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芫花根醇提颗粒联合甲基泼尼松龙对脊髓损伤大鼠BDNF、NMDA表达及行为学的影响
目的 研究芫花根醇提颗粒(金腰带)联合甲基泼尼松龙对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)大鼠行为学、脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)表达及N-甲基-D-门冬氨酸(N-methyI-D-aspartate,NMDA)水平的影响.方法 SD成年雄性大鼠,随机分为假手术组、脊髓挫伤组(模型组)、金腰带组[灌胃金腰带50 mg/(kg·d),共5天]、甲基泼尼松龙组(脊髓钝挫伤术后8h内肌肉注射50 mg/kg甲基泼尼松龙,此后甲基泼尼松龙剂量每天减少10 mg/kg,共5天)及联合组(金腰带和甲基泼尼松龙联合干预).各组大鼠均在术后(0、3、7、28天)进行后肢行为学评价[神经行为学(Basso Be-attie and Bresnahan,BBB)评分].术后13天,每组取8只大鼠,麻醉后取损伤脊髓T8-10液氮中保存,采用[3H]MK-801放射性配基分析法测定NMDA受体亲和力(Kd)和大结合数量(Bmax);取术后28天大鼠损伤脊髓,采用免疫组织化学法检测BDNF表达.结果 与假手术组比较,模型组腹角和背角BDNF阳性神经元数量升高,Bmax(470±34)升高,Kd降低,术后3～28天BBB评分降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与模型组比较,各给药组BDNF阳性神经元数量及Kd升高,术后3～28天BBB评分升高(P＜0.05),Bmax[甲基泼尼松龙组:660±15,金腰带组:646±25,联合组:510 +21]降低(P＜0.05).与甲基泼尼松龙组比较,金腰带组及联合组BDNF阳性神经元数量及Kd升高(P＜0.05),术后7～28天BBB评分升高(P＜0.05),Bmax降低(P＜0.05).与金腰带组比较,联合组BDNF阳性神经元数量及Kd升高(P＜0.05),Bmax降低(P＜0.05).结论 金腰带能有效改善SCI大鼠后肢运动功能,增加脊髓组织中BDNF的表达,通过影响脊髓NMDA受体减轻脊髓继发性损伤,对SCI有一定的治疗与保护作用,效果优于甲基泼尼松龙且与其有协同作用.
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沉默白细胞介素-1β基因对脊髓钝挫伤大鼠波形蛋白的影响
目的 探讨白细胞介素-1β(IL-1β)对大鼠脊髓钝挫伤模型中波形蛋白的影响.方法 Sprague-Dawley大鼠30只,采用Allen法制备脊髓钝挫伤模型,随机分为空载组(n=15)和干扰组(n=15),分别注射空质粒和包装IL-1βsiRNA的质粒;每组再分为3 d、7 d和28 d亚组.通过GeneMANIA预测IL-1β与波形蛋白之间的关系.采用免疫组化和实时定量聚合酶链反应方法观察损伤区波形蛋白的表达.结果 GeneMANIA分析显示,IL-1β与波形蛋白可通过多个基因直接或间接联系.空载组波形蛋白在脊髓前角神经元和神经胶质细胞中广泛表达,干扰组波形蛋白及mRNA均较空载组下降(t>2.875,P<0.05).结论 IL-1β能调控波形蛋白表达,可能影响损伤修复.
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脊髓损伤后原肌球蛋白4在脊髓白质的定位及表达
目的 研究脊髓钝挫伤(spinal cord contusion,SCC)后,原肌球蛋白4(tropomyosin 4,TPM4)在脊髓的表达和定位,探讨TPM4在脊髓损伤中的作用.方法 SD大鼠随机分为sham组与SCC组,Allen's打击法建立SCC模型,RT-PCR技术检测TPM4 mRNA的表达,IHC技术检测TPM4在白质的定位.结果 SCC组TPM4的表达量在3d下降(P＜0.05),7d、14d TPM4的表达量随时间延长有上升趋势,但是仍然低于sham组;TPM4主要表达在神经胶质细胞、神经纤维和血管上.结论 TPM4可能在脊髓钝挫伤神经纤维的修复和重塑中起重要作用.
