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参黄散经神阙穴与非穴位敷贴在新西兰兔血浆中的药代动力学比较
目的:比较参黄散经神阙穴给药和非穴位给药后新西兰兔体内的药代动力学差异,探讨神阙穴给药药物渗透机制.方法:将参黄散在神阙穴与非穴位敷贴给药后,检测新西兰兔血浆中大黄酸和厚朴酚经时变化浓度,通过比较二者单次给药和多次给药后药代动力学差异,并结合激光共聚焦显微技术和组织病理学,探讨参黄散经神阙穴敷贴吸收机制.结果:经神阙穴敷贴和非穴位敷贴大黄酸、厚朴酚的AU C0-∞分别为 (3 155.02±657.34)、(746.12±95.58)ng·h·mL-1和(1 000.09±134.74)、(556.75±163.58)ng·h· mL-1,表明大黄酸的吸收程度比厚朴酚高,神阙穴给药的吸收量优于非穴位吸收;激光共聚焦结果同样显示神阙穴敷贴吸收优于非穴位给药.结论:药代动力学与激光共聚焦结果显示神阙穴经皮吸收比非穴位经皮吸收效果好,其组织病理学提示药物经皮肤渗透与角质层厚度、毛囊数量等有关.
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香豆素类成分在球花石斛Dendrobium thyrsiflorum 叶和根中的分布与动态变化
目的:探讨球花石斛Dendrobium thyrsiflorum不同生长发育时期叶和根中香豆素类(coumarins)成分的分布与动态变化,为充分利用药用石斛资源提供实验依据.方法:采集球花石斛营养生长期和生殖生长期的叶、根,利用激光共聚焦显微技术观察、分析其所含香豆素类成分.结果:球花石斛的叶除叶脉近上、下表皮处的维管束纤维群外,其他部位均有香豆素类成分的存在;球花石斛根的各部位均有香豆素类成分存在,尤其在皮层以内细胞的壁和壁内周.球花石斛叶、根的香豆素类成分的相对含量在生殖生长中的盛花期均高于营养生长期;在生殖生长进入始果期二者均几无香豆素类成分分布.结论:为充分利用药用植物,可从球花石斛的叶、根中提取香豆素类成分.
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球花石斛茎中香豆素类成分的定位与相对定量
目的探讨不同生长年限、不同部位球花石斛(Dendrobium thyrsiflorum Rchb.f.)茎中香豆素类(coumarins)成分的分布与相对含量变化,为合理评价及利用药用石斛提供科学依据.方法利用激光共聚焦显微技术(laser scanning confocal microscopy,LSCM)观察二月份采收的球花石斛1-3龄茎的基部、中部和顶部的香豆素类成分.所记录数据经正态性、方差齐性检验后进行方差分析(ANOVA),并使用Tukey's检验作多重比较.结果香豆素类成分主要分布在球花石斛茎的维管束部位并以维管束外侧纤维的壁较多.统计分析显示香豆素类成分的含量在不同年龄茎的各个部位之间差异极显著或显著,显著值分别为:基部P=0.004(＜0.01);中部P=0.009(＜0.01);顶部P=0.036(＜0.05).结论若以利用香豆素类成分为目的,建议二月采收时,宜选择2龄茎.
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罗布麻叶中黄酮类成分的定位与相对定量
为探讨罗布麻不同生长年限植株上不同部位叶中黄酮类成分的分布与相对含量变化,利用激光共聚焦显微技术对7月份采收的罗布麻l～3年龄植株上部、中部、下部的叶中黄酮类成分进行组织定位和相对定量.所记录数据经正态性、方差齐性检验后进行方差分析(ANOVA),并使用LSD检验作多重比较.结果显示黄酮类成分主要分布在叶脉维管束木质部导管壁、叶脉上下方厚角组织、表皮细胞及外方蜡质层.统计分析表明罗布麻叶中黄酮类成分的含量在不同年龄植株上不同部位之间有一定的差异.
