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乌腺金丝桃总黄酮对大鼠心肌细胞心律失常模型L型钙通道电流的影响
目的:探讨乌腺金丝桃总黄酮对大鼠心肌细胞心律失常模型L型钙通道电流(ICa,L)的影响.方法:应用全细胞膜片钳技术观察乌腺金丝桃总黄酮对大鼠心肌细胞心律失常模型ICa,L电流密度峰值、ICa,LI-V曲线、ICa,L稳态激活曲线、ICa.L稳态失活曲线及ICa.L失活后恢复曲线中时间常数t值的影响,探讨其对模型细胞ICa.L异常的恢复作用.结果:乌腺金丝桃总黄酮对模型细胞不同去极化水平下ICaL电流密度峰值有抑制作用,使模型细胞ICa,LI-V曲线明显上移,ICa,L稳态激活曲线和稳态失活曲线向去极化方向移动,恢复乌头碱减小的ICa,L活后恢复曲线中t值,延长其恢复时间.结论:乌腺金丝桃总黄酮对大鼠心肌细胞心律失常模型ICa,L异常有较好的恢复作用,其抗心律失常的机制可能与抑制ICa,L有关.
关键词： 心肌细胞心律失常模型 乌腺金丝桃总黄酮 L型钙通道电流 -
吡格列酮抑制糖尿病兔心房肌细胞离子通道重构
目的 建立四氧嘧啶介导的兔糖尿病(DM)模型,评价吡格列酮对DM兔心房肌细胞离子通道重构的干预作用.方法 本实验在天津心脏病学研究所进行,选取健康成年日本大耳白兔32只随机(随机数字法)分为健康对照组(CN组)、糖尿病组(DM组)、糖尿病+吡格列酮A组[DPG组,4mg/ (d·kg)]和糖尿病+吡格列酮B组[DPI组,8mg/ (d·kg)].通过四氧嘧啶耳缘静脉注射建立兔DM模型,血糖水平≥14 mmol/L认为DM模型建立成功.模型建立成功后饲养8周取出心脏建立Langendorff灌流的离体兔心脏模型分离心房肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录细胞膜动作电位(AP)、L-型钙通道电流(ICa,L)和快钠通道电流(INa),比较各组兔心房肌细胞动作电位时程(APD)和LCa.L、INa电流密度的差别.四组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 各种刺激频率下DM组APD90和APD∞均明显延长(P＜0.05 vs.CN组),APD90频率适应性各组间差异无统计学意义(P ＞0.05 vs.CN组).DM组ICa.L电流密度增加,INa电流密度减少(P＜0.01 vs.CN组).DPG和DPI组APD90和APD50较DM组明显缩短,应用吡格列酮减小ICa.L电流密度且增加INa电流密度,吡格列酮不同给药剂量组间各细胞电生理指标差异无统计学意义.结论 吡格列酮可以抑制DM导致的兔心房离子通道重构.
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心肌梗死后β2受体对心肌细胞L型钙通道电流的调控作用
目的 研究β2肾上腺素受体(β2受体)对心肌梗死后心肌细胞L型钙通道电流(ICaL)的调控作用.方法 Wistar大鼠随机分为正常对照和心肌梗死组,制作心肌梗死模型.分离心肌细胞,应用全细胞膜片钳技术,观察心肌梗死后ICaL变化,先后给予β2受体激动剂salbutamol(10 μmol/L)及β2受体阻滞剂ICI118,551(0.1 μmol/L)后再观察,ICaL的变化.结果 心股梗死后8周ICaL显著减低37.0%(P<0.05).在正常和梗死后8周心肌细胞,β2受体激动剂均显著增加ICaL(P<0.05),心肌梗死后对,ICaL的调节作用较正常心肌细胞增强(23.4%±1.7%对33.1%±3.3%,P<0.05),这种作用可被抑制型G调节蛋白(Gi蛋白)抑制剂放大,被环磷酸腺苷依赖蛋白激酶(PKA)拈抗剂抑制.结论 β2受体对ICaL具有调节作用,且心肌梗死后这种调节作用增强,提示心肌梗死后β2受体在恶性心律失常发生中的作用可能提高.
