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活血渗湿方对实验性肝纤维化大鼠胶原纤维合成与降解的影响
目的:研究活血渗湿方对胶原纤维增生的影响.方法:采用四氯化碳实验性肝纤维化模型并以活血渗湿方干预.与克隆伽玛对照,测定肝功能、血清透明质酸,并通过光镜观察肝组织病理变化,用苦味酸-天狼红染色和氨银-Masson网织纤维染色观察Ⅰ、Ⅲ型胶原,免疫组织化学法检测Ⅳ型胶原及组织金属蛋白酶抑制因子(TIMP-1)的表达.结果:活血渗湿方组较模型组比较,其特点在于:(1)肝功能改善;(2)血清透明质酸显著降低;(3)Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原纤维增生得以明显改善;(4)TIMP-1表达减少.结论:活血渗湿方可通过改善胶原纤维的增生达到抗肝纤维化作用.
关键词： 肝纤维化 模型 活血渗湿方 胶原纤维 组织金属蛋白酶抑制因子 -
血清基质金属蛋白酶2和抑制因子与绝经后骨质疏松症的相关性
目的 探讨绝经后妇女血清基质金属蛋白酶2 (MMP-2) 和抑制因子(TIMP-2)水平及其与绝经骨质疏松症指标的关系.方法 将202名48～65岁绝经后妇女分为正常组、低骨量组和骨质疏松组,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定的血清MMP-2、TIMP-2以及骨保护蛋白(OPG)、骨保护蛋白配体(OPGL),计算MMP-2/TIMP-2和OPG/OPGL比值,用双能X线吸收法(DEXA)测定腰椎正位、股骨颈、华氏区和大粗隆的骨密度(BMD).结果 ①骨质疏松组中血清MMP-2的数值(1392±121) μg/L高于正常组(1123±141) μg/L (P＜0.05),而TIMP-2的数值(44.3±36.2) ng/ml低于正常组(47.8±30.2) ng/ml.②骨质疏松组中血清MMP-2和MMP-2/TIMP-2比值与骨密度、血精OPGL数值存在明显负相关性(P＜0.05),和OPG和OPG/OPGL比值存在明显正相关性(P＜0.05),TIMP-2和华氏区骨密度和OPG存在明显正相关性(P＜0.05).结论 血清MMP-2和MMP-2/TIMP-2比值与绝经后骨质疏松症妇女骨密度和骨代谢指标OPG、OPGL和OPG/OPGL比值具有关联性.血清MMP-2水平升高和MMP-2/TIMP-2比值降低可能为绝经后骨质疏松症伴随骨代谢转换过程增快的表现.
关键词： 基质金属蛋白酶 组织金属蛋白酶抑制因子 骨密度 骨质疏松 绝经后 -
食管鳞状细胞癌组织MMP-9与TIMP-1表达
目的 探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)在食管鳞癌中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(s-P法)对80例食管鳞癌组织中MMP-9、TIMP-1蛋白表达进行检测.结果 MMP-9、TIMP-1在食管鳞状细胞癌中阳性表达率分别为81.3%和75.0%;随着肿瘤浸润程度的加深,MMP-9阳性表达率明显升高,差异有统计学意义(x2=16.55,P<0.05);TIMP-1在高分化组(Ⅰ～Ⅱ级)及临床早期(Ⅰ～Ⅱ期)病例食管癌的表达(34.1%),明显高于低分化组(Ⅲ～Ⅳ级)及临床晚期(Ⅲ～Ⅳ期)病例的表达(10.8%)(x2=9.46,P<0.05),有淋巴结转移者MMP-9阳性表达率明显高于无淋巴结转移者,差异有统计学意义(x2=10.46,P<0.05);MMP-9的表达与食管鳞癌的病理分级和淋巴结转移呈正相关(r=0.649,P<0.05),TIMP-1的表达呈负相关(r=-0.637,P<0.05).结论 MMP-9与食管鳞癌的侵袭转移有关,MMP-9与TIMP-1联合检测有助于食管鳞癌生物学行为的判断.
