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基于SNAP-25表达的肾虚质大鼠突触可塑性实验研究
目的:通过大鼠海马突触相关蛋白-25(SNAP-25)的表达,揭示肾虚质致突触可塑性降低的分子生物学机制.方法:通过“猫吓鼠”造模法恐吓受孕母鼠,待产子后继续恐吓仔鼠,从而建立先天不足、后天失养复合型肾虚质仔鼠模型.补肾药物左、右归丸治疗3个月后,Morris水迷宫检测仔鼠学习记忆能力,ELISA法测定海马单胺类神经递质去甲肾上腺素(NE)含量,免疫组化法检测SNAP-25蛋白表达.结果:Morris水迷宫:模型组潜伏期、总路程、首次穿越目标区时间较空白组长,左、右归丸组较模型组改善;NE含量:模型组较空白组降低,左、右归丸组较模型组升高;SNAP-25表达,模型组较空白组降低,左、右归丸组较模型组上调.结论:肾虚质仔鼠突触可塑性能力减退与SNAP-25表达相关,补肾药物左、右归丸具有改善和提高作用.
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慢性脑缺血大鼠空间学习记忆能力与前额叶皮质突触相关蛋白-25表达的相关研究
目的 探讨慢性脑缺血大鼠空间学习记忆能力与前额叶皮质突触相关蛋白-25(SNAP-25)表达的相关性.方法 将20只慢性脑缺血大鼠实验模型设为试验组,另选取20只健康大鼠作为对照组,采用Morris水迷宫评估两组大鼠的空间学习记忆能力,检测两组大鼠前额叶皮质SNAP-25蛋白表达,分析慢性脑缺血大鼠认知功能损害与前额叶皮质SNAP-25蛋白表达的相关性.结果 试验组大鼠的空间学习记忆能力较对照组大鼠差(P＜0.05),前额叶皮质SNAP-25蛋白表达水平高于对照组大鼠(P＜0.05).结论 前额叶皮质SNAP-25蛋白表达水平与大鼠认知功能损害程度呈正相关,可作为评估大鼠认知功能损害程度的辅助指标.
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SNAP-25基因克隆及其在大肠杆菌中的表达与鉴定
目的:构建SNAP-25基因的原核表达载体pET22b-SNAP-25,对表达产物活性进行初步鉴定.方法:根据GenBank中已报道的SNAP-25基因序列,设计特异引物,通过RT-PCR从小鼠全脑组织总RNA中得到基因.将全长基因克隆至原核表达载体pET22b中,重组质粒转化大肠杆菌E. coli B121感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析进行纯化.通过SDS-PAGE和免疫印迹对其进行鉴定,并对该蛋白进行活性的初步分析.结果与结论:成功构建了原核表达载体pET22b-SNAP-25,Western印迹证实重组蛋白获得表达.表达的重组蛋白与A型肉毒毒素混合反应,经SDS-PAGE验证,重组蛋白具有被毒素特异性切割的活性.
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SNARE蛋白及其复合物在突触融合过程中的作用
SNARE蛋白能够调节所有的细胞内膜融合事件.哺乳动物细胞中有超过30种SNARE家族蛋白,每个蛋白都处在一个独立的亚细胞组分.SNAREs可能编码膜转运特异性的事件,但这些特异性事件实现的机制尚有争议.功能研究证实了SNARE蛋白如何相互作用,以便产生驱动力推动脂质双分子层融合.
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SNARE和synaptotagmin对学习记忆作用的研究进展
可溶性NSF附着蛋白受体(SNARE)复合物是神经元囊泡胞吐过程重要的一部分,一般认为它参与调节突触前膜融合过程.SNARE复合体核心蛋白主要有3个,突触小体相关蛋白(SNAP-25),syntaxin和囊泡相关蛋白(VAMP).突触结合蛋白(synaptotagndn,syt)是一个钙感受器蛋白,通过和SNARE结合起到调控膜融合过程的作用.SNARE复合物中的syntaxin,SNAP-25以及svt基因的缺失可造成小鼠认知以及学习记忆损伤.本文主要综述两者在突触前膜的作用过程,并分析其对学习记忆的影响与其调节突触前膜融合过程密切相关,以期了解syntaxin,SNAP-25及syt影响学习记忆的分子机制.
