保肝护脑针法组血清ALT、AST水平明显降低(P＜0.01),同时血清、肝组织Peroxiredoxin显著升高(P＜0.01);与针刺对照组比较,针刺保肝护脑组血清ALT、AST、Peroxiredoxin和肝组织Peroxiredoxin各项变化更为显著(P＜0.05). 结论 针刺保肝护脑对脑缺血再灌注大鼠的治疗效果较单纯头穴针刺更为显著,其治疗机理与促进肝脏Peroxiredoxin合成相关.
关键词： 脑缺血再灌注 肝损伤 peroxiredoxin 针刺 保肝护脑 -
刚地弓形虫peroxiredoxin基因的克隆表达与免疫原性分析
目的 对刚地弓形虫peroxiredoxin(TgPrx)基因进行克隆、表达和免疫原性分析.方法 收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取总RNA;设计合成引物并引入EcoRI和XhoI酶切位点,RT-PCR扩增编码TgPrx的基因片段克隆到原核质粒pET30a(+)中,经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆;在大肠杆菌BL21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE进行鉴定,重组蛋白用Western blotting分析其免疫原性.结果 从弓形虫RH株cDNA中扩增出591bp的TgPrx基因片段,并成功构建重组质粒pET30a(+)/TgPrx;SDS-PAGE结果 表明,目的 基因在大肠杆菌BL21/DE3中高效表达.重组蛋白的相对分子量约32kDa,Western blotting显示其能被兔抗弓形虫免疫血清识别.结论 RH株刚地弓形虫peroxiredoxin可在原核表达系统中高效表达,该重组蛋白具有免疫原性,有望作为弓形虫疫苗的候选抗原.
关键词： 刚地弓形虫 peroxiredoxin 克隆 原核表达 免疫原性 -
线粒体抗氧化系统与神经系统疾病关系的研究进展
氧化应激是神经系统疾病的重要发病机制,参与多种神经变性疾病和急性脑功能障碍的发生、发展过程,氧化应激与细胞产生和清除活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)的抗氧化功能密切相关,当ROS的产生和细胞抗氧化功能失调时,氧化应激反应随即产生.人体和实验动物模型证明,神经系统变性疾病如阿尔兹海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症以及急性脑功能障碍如脑缺血,汞、兴奋性神经毒素以及肝性脑病等都对大脑细胞线粒体抗氧化系统的活性及表达有重要影响.因此,通过以线粒体抗氧化系统为靶向的治疗策略,将有可能作为治疗脑血管疾病的新途径.细胞内主要的抗氧化物包括SOD、谷胱甘肽,硫氧还蛋白和peroxiredoxin,在各种细胞亚结构中均有分布.本文对线粒体抗氧化系统与神经系统疾病的关系作一综述.
关键词： 线粒体 氧化应激 SOD 谷胱甘肽 peroxiredoxin -
Peroxiredoxin6在糖尿病大鼠视网膜中的表达
背景研究表明氧化损伤在糖尿病并发症的发生发展中发挥着重要的作用,Peroxiredoxin 6(Prx6)是双功能的蛋白质,其清除磷脂氢过氧化物的活性非常重要,因为细胞质中普遍存在的谷胱甘肽过氧化物酶(GPx1)无此功能.目的观察Prx6在实验性糖尿病大鼠视网膜中的表达,分析随着糖尿病病程的延长其在视网膜的表达情况.方法 Wistar大鼠60只,随机分为正常对照组12只和糖尿病组48只.糖尿病组腹腔注射链脲佐菌素(STZ)65 mg/kg诱发糖尿病,将造模成功的大鼠随机分为糖尿病1、2、3个月组,每组16只.于各时间点处死大鼠,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法分析Prx6在不同时间点糖尿病组大鼠视网膜中的表达,应用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件测定阳性反应强度,即平均吸光度(A)值.结果免疫组织化学染色结果显示,正常对照组大鼠视网膜内外颗粒层及视网膜、脉络膜血管均有Prx6蛋白的表达,视网膜神经节细胞(RGCs)层有少量Prx6蛋白的表达,表达于细胞质;糖尿病1个月组大鼠视网膜内外颗粒层棕黄色阳性染色细胞增多;2个月组、3个月组大鼠视网膜各层Prx6蛋白的表达均为阴性,各组间总体比较差异均有统计学意义(F=22 967.63,P＜0.05).RT-PCR结果显示,正常对照组大鼠视网膜有Prx6 mRNA的表达;糖尿病1个月组视网膜Prx6 mRNA表达增高;2个月组Prx6 mRNA表达量明显降低,仅有少量表达;3个月组表达阴性,各组间总体比较差异均有统计学意义(F=942.84,P＜0.05).结论Prx6作为一种抗氧化蛋白存在于视网膜中,可保护组织细胞免受活性氧簇、氧自由基等的损害,随着糖尿病病程的延长,Prx6在视网膜组织和细胞中的表达量逐渐降低,直至消失.