关键词： 食管鳞癌 金属蛋白酶类 组织金属蛋白酶抑制因子 表达 免疫组织化学 -
人胎盘来源的金属蛋白酶抑制因子-3的分离纯化及性质研究
目的首次从人胎盘中分离纯化了天然型TIMP-3,并建立了TIMP-3酶联免疫测定方法.方法人胎盘来源的TIMP-3的纯化,首先利用4MoI/L尿素Tris缓冲液(pH8.0),在除去多数水溶性蛋白的胎盘匀浆液中提取难溶性蛋白,然后经过CM52阳离子交换树脂和Sephacryl S-200凝胶过滤二步柱层析.结果SDS聚丙酰胺凝胶电泳显示后分离结果,分别为27KD和24KD的两务蛋白带.Westem blotting结果表明,分子量为27KD蛋白为N末端糖化的TIMP-3、分子量为24KD的蛋白为非糖化的TIMP-3、两者的比例约为1:3.对比尿素抽提液TIMP-3的纯化产率为24%,纯化倍数约为3200倍.结论纯化的天然型TIMP-3对MMP-1有明显的抑制活性.非糖化的TIMP-3 IC50为1.1×10-10M,糖化的TIMP-3IC50为1.2×10-10M,显然比重组TIMP-3对MMP-1的抑制活性要高许多(rTIMP-3的IC50为1.2×10-8M).研究表明,TIMP-3对某些肿瘤转移有明显的抑制效应.此项研究对进一步阐明MMPs和TIMPs在机体内平衡关系的改变对肿瘤浸润转移的影响作用有着重要的意义.
关键词： 组织金属蛋白酶抑制因子 基质金属蛋白酶 蛋白纯化 -
慢性乙型肝炎和肝硬化患者外周血单个核细胞分泌TIMP-1的研究
本研究通过对慢性乙型肝炎和肝硬化患者血清和单个核细胞中组织金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)的分析,探讨TIMP-1在肝纤维化中发挥的作用.
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山奈酚对小鼠日本血吸虫肝纤维化α-平滑肌动蛋白、组织金属蛋白酶抑制因子1及胶原表达的影响
目的 研究感染日本血吸虫的小鼠经吡喹酮杀虫治疗后,给予山奈酚治疗对小鼠肝组织虫卵肉芽肿和纤维化的影响. 方法 以日本血吸虫尾蚴感染BALB/c小鼠作为肝纤维化动物模型,将40只健康BALB/c小鼠随机分为6组:正常组和模型组各8只,山奈酚组设5、10、15、20 mg/(kg·d)等4个剂量组,每组6只.除正常组外,其余5组小鼠感染日本血吸虫后6周给予吡喹酮灌胃治疗,剂量为500mg/(kg·d)×2 d.吡喹酮治疗后,山奈酚组小鼠分别给予山奈酚5、10、15、20 mg/(kg·d)灌胃治疗6周,正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃6周.治疗结束后颈椎脱臼处死小鼠,取肝脏.用免疫组织化学法检测各组小鼠肝组织金属蛋白酶抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP)1、α-平滑肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(type Ⅰ collagen,COLⅠ)、Ⅲ型胶原(typeⅢcollagen,COLⅢ)蛋白的表达;用实时荧光定量RT-PCR检测各组小鼠肝组织α-SMA、TIMP1、COLⅢmRNA的表达. 结果 山奈酚20 mg/(kg·d)组小鼠肝组织α-SMA、TIMP1、COLⅢmRNA的表达量依次为:1.251 7±0.053 8、1.490 1±0.042 9、1.328 3±0.070 3.模型小鼠肝组织α-SMA、TIMP1、COLⅢmRNA的表达量依次为:2.141 7±0.038 6、4.281 7±0.089 1、5.218 3±0.121 6.与模型组相比,山奈酚各剂量组α-SMA、TIMP1、COLⅢ的mRNA的表达量降低,差异均有统计学意义(F=36.93、95.16、48.29,P＜0.05);山奈酚4个剂量组之间,随用药剂量增大,α-SMA、TIMP1、COLⅢmRNA的表达量下降,差异均有统计学意义(F=70.62、290.51、407.25,P＜0.05).与模型组相比,山奈酚各剂量组α-SMA、TIMP1、COL Ⅰ、COLⅢ蛋白表达量下降,差异有统计学意义(F=13.46、237.96、191.58、274.32,P＜0.05);山奈酚4个剂量组之间,随用药剂量增大,α-SMA、TIMP1、COLⅠ、COLⅢ蛋白表达量下降,差异有统计学意义(F=210.92、77.41、186.33、53.18,P＜0.05). 结论 山奈酚可通过减少α-SMA、TIMP1、COLⅠ、COLⅢ的表达,能显著减轻日本血吸虫引起的小鼠肝纤维化.