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大鼠脊髓钝挫伤后单核细胞趋化蛋白-1与趋化因子受体2的表达变化
目的:探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和趋化因子受体2(CCR2)在脊髓钝挫伤(SCC)大鼠的表达及其对运动功能和感觉功能的影响.方法:SD大鼠随机分为损伤(SCC组)术后12 h、3 d、7 d、14 d组及假手术组共5组.Allen打击法建立SCC模型,进行BBB评分,光热尾痛法测定大鼠温痛觉潜伏期,RT-PCR检测CCR2和MCP-1基因相对表达量,免疫组织化学观察MCP-1和CCR2在脊髓前角和后角的表达.结果:SCC后BBB评分降低,7 d与14 d BBB评分明显增高.SCC后3、7 d温痛觉潜伏期较假手术组缩短.SCC后CCR2 mRNA在12 h和3 d时表达量增高;随后在7、14 d CCR2 mRNA降低.MCP-1 mRNA的表达量在12 h、3 d、7 d增高,14 d MCP-1 mRNA下降.MCP-1和CCR2在脊髓前角主要表达在神经元中,在脊髓后角主要表达于神经胶质细胞和神经元.结论:MCP-1和CCR2可能作为重要的因子参与脊髓损伤早期的继发性损伤,导致大鼠运动功能和感觉功能障碍.
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慢病毒介导的RNA干扰下调IL-6抑制脊髓顿挫损伤后Caspase-3表达
目的 通过慢病毒介导的RNA技术干扰IL-6的表达,探究脊髓顿挫损伤后Caspase-3的表达变化.方法 Allen's打击法制备脊髓顿挫伤(SCC)模型,BBB评分确认造模成功;免疫组织化学和Q-PCR技术定位和定量测定IL-6和Caspase-3的表达变化;Gene MANIA网站预测IL-6与Caspase-3的联系;慢病毒介导的RNA干扰技术构建IL-6干扰模型后,Q-PCR技术定量测定Caspase-3的表达变化.结果 SCC后SD大鼠BBB评分显著低于假手术组(P＜0.05);IHC结果显示:IL-6和Caspase-3均在在脊髓白质胶质细胞表达;Q-PCR结果显示:IL-6在损伤后12h表达显著增加,3d、28 d表达持续下降;Caspase-3在损伤后12h、3d、28 d表达持续下降.生物信息学分析结果:IL 6和Caspase 3在大鼠体内存在共定位关系.干扰组Caspase-3表达比空载组显著降低(P＜0.05).结论 在SCC后,抑制IL-6表达可降低Caspase-3表达水平.
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Real-time PCR检测脊髓钝挫伤大鼠TPM4基因的变化
目的 观测TPM4在大鼠脊髓钝挫伤后的基因变化,探讨其在脊髓损伤修复中的作用.方法 SD成年大鼠20只,分为假手术组,脊髓钝挫伤12h组,脊髓钝挫伤3d组,脊髓钝挫伤7d组.取损伤段脊髓,通过Q-PCR检测TPM4的基因含量.结果 Q-PCR结果显示大鼠脊髓钝挫伤后12h,脊髓中的TPM4基因表达开始降低,于损伤后3d达低,损伤后7d逐渐开始增加,均有统计学意义(P＜0.05).结论 大鼠脊髓损伤后,脊髓中TPM4基因含量变化先降低再升高,提示TPM4可能参与脊髓钝挫伤后的修复.
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大鼠脊髓钝挫伤后IL-6和Vim对运动功能恢复的影响
目的 用慢病毒干扰白介素6(interleukin-6,IL-6)的表达,观察脊髓钝挫伤(spinal cord contusion,SCC)后波形蛋白(Vim)的表达变化及其对大鼠运动功能恢复的影响.方法 将SD大鼠随机分为假手术组(sham组),SCC实验组(SCC组),载体组(vetor组)和慢病毒组(IL-6-RNAi-LV组).改良Allen's法制备SCC模型,BBB评分评估术后大鼠的运动功能变化,免疫组织化学技术(IHC)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测IL-6、Vim的蛋白质定位和mRNA的表达变化.Gene MANIA预测IL-6和Vim的关系后构建慢病毒干扰IL-6的SCC模型进一步实验.结果 BBB评分显示SCC组,IL-6-RNAi-LV组,Vetor组在术后5、7、14、28 d较Sham组明显下降(P<0.05),而IL-6-RNAi-LV组在第5、7、14、28天的评分较Vetor组有明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05).IHC结果显示IL-6和Vim表达在脊髓神经元中.另外,IL-6 mRNA在SCC后12 h达到峰值(P<0.05),Vim mRNA在SCC后7、14、28 d较sham组增高,进一步抑制IL-6后其在28 d与vector组相比有明显下调,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 在SCC后,抑制IL-6表达可以下调Vim,抑制胶质瘢痕形成,进而促进SD大鼠的运动功能恢复.