关键词： peroxiredoxin 6 糖尿病视网膜病变 免疫组织化学 氧化损伤 -
Peroxiredoxin在H2O2介导的信号通路中的作用
Peroxiredoxins(Prxs)家族广泛存在于生物体的各种细胞中,这种抗氧化蛋白在过氧化氢(H2O2)介导的信号通路调节中具有重要作用.在哺乳动物细胞中,Prxs家族成员能催化细胞内的H2O2还原,将其烷化为H2O和乙醇而清除.H2O2行使细胞内的信号分子的作用,需要保证其浓度在细胞内可以迅速上升至一定阈值以上,因此要避免H2O2被Prxs破坏.H2O2超氧化会使Prxs活性位点上的Cys-SH生成Cys-SO2H而失活,随后Prxs在Sulfiredoxin(Srx)催化下又可恢复活性.Prxs的可逆性失活能调节H2O2在细胞内积聚的浓度使其行使信使功能,作用于多种特殊蛋白质.
-
2-Cys peroxiredoxins的研究进展
Peroxiredoxins是新近发现的抗氧化酶家族成员,广泛存在于各种生物体内.2-Cys Peroxiredoxins(2-Cys Prxs)是其中一个亚类,具有独特的催化特性和可逆性过氧化循环.2-Cys Prxs在细胞内主要起抗氧化和调节过氧化氢(H2O2)介导的信号转导作用,还参与细胞周期进程以及发挥分子伴侣作用.
关键词： peroxiredoxin 过氧化氢 信号转导 细胞周期 分子伴侣 -
人源噬菌体抗体对Peroxiredoxin I高表达肺腺癌细胞增殖的抑制作用
背景与目的:研究表明过氧化物酶Peroxiredoxin I(Ph I)与癌症的发展有密切关系.我们已通过噬菌体展示技术构建了肺腺癌相关的人源单链抗体库.本研究对该库进行筛选,得到抗Prx I肺腺癌单链抗体,并检测其对肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用.方法:PCR法检测TG1中scFv基因插入率,1%琼脂糖凝胶电泳鉴定Sfi I和Not I双酶切质粒的结果,以A549细胞及在肺癌中高表达的抗氧化蛋白Prx I为靶抗原分别对抗体库进行3轮筛选富集.将阳性克隆用IPTG诱导表达并进行检测.放射性核素计数法测定细胞单链抗体内摄水平,MTT法及流式细胞术检测单链抗体对A549细胞的增殖抑制和凋亡情况,免疫印迹法检测抗体作用A549细胞后Prx I的表达水平.结果:seFv基因插入率为77%,双酶切鉴定检测到目的条带.在亲和筛选过程中,肺腺癌单链抗体得到富集,收获率逐轮提高,第6轮为第1轮的180倍.ELISA法检测到在随机选取的10个克隆中,有6个与A549细胞呈阳性反应,阳性率60%.SDS-PAGE及ELISA检测证实得到人源抗Prx I肺腺癌单链抗体.被A549细胞内摄的单链抗体介导了细胞的凋亡以及细胞内Prx I蛋白表达水平的下降.结论:从噬菌体抗体库中筛选获得具有较高特异性的抗Prx I肺腺癌单链抗体.单链抗体与肺腺癌细胞有特异性亲和力,并能有效抑制其增殖.
-
小鼠peroxiredoxin基因家族的生物信息学分析
目的分析小鼠peroxiredoxin基因家族的基因组结构和进化.方法利用已经公布的小鼠基因组数据库,采用BLAST程序检索该基因家族各成员的编码基因和假基因,并利用Cluster W软件进行序列联配,绘制其分子进化树.结果分析表明该家族半数成员具有多个假基因序列,为返转座类型假基因.这些假基因的形成时间有先后,所具有返转座假基因的典型结构也各不相同.分析该家族的进化表明PrxⅠ-Ⅳ有共同的祖先,归为一个亚类,而PrxⅤ和Ⅵ与前者的相似性较差,归为另一个亚类.结论该家族每个成员长期进化所形成的多样性提示其功能具有独特性.
关键词： peroxiredoxin 基因家族 进化 生物信息学