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核酶对人皮肤瘢痕成纤维细胞增殖和TIMP-1表达的影响
目的:探讨核酶对人金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)基因表达的特异性抑制作用,以寻找治疗增生性瘢痕的新方法.方法:应用特异切割TIMP-1的嵌合型核酶基因克隆pU6-Rz182转染增生性瘢痕成纤维细胞(hypertrophic scar derived fibroblasts,HSF),G418筛选稳定表达核酶的细胞克隆,MTT法检测并绘制细胞生长曲线,观察核酶对细胞生长的影响;RT-PCR检测核酶对靶基因TIMP-1表达的抑制.结果:在mRNA水平,与正常对照组相比,稳定表达活性核酶Rz182的HSF中TIMP-1的表达被抑制了87.9%,而点突变核酶抑制达36.4%,两者之间差异非常显著(P<0.01).HSF细胞生长进入平台期后,转染核酶基因组与点突变组及对照组相比,活细胞数显著降低(P<0.01),而点突变组与对照组无明显差异.结论:核酶U6Rz182能特异地抑制HSF中TIMP-1的表达,并使HSF的增殖受到抑制.
关键词： 核酶 瘢痕 组织金属蛋白酶抑制因子 克隆 -
乳腺癌中环氧化酶-2的表达及其与VEGF、MVD、MMP-9、 TIMP-1的关系
目的研究乳腺癌组织中环氧化酶-2(COX-2)的表达及其与VEGF、MVD、MMP-9和TIMP-1的相互关系,探讨其在乳腺癌发生和浸润中的生物学意义. 方法应用S-P法检测65例浸润性乳腺癌组织中COX-2、VEGF、MMP-9、TIMP-1及血管内皮标记物CD34的表达情况,并观察7 例导管原位癌(DCIS)、45例癌旁乳腺组织中COX-2的表达. 结果 65例浸润性乳腺癌、7例DCIS均表达COX-2,其中浸润性乳腺癌中COX-2高表达率为66.2%(43/65), 而45例癌旁组织中21例有COX-2弱表达,两者之间差异有显著性(P<0.01).COX-2与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、组织学分级、TNM分期、腋窝淋巴结转移均无相关性,但COX-2在浸润性乳腺癌中的表达与VEGF、MMP-9、TIIMP-1及MVD均呈正相关(P<0.05). 结论 COX-2可能与乳腺癌组织中微血管形成和细胞外基质代谢有关.
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壶腹癌MMP-9、TIMP-1的表达及其与淋巴结转移的相关性研究
目的探讨基质金属蛋白酶9(MMP-9)、组织金属蛋白酶抑制因子-1在壶腹癌中表达的意义.方法采用免疫组化S-P法对32例壶腹癌组织进行MMP-9、TIMP-1的检测.结果 MMP-9、TIMP-1在壶腹癌组织中阳性表达率分别为65.6%(21/32),46.9%(15/32),MMP-9的表达与壶腹癌患者淋巴结转移呈正相关(P＜0.05),而TIMP-1的表达则相反,MMP-9和TIMP-1的表达呈负相关(P＜0.01).结论 MMP-9可作为判断壶腹癌恶性生物学行为的标记物.人工诱导TIMP-1的表达可能抑制肿瘤的浸润和转称,为肿瘤治疗提供了新的方向.
关键词： 壶腹癌 金属蛋白酶类 组织金属蛋白酶抑制因子 -
基质金属蛋白酶-9、组织金属蛋白酶抑制因子-1在胃癌中的表达
目的:探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)在胃癌中表达的意义.方法:采用免疫组化S-P法对47例胃癌组织进行MMP-9及TIMP-1的检测.结果:MMP-9、TIMP-1主要表达于癌周基质细胞,癌细胞少量表达;MMP-9、TIMP-1表达与胃癌患者淋巴结转移(P＜0.01)、浆膜浸润相关(P＜0.01);TIMP-1的表达与胃癌TNM分期相关(P＜0.05),而MMP-9的表达与胃癌TNM分期无相关性(P＞0.05).结论:MMP-9及TIMP-1可作为判断胃癌恶性行为的重要生物学标记物.