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神经干细胞移植对AD模型大鼠SNAP-25表达的影响
目的:观察神经干细胞对AD大鼠海马周围微环境中SNAP-25表达及其认知功能的影响.方法:取成年雄性Wistar大鼠30只,随机分为对照组、AD模型组、细胞移植组,每组10只.采用凝聚态Aβ1-42注射到大鼠海马组织内建立阿尔茨海默病(AD)大鼠动物模型,通过Y迷宫测试大鼠学习记忆能力和Western blot技术检测大鼠海马组织内SNAP-25的表达.结果:Y迷宫测试结果显示术后4周时AD模型组和细胞移植组大鼠学习记忆均低于对照组,与AD模型组比较,细胞移植组大鼠学习记忆能力明显高于AD模型组,差异有统计学意义(P＜0.05);Western blot检测结果显示术后4周时AD模型组和细胞移植组大鼠海马组织内SNAP-25蛋白表达量均低于对照组,与AD模型组比较,细胞移植组大鼠海马组织SNAP-25蛋白表达量高于AD模型组差异有统计学意义(P＜0.05).结论:移植的NSCs可改善AD大鼠的学习和记忆能力,其机制可能是通过改变海马区周围的微环境并上调了海马组织内SNAP-25表达.
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SNAP-25在大鼠蛛网膜下腔出血后脑组织中的表达研究
目的:观察蛛网膜下腔出血(SAH)后突触小体相关蛋白(SNAP-25)在大鼠脑组织中的表达变化.方法:42只成年健康雄性SD大鼠,随机分为正常组、对照组、SAH后1、3、5、7、14天共7组,经大鼠自体股动脉(尾动脉)非肝素化动脉血注入视交叉池致蛛网膜下腔出血模型.蛛网膜下腔出血后1、3、5、7、14天后处死大鼠,取颞叶皮层、海马、小脑做标本,Western blot及免疫组化测定SNAP-25,采用SPSS16.0软件分析.结果:与正常组相比,对照组无明显差异(P＞0.05)；SAH组中SAH后1天的SNAP-25蛋白水平降低明显(P＜0.05);SAH后3天蛋白水平达到低值(P＜0.01)；SAH后5、7天的SNAP-2蛋白水平虽降低但呈逐渐上升趋势(P＜0.05);SAH后14天的SNAP-2蛋白水平与正常组相比无明显差异(P＞0.05).结论:SNAP-2在SAH后72小时明显下降,后逐渐上升,至14天时基本恢复正常.
关键词： SNAP-25 蛛网膜下腔出血 Western blot 免疫组化 SD大鼠 -
左甲状腺素钠联合多奈哌齐治疗对成年甲减大鼠后扣带回SNAP-25表达的影响
目的 研究左甲状腺素钠(L-T4)与多奈哌齐(DON)联合治疗对甲状腺功能减退症(简称甲减)大鼠后扣带回突触相关蛋白25(SNAP-25)表达的影响.方法 40只清洁级SD雄性大鼠,适应性饲养1周后随机分为正常对照组(CON组)、甲减组(Hypo组)、L-T4替代治疗组(L-T4组)、多奈哌齐治疗组(DON组)、联合治疗组(L-T4+ DON组).CON组正常饲养,余4组通过给予0.05％丙硫氧嘧啶(PTU)水饮用6周建立甲减大鼠模型.造模5周开始,给予左甲状腺素钠、多奈哌齐、左甲状腺素钠联合多奈哌齐治疗2周.通过放射免疫法测定血清甲状腺激素水平,尼氏染色法观察尼氏体数量,免疫组化法、Western blot法观察大鼠后扣带回SNAP-25的表达.结果 Hypo组、DON组大鼠较CON组血清甲状腺激素水平显著降低(P＜0.01),L-T4组、L-T4+DON组血清甲状腺素水平与正常对照组差异无统计学意义.尼氏染色显示Hypo组较CON组尼氏体数量降低(P＜0.05),DON组尼氏体数量较Hypo组增加(P＜0.05),未恢复至CON组水平(P＜0.05),L-T4+ DON组尼氏染色显示与CON组比较差异无统计学意义,尼氏体数量恢复.免疫组化染色、Western blot法显示Hypo组、DON组后扣带回SNAP-25表达高于CON组(P＜0.05);L-T4组SNAP-25表达低于Hypo组(P＜0.05),未恢复至CON组水平(P＜0.05);L-T4+ DON组后扣带回SNAP-25表达与CON组差异无统计学意义.结论 成年期甲减大鼠后扣带回SNAP-25蛋白表达量升高(P＜0.05)、尼氏体数量减少(P＜0.05),左甲状腺素钠与多奈哌齐联合治疗能够有效恢复突触蛋白和尼氏体的损伤.