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豚鼠心室肌细胞的分离及其基本电生理特性的观察
目的 分离豚鼠单个心室肌细胞,并观察其基本电生理特性.方法 Langendorff灌流,胶原酶法分离心室肌细胞;应用膜片钳全细胞模式记录心室肌细胞的动作电位和L型钙通道电流.结果 酶法分离得到存活杆状细胞达50%以上.全细胞电流钳模式下记录,细胞静息电位为(-69.9±3.4)mV,复位到95%时的动作电位时程(APD95)为(313.1±38.9)ms.全细胞电压钳模式下记录到典型L型钙通道电流.结论 该方法能够简单有效地获得性能稳定的心室肌细胞,尤其适用于膜片钳心电生理学的研究.
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耐钙心肌细胞的分离及其L型钙通道电流观察
目的:建立大鼠心肌细胞分离方法,用于膜片钳实验,并记录L型钙离子通道电流.方法:基于Langendorff逆行主动脉灌流模型,以经改进的心肌细胞分离技术获得单个耐钙心肌细胞,用膜片钳全细胞方式记录L型钙电流.结果:在灌流所得50%存活单个心肌细胞中约70%为耐钙心肌细胞,并记录到典型的L型钙电流.结论:这种心肌细胞分离技术能获得大量具有正常电生理特性的耐钙心肌细胞,可用于心肌细胞离子通道和信号转导机制的研究.
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阿霉素对豚鼠单一心肌细胞钙电流(ICa-L)的影响
目的探讨阿霉素(adriamycin,ADR)诱发心肌病的发病机制.方法采用膜片钳全细胞记录方法,研究ADR对豚鼠单一心肌细胞L型钙通道电流(ICa-L)的影响.结果用0.1 mmol*L-1 ADR灌流前后豚鼠心肌细胞ICa-L电流-电压(I-U)关系曲线近似倒钟形,其峰值电压在+10 mV;0.1 mmol*L-1 ADR可使ICa-L明显增大,由灌流前的(-0.93±0.05) nA(n=8)增大到(-1.31±0.08)(n=8)(P<0.01),其增大百分率为灌流前的(41.6±12.3)%(n=8).结论 ADR激活电压依赖性钙通道促进钙内流很可能是ADR造成心肌细胞内钙超载,从而诱发心肌病的机制之一.
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参麦注射液和氨茶碱对大鼠膈肌细胞L型钙通道的影响
目的:研究参麦注射液和氨茶碱对大鼠膈肌细胞L型钙通道(L-Lca)的影响.方法:采用急性酶解法获得大鼠单个膈肌细胞.在保持电位为-80 mv,去极化到60 mv,波宽为300 ms的刺激参数下,用标准的全细胞膜片钳技术记录L型钙通道,观察参麦注射液(SMI)、氨茶碱对其的影响.结果:50μl/ml的参麦注射液、10-4mol/L的氨茶碱分别使大鼠膈肌细胞平均内向峰值L型钙电流由(-6.9±0.6)pA/pF(n=7)增加到(-8.4±0.6)pA/pF和(-7.9±0.5)pA/pF,其增加的幅度为(22.14±1.7)%、(14.6±2.5)%,两组比较差异均有显著性(P＜0.05).结论:参麦注射液和氨茶碱均可激活膈肌细胞膜的钙通道,增加Ca2+内流,而使膈肌细胞的收缩力增强,该作用可能是其在临床上用于治疗膈肌疲劳的离子通道机制之一.
