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麻黄汤对变应性鼻炎大鼠炎症、AQP5及cAMP/PKA-CREB信号通路的影响
目的:探讨麻黄汤对变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)大鼠炎症的影响及作用机制.方法:SD大鼠分为正常组、模型组、麻黄汤低剂量组(2.8 g·kg-1)和麻黄汤高剂量组(5.6g.kg-1),通过卵清蛋白全身致敏结合局部激发的方法,建立AR大鼠模型,对喷嚏、抓鼻、流涕行为学进行评分.采用酶联免疫吸附检测血清中IgE、白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)含量;观察鼻黏膜组织的病理变化,鼻腔分泌物涂片脱落细胞学检查;通过免疫组织化学染色、蛋白质印迹法和RT-PCR检测AQP5、p-CREB(ser133)的表达水平.结果:与正常组比较,模型组大鼠行为学评分增加,鼻黏膜上皮下大量炎性细胞浸润、腺体扩张,血清中IL-4和IgE水平显著升高(P＜0.05),INF-γ含量显著降低(P＜0.01),AQP5和p-CREB(ser133)蛋白相对表达量显著降低,AQP5 mRNA水平减少(P＜0.01).麻黄汤各给药组能明显降低模型大鼠的行为学评分,减轻鼻黏膜组织病理改变,降低外周血IgE、IL-4水平,增加IFN-γ水平(P＜0.01),AQP5和p-CREB(ser133)蛋白相对表达量显著增加(P＜0.01),AQP5 mRNA水平显著增加(P＜0.01).结论:麻黄汤对变应性鼻炎具有一定的治疗作用,作用机制可能与调节AQP5表达及cAMP/PKA-CREB信号通路有关.
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恐伤母鼠对其仔鼠海马神经细胞突触结构及CA3区p-CREB、SYN-1蛋白表达的影响
目的 研究恐伤母鼠对其仔鼠海马神经细胞突触结构及CA3区p-CREB、SYN-l蛋白表达的影响.方法 采用旁观电击法制备恐伤母鼠动物模型,在电镜下观察其仔鼠海马区神经细胞突触结构的改变,并采用免疫组化法检测仔鼠海马CA3区的p-CREB、SYN-1的蛋白表达情况.结果 (1)模型组仔鼠海马区脑神经细胞突触小泡、线粒体都有不同程度的改变,出现明显损伤;(2)与对照组比较,模型组两种蛋白表达均减弱,差别有统计学意义(P＜0.05).结论 恐伤母鼠可使其仔鼠海马神经突触结构异常及海马CA3区p-CREB、SYN-1表达减少,这可能是其认知记忆损伤的机制之一.
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盐酸戊乙奎醚对吗啡依赖大鼠相关脑区p-CREB及M5受体的影响
目的 观察盐酸戊乙奎醚(PHC)对吗啡依赖大鼠相关脑区p-CREB及M5受体的影响.方法 将雄性SD大鼠30只随机分为对照组(NS组)、吗啡依赖组(MOR组)和PHC治疗组(PHC组),每组10只.连续7d交替皮下注射吗啡(10 mg/kg,每天1次)或生理盐水,诱导大鼠的吗啡依赖位置偏爱效应.实验第8天停用吗啡,NS组与MOR组腹腔注射等体积的生理盐水；PHC治疗组则腹腔注射PHC 1.5 mg/kg.30 min后各组大鼠行CPP测试.Western blot法检测大鼠中脑腹侧被盖区、伏隔核、前额叶皮层p-CREB的蛋白表达；实时定量聚合酶链反应(PCR)检测大鼠中脑腹侧被盖区、伏隔核、前额叶皮层M5受体的mRNA水平.结果 (1)PHC治疗组的灰区停留时间与MOR组比较显著缩短[(422±103)s 比(622 ±97)s,P＜0.01].(2)MOR组中脑腹侧被盖区、伏隔核、前额叶皮层组织中p-CREB水平显著高于NS组[(0.93±0.06)、(0.67±0.10)、(0.89±0.14)比(0.31±0.02)、(0.20±0.01)、(0.40±0.07),P＜0.01]；与MOR组比较,PHC组中脑腹侧被盖区、伏隔核、前额叶皮层组织中p-CREB水平显著降低[(0.65±0.05)、(0.58±0.04)、(0.67±0.09),P＜0.05或P＜0.01].(3)MOR组中脑腹侧被盖区、伏隔核、前额叶皮层组织中M5受体的mRNA含量较NS组显著增高(1.80、0.22、0.50比1.00、0.13、0.32,P＜0.01)；与MOR组比较,PHC 组能明显降低中脑腹侧被盖区、伏隔核、前额叶皮层组织中M5的mRNA含量(0.65、0.09、0.07,P＜0.01).结论 PHC能抑制吗啡依赖大鼠条件性位置偏爱的表达,该效应可能与PHC下调中脑腹侧被盖区、伏隔核、前额叶皮层组织中M5受体,抑制p-CREB表达有关.