关键词： 胃肿瘤 金属蛋白酶类 组织金属蛋白酶抑制因子 基因表达 -
组织金属蛋白酶抑制因子-1在胃癌中的表达
目的探讨组织金属蛋白酶抑制因子-1在胃癌中表达的意义.方法采用免疫组化S-P法对47例胃癌组织进行TIMP-1的检测.结果 TIMP-1主要表达于胃癌癌周基质细胞,癌细胞少量表达,TIMP-1的表达强度与胃癌患者淋巴结转移(P<0.01)、浆膜浸润(P<0.01)、TNM分期(P<0.05)均相关.结论 TIMP-1可作为判断胃癌恶性行为的重要生物学标记物.
关键词： 胃肿瘤/遗传学 组织金属蛋白酶抑制因子 肿瘤浸润力 肿瘤转移 胃肿瘤/病理学 -
MMP-9和TIMP-1在食管鳞癌中的表达及其与淋巴结转移的关系
目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在食管鳞癌中的表达及其与淋巴结转移的关系.方法应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(S-P法)对78例食管鳞癌组织中MMP-9、TIMP-1蛋白表达进行检测.结果 MMP-9在高分化组(Ⅰ～Ⅱ级)及临床早期(Ⅰ～Ⅱ期)病例食管癌的表达明显低于低分化组(Ⅲ～Ⅳ级)及临床晚期(Ⅲ～Ⅳ期)病例的表达(P＜0.05).而TIMP-1在高分化组(Ⅰ～Ⅱ级)及临床早期(Ⅰ～Ⅱ期)病例食管癌的表达明显高于低分化组(Ⅲ～Ⅳ级)及临床晚期(Ⅲ～Ⅳ期)病例的表达(P＜0.05).MMP-9在淋巴结转移组的强阳性表达率明显高于非淋巴结转移组(P＜0.05),而TIMP-1淋巴结转移组强阳性表达率则低于非淋巴结转移组(P＜0.05).MMP-9的表达与食管鳞癌的病理分级和淋巴结转移呈正相关(P＜0.05),而TIMP-1的表达则相反,MMP-9和TIMP-1的表达呈负相关(P＜0.01).结论 MMP-9可作为判断食管鳞癌恶性生物学行为的标记物.MMP-9与TIMP-1与食管鳞癌的浸润和淋巴结转移有关,二者平衡的破坏是食管鳞癌侵袭与转移的重要因素.
关键词： 食管鳞癌 金属蛋白酶类 组织金属蛋白酶抑制因子 -
人组织金属蛋白酶抑制因子-3的分离纯化及其生物学性质
目的:从人胎盘中分离、纯化组织金属蛋白酶抑制因子-3(TIMP-3), 并对其对基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的抑制作用进行评价.方法: 利用含4 mol/L尿素的Tris-HCl缓冲液(pH 8.0), 从除去多数水溶性蛋白的胎盘匀浆液中提取难溶性蛋白.经CM52阳离子交换树脂和Sephacryl S-200凝胶过滤两步柱层析纯化后, 用SDS-PAGE鉴定TIMP-3的纯度; 用EIA和Western blot检测TIMP-3的含量; 用免疫荧光测定法检测TIMP-3对MMP-1的抑制活性.结果: 人胎盘来源的TIMP-3由相对分子质量(Mr)为24 000的非糖化蛋白和Mr为27 000的糖化蛋白组成.非糖基化的TIMP-3对MMP-1的IC50为1.1×10-10 mol/L, 糖基化的TIMP-3为1.2×10-10 mol/L, 显著高于重组的TIMP-3 (IC50为8×10-8).结论: 人胎盘来源的TIMP-3由Mr为24 000的非糖基化蛋白和Mr为27 000的糖基化蛋白两部分组成, 二者对MMP-1均具有明显的抑制作用.
关键词： 组织金属蛋白酶抑制因子 基质金属蛋白酶 蛋白纯化