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甲状腺激素联合多奈哌齐治疗对成年甲减大鼠额叶SNAP-25的影响
目的 研究甲状腺激素联合多奈哌齐治疗对成年甲减大鼠额叶突触相关蛋白25(SNAP-25)的表达的影响.方法 将50只成年健康SD大鼠随机分为5组:对照组(CON)、甲减组(Hypo)、多奈哌齐组(DON)、左甲状腺激素钠组(L-T4)、左甲状腺激素钠联合多奈哌齐组(L-T4+DON);除对照组外,其余4组通过含0.05℅丙基硫氧嘧啶(PTU)饮用水喂养6周诱导成年期甲减大鼠模型;DON组、L-T4组、L-T4+DON组分别予多奈哌齐、左甲状腺激素钠、左甲状腺激素钠联合多奈哌齐治疗2周后,放射免疫法测定血清甲状腺激素水平,免疫组化法、Western blot法观察大鼠额叶SNAP-25的表达.结果 与CON组相比,Hypo组大鼠血清三碘甲状腺原氨酸(T3)、四碘甲状腺原氨酸(T4)水平显著降低(P<0.01),促甲状腺激素(TSH)显著上升(P<0.01);额叶SNAP-25的表达水平显著高于CON组(P<0.05).L-T4组与CON组比较,血清T3、T4、TSH差异无统计学意义;SNAP-25的表达升高(P<0.05).DON组与CON组比较,血清T3、T4、TSH差异有统计学意义(P<0.01);SNAP-25的表达升高(P<0.05).L-T4+DON组与CON组比较,血清T3、T4、TSH差异无统计学意义;SNAP-25的表达差异无统计学意义.结论 甲状腺激素联合多奈哌齐治疗能有效地恢复成年甲减大鼠额叶SNAP-25的表达.
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肉毒毒素抗癫痫作用的研究进展
肉毒毒素(botulinum neuro toxin ,BoNT )是一种由厌氧梭状芽孢杆菌产生的神经毒素蛋白[1 ] ,可阻碍周围神经元轴突末梢释放乙酰胆碱 ,引起肌肉弛缓性麻痹、腺体分泌减少等 ,被广泛应用于医学、美容等行业[2].根据抗原学分类 ,BoN T 可分为8类 ,依次命名为BoNT/A-H ,并可依据氨基酸序列进一步区分亚型[3] ,如 A 型肉毒毒素(botulinum toxin A , BoNT/A)可分为7种亚型(A1-A7) ,各亚型具有不同的酶活性及毒理学特征[4-6 ] .
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Snap-25 mRNA在毒鼠强中毒大鼠脑组织的表达
目的探讨毒鼠强中毒与脑组织表达Snap-25的关系.方法应用荧光定量RT-PCR法,检测大鼠脑组织中Snap-25 mRNA量的改变.结果大鼠毒鼠强中毒后1 h,其脑内不同部位的组织中Snap-25 mRNA表达与对照组相比无明显的变化;中毒1 d后,大鼠脑内Snap-25 mRNA的表达与对照组相比,各观察部位均有明显升高(P<0.05);在中毒后第3 d,Snap-25 mRNA表达继续上升,第5 d表达强度有所下降,但是仍然高于正常对照组大鼠.结论大鼠急性毒鼠强中毒早期, Snap-25 mRNA的表达并未发生明显变化,提示毒鼠强导致大鼠中毒不是通过改变Snap-25含量的机制实现的.大鼠毒鼠强中毒后,Snap-25 mRNA表达增强可能是由于负反馈的机制,增加神经递质的释放,以缓解抽搐症状.