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激光共聚焦显微镜观察前胡丙素对新生大鼠缺氧再灌注心肌细胞内游离钙的影响
目的 激光共聚焦显微镜观察缺氧再灌注损伤对心肌细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i ) 的影响,以及前胡丙素对模拟心肌缺氧再灌注过程中减轻钙超载的作用.方法 采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,建立模拟缺氧再灌注模型.实验分4组:正常组:细胞正常培养;缺氧预适应组:预先缺氧2 h,复氧1 h,再缺氧12 h后,复氧2 h;前胡丙素预处理组:先予前胡丙素单体终浓度为100 μmol/L作用1 h,再行缺氧12 h,后复氧2 h;模拟缺氧再灌注组缺氧12 h,后复氧2 h.细胞上清检测LDH值.心肌细胞以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,应用激光共聚焦显微镜技术检测心肌细胞([Ca2+]i)变化.结果模拟缺氧再灌注组心肌细胞([Ca2+]i)荧光强度值显著高于前胡丙素预处理组及缺氧预适应组(P<0.01),前胡丙素预处理组与缺氧预适应组细胞内荧光强度无明显组间差异.结论 心肌细胞缺氧再灌注损伤导致Ca2+超载,而前胡丙素有明显减轻心肌细胞模拟缺氧再灌注时Ca2+超载的作用.应用激光扫描共聚焦显微镜技术可以直观地进行细胞内钙离子研究.
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组织化学在药用植物研究中的应用
自1830年比利时植物学家Raspail发表《在生理学中使用显微镜观察化学物质》一文开始,组织化学就以快捷、灵敏、操作简便等诸多优点引起了研究者们的广泛关注并被运用于医药学、生物学等众多领域[1～4].
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人脐静脉内皮细胞的补体攻膜复合物C5b-9模型建立
目的 建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的补体攻膜复合物C5b-9模型并确定其亚溶破剂量.方法 通过体外培养HUVEC,在其表面组装攻膜复合物C5b-9,激光共聚焦检测其组装情况;增加补体浓度,通过激光共聚焦定性观察细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性定量检测,确定其亚溶破剂量.结果 激光共聚焦结果显示C5b-9成功组装于HUVEC表面;当C5b6的浓度达到1.6 mg·L-1时,LDH的分泌量骤增,激光共聚焦显示该剂量下部分细胞胞膜破裂.结论 成功建立人脐静脉内皮细胞的补体攻膜复合物C5b-9模型,为研究动脉粥样硬化药物防治奠定基础.
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艾塞那肽对高糖所致新生乳鼠心肌细胞钙信号紊乱的调控作用
目的：观察GLP-1类似物艾塞那肽（EX-4）对高糖所致新生乳鼠心肌细胞钙信号紊乱的调控作用，探讨GLP-1的心脏保护机制。方法分离新生乳鼠心肌细胞，培养24 h后随机分为对照组、高糖组和高糖＋EX-4组，分别加入25 mmol／L甘露醇、25 mmol／L葡萄糖、25 mmol／L葡萄糖＋10 nmol／L EX-4，继续培养24 h。使用激光共聚焦显微技术检测各组心肌细胞自发钙火花发放频率、场刺激钙瞬变幅度、钙库容量；使用膜片钳技术记录L型钙通道电流。结果对照组、高糖组、高糖＋EX-4组的心肌细胞自发钙火花发放频率分别为（1．35±0．07）、（3．86±0．27）、（1．99±0．15）个／（μm· s），场刺激钙瞬变幅度钙瞬变幅度分别为3．95±0．08、3．34±0．07、4．09±0．12，钙库容量分别为4．95±0．18、3．26±0．09、4．59±0．15，10 mV时的L型钙通道电流密度分别为－12．46±0．58、－11．28±0．55、－13．09±0．64，高糖组心肌细胞钙火花发放频率、钙瞬变幅度较对照组升高，钙库容量、电流密度较对照组降低（P＜0．05或＜0．01），高糖＋EX-4组钙火花发放频率、钙瞬变幅度较高糖组降低，钙库容量、电流密度较高糖组升高（P＜0．05或＜0．01），与对照组比较无统计学意义。结论 EX-4能够增强心肌细胞L型钙通道电流，减少肌浆网钙漏流，从而有效纠正高糖所致心肌细胞钙调控紊乱，降低高糖所致心肌损伤。