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艾塞那肽对高糖所致新生乳鼠心肌细胞钙信号紊乱的调控作用
目的：观察GLP-1类似物艾塞那肽（EX-4）对高糖所致新生乳鼠心肌细胞钙信号紊乱的调控作用，探讨GLP-1的心脏保护机制。方法分离新生乳鼠心肌细胞，培养24 h后随机分为对照组、高糖组和高糖＋EX-4组，分别加入25 mmol／L甘露醇、25 mmol／L葡萄糖、25 mmol／L葡萄糖＋10 nmol／L EX-4，继续培养24 h。使用激光共聚焦显微技术检测各组心肌细胞自发钙火花发放频率、场刺激钙瞬变幅度、钙库容量；使用膜片钳技术记录L型钙通道电流。结果对照组、高糖组、高糖＋EX-4组的心肌细胞自发钙火花发放频率分别为（1．35±0．07）、（3．86±0．27）、（1．99±0．15）个／（μm· s），场刺激钙瞬变幅度钙瞬变幅度分别为3．95±0．08、3．34±0．07、4．09±0．12，钙库容量分别为4．95±0．18、3．26±0．09、4．59±0．15，10 mV时的L型钙通道电流密度分别为－12．46±0．58、－11．28±0．55、－13．09±0．64，高糖组心肌细胞钙火花发放频率、钙瞬变幅度较对照组升高，钙库容量、电流密度较对照组降低（P＜0．05或＜0．01），高糖＋EX-4组钙火花发放频率、钙瞬变幅度较高糖组降低，钙库容量、电流密度较高糖组升高（P＜0．05或＜0．01），与对照组比较无统计学意义。结论 EX-4能够增强心肌细胞L型钙通道电流，减少肌浆网钙漏流，从而有效纠正高糖所致心肌细胞钙调控紊乱，降低高糖所致心肌损伤。
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氨茶碱对大鼠膈肌细胞L型钙通道的影响
目的:研究氨茶碱对大鼠膈肌细胞L型钙通道的电生理作用.方法:采用全细胞膜片钳(whole cell patch clamp)技术,当维持电位为-80mv,刺激频率为0.5Hz,钳制时间为300ms,步进电压为10mv,去极到60mv,观察氨茶碱对膈肌细胞L型钙通道(L-ICa)的影响.结果:氨茶碱用药后大鼠膈肌细胞平均内向峰值L型钙电流为(-6.5±0.5)pA/pF;正常未用药组为(-5.6士0.5)pA/pF,其增加的幅度为14.6±2.5%,两组比较差异有显著性(P＜0.01).结论:氨茶碱可激活膈肌细胞膜的钙通道,增加Ca2+内流,而使膈肌细胞的收缩力增强,为临床治疗膈肌疲劳提供理论依据.
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蛋白磷酸激酶2A调控心肌梗死后L型钙离子通道对β肾上腺素敏感性钝化的机制研究
目的:心肌梗死后心肌对β肾上腺素刺激的收缩反应显著降低,本研究的目的是探求使心肌梗死后大鼠心肌L型钙离子通道(LTCC)电流对肾上腺素能刺激钝化的细胞内信号机制.方法:心肌梗死大鼠模型建立6～8周后,用胶原蛋白酶消化技术分离获得单一的心室肌细胞,用全细胞膜片钳技术记录用丙酮酸治疗前后LTCC密度大小;分子生物学分析蛋白激酶A(PKA)的活性和蛋白磷酸激酶2A(PP2A)的活性.结果:①丙酮酸恢复了心肌梗死心肌LTCC电流对细胞内cAMP的钝化反应;②在假手术组和心肌梗死组的基础PKA活性和cAMP刺激的PKA活性是相似的;③PP2A活性和结合到a1C亚基的量在心肌梗死组显著降低;④PP2A抑制剂冈田酸明显增大了假手术组心肌LTCC电流,但在心肌梗死组没有反应,但丙酮酸使之正常化.结论:心肌梗死后心肌细胞LTCC高磷酸化状态是由于氧化应激引起的PP2A活性降低,从而钝化了肾上腺素的反应,而丙酮酸作为体内重要的还原物质,可以逆转这一过程.
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一种有效记录成骨细胞 L 型钙通道电流的穿孔全细胞膜片钳方法
目的：探讨一种有效记录成骨细胞L型钙通道电流的穿孔全细胞膜片钳方法。此方法使玻璃电极与细胞内液保持电化学连续性，使细胞内环境保持稳定，改善常规全细胞膜片钳破膜造成的破膜难和封接不稳，以及常规全细胞膜片钳破膜后造成的封接不稳。方法：以成骨细胞为研究对象，采用β－七叶素穿孔全细胞膜片钳技术，记录骨细胞L型钙通道电流。结果：采用这种穿孔全细胞膜片钳技术，能有效记录到成骨细胞上L型钙通道电流。结论：穿孔膜片钳技术是一种简便而有效的记录全细胞电流的实验方法，该方法的建立为今后更深入的研究疾病中成骨细胞的病理生理机制提供实验基础。