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明党参中香豆素成分的组织定位、分布和荧光相对定量研究
目的 考察明党参不同器官中香豆素类成分的组织定位、分布及相对含量变化,为科学评价、合理采收及利用明党参资源植物提供实验依据.方法 利用激光共聚焦显微技术(Laser scanning confocal microscopy,LSCM)结合组织化学和荧光显微技术观测明党参中香豆素类成分.激光共聚焦测定波长以珊瑚菜内酯为阳性对照.所记录数据经正态性、方差齐性检验后进行方差分析.结果 香豆素类成分主要存在于植物体分泌道中,分泌道广泛分布于明党参各个器官,香豆素含量在果实中高.幼嫩期果实高于成熟期果实.统计分析结果显示香豆素类成分含量在根的不同生长阶段差异极显著,显著值分别为:皮层P=0.003(<0.01),分泌道P=0.001(<0.01);在成熟果实分泌道中与其在幼嫩果实分泌道中差异极显著(P=0.001<0.01).结论 明党参根、茎、叶、果实中均含香豆素类成分,分泌道是明党参中香豆素积累的主要场所.
关键词： 明党参 香豆素 定位、分布和相对定量 激光共聚焦显微技术 -
激光扫描共聚焦显微技术在中医药治疗脑血管疾病研究中的应用
脑血管疾病占我国人群死亡原因的第2位.脑血管疾病属于中医"中风"病,在中医药对脑血管疾病进行了长期深入研究过程中,筛选出了如灯盏花素、川芎等疗效明确的药物.为了阐明这些药物的作用机理和药效物质基础,具有三维成像和定量检测等功能的激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)在这方面的应用越来越广泛.本文首先介绍了LSCM的工作原理,然后总结了LSCM在药物作用前后脑部微循环、脑部细胞和脑部细胞内钙离子浓度变化等检测中的研究进展,认为LSCM在中医药研究脑血管疾病中还有很大的应用前景而且必将发挥出重大作用.
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激光共聚焦扫描显微镜在中药靶向制剂中研究应用进展
共聚焦显微技术是一种高分辨率、非接触式扫描光学显微技术,具有三维空间成像特性.三维点扩散函数和光学传递函数等成像理论的不断深入,促进了共聚焦显微成像技术迅速发展.激光共聚焦扫描显微镜(Confocal laser scanning microscopy,CLSM)是利用激光扫描、计算机自动化分析与共聚焦显微镜相结合的生物学图像分析技术,近年来在药学研究中的应用越来越广泛.本文就激光共聚焦扫描显微镜的基本原理,以及它在中药靶向制剂研究中的应用进展进行了综述.
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HBV表面抗原大蛋白与人胰腺CDK5RAP3蛋白的亚细胞定位研究
目的 运用激光共聚焦显微技术对CDK5RAP3与LHBs进行亚细胞定位研究,为进一步研究HBV影响糖、脂类代谢的分子生物学机制提供一定的思路和方向.方法 应用酵母双杂交系统筛选人胰腺cDNA文库中的LHBs结合蛋白基因,构建真核表达质粒pDsRed1-N1-CDK5RAP3,应用激光共聚焦显微技术对CDK5RAP3与LHBs进行亚细胞定位研究.结果 成功构建真核表达质粒pDsRed1-N1-CDK5RAP3,转染了pDsRed1-N1-CDK5RAP3质粒的细胞,红色荧光信号较集中分布于细胞浆中,与经DAPI染色的细胞核无重叠.结论 证实LHBs基因和CDK5RAP3基因在体内可以表达蛋白,并提示LHBs蛋白和CDK5RAP3蛋白均主要定位在细胞浆内.
关键词： HBV表面抗原大蛋白 CDK5RAP3 激光共聚焦显微技术