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盐酸戊乙奎醚对曲马多依赖大鼠相关脑区cAMP、p-CREB及D2受体的影响
目的:观察盐酸戊乙奎醚(PHC)对曲马多依赖大鼠相关脑区cAMP、p-CREB及D2受体的影响。方法:雄性SD大鼠30只，随机分为3组（n=10）:对照组（C组）、曲马多依赖组（T组）和盐酸戊乙奎醚治疗组（P组）。连续7d皮下注射曲马多，诱导大鼠曲马多依赖条件性位置偏爱效应(CPP)。第8天P组腹腔注射PHC;C组及T组腹腔注射等体积的生理盐水。30 min后各组大鼠行CPP测试。实验结束后处死大鼠，分离相关脑区（中脑腹侧被盖区、前额叶皮层、伏隔核）。检测cAMP含量、p-CREB的蛋白表达和D2受体的mRNA水平。结果:与T组比较，P组灰区停留时间缩短；相关脑区中cAMP、p-CREB含量显著降低(P＜0.01)、D2的mRNA含量明显升高(P＜0.01)。与C组比较，T组灰区停留时间延长，相关脑区中cAMP、p-CREB含量显著增高(P＜0. 05或P＜0.01)、D2受体的mRNA含量显著降低(P＜0.01)。结论:盐酸戊乙奎醚能抑制曲马多依赖大鼠条件性位置偏爱的表达，该效应可能通过降低相关脑区cAMP含量，抑制p-CREB蛋白表达，上调D2受体mRNA等起作用。
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促肾上腺皮质激素释放激素对下丘脑神经元CREB的调控
目的:研究促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin-releasing hormone,CRH)对下丘脑神经元内CREB(CAMP-responsive element-binding protein)含量变化的调节作用.方法:取孕17d胎鼠下丘脑分散培养下丘脑神经元,采用PTI(Photon technology international,PTI)荧光成像系统测量下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度([Ca2+]i)变化;测量和分析外源性CRH对培养下丘脑神经元内钙信号变化的影响,用Western blot方法测定神经元内P-CREB的含量变化,分别与用细胞膜L-型钙通道拈抗剂尼莫地平或CRHl受体(CRH1R)特异性拈抗剂CP-154526处理下丘脑神经元后[Ca2+]i和P-CREB的变化作比较.结果:正常对照组的下丘脑神经元[Ca2+]i含量较低,外源性CRH刺激后,[Ca2+]i立即升高;预先应用尼莫地平或CP-154526处理再用CRH刺激的神经元[Ca2+]i含量的增加明显被抑制,同时也可明显抑制神经元内P-CREB含量的增加.结论:在急性应激反应中,CRH可直接与下丘脑神经元CRH1R结合,开放膜L-型钙离子通道促使钙离子内流使[Ca2+]i明显增加,从而进一步激活神经元内P-CREB信号通路.说明在调节下丘脑神经元激活过程中CRH可能起了重要的作用.
关键词： 钙通道 下丘脑神经元 P-CREB 促肾上腺皮质激素释放激素 -
不同剂量拉莫三嗪对体外培养海马神经细胞存活及其BDNF和P-CREB表达的影响
目的:观察不同浓度拉莫三嗪(Lamotrigine,LTG)对体外培养海马神经细胞存活影响及脑源性神经生长因子(Brain derived neurotrophic factor,BDNF)和磷酸化cAMP反应元件结合(Phosphorylated cAMP response element binding protein,p-CREB)的表达变化.从细胞水平角度探索拉莫三嗪对认知功能的可能影响.方法:取培养8 d的成熟海马神经细胞,随机分为拉莫三嗪低剂量组(4mg/L)、拉莫三嗪中剂量组(8mg/L)、拉莫三嗪高剂量处理组(12mg/L)和空白对照组(0.1%DMSO).维持浓度培养4 d后,MTT法检测细胞存活数量,免疫组化检测神经细胞BDNF和p-CREB.结果:(1)不同浓度拉莫三嗪处理组与空白对照组之间比较,细胞存活率有明显差异(P<0.05).而3个不同剂量拉莫三嗪组之间的细胞存活率没有显著差异(P>0.05).(2)与正常对照组比12 mg/L拉莫三嗪培养神经细胞,p-CREB和BDNF的表达显著降低(P<0.05),而4、8 mg/L拉莫三嗪剂量组无差异(P>0.05).(3)加入拉莫三嗪12 mg/L培养神经细胞BDNF和p-CREB的表达明显低于4、8 mg/L拉莫三嗪剂量组(P<0.05).结论:在4～12 mg/L的剂量范围内,拉莫三嗪均可造成体外培养神经细胞死亡,高浓度拉莫三嗪可通过神经细胞内BDNF和p-CREB的表达变化,影响神经细胞存活.
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急性酒精摄入对大鼠记忆功能的影H向及海马内p-CREB的变化
[目的]研究急性酒精摄入对大鼠记忆功能的影响,及海马内cAMP反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化水平的变化.[方法]采用Morris水迷宫方法检测急性摄入1 g/kg、2 g/kg和3g/kg剂量的酒精,以及摄入3 g/kg酒精0.5、1、2、4 h后成年雄性SD大鼠记忆功能的变化,采用Western Blot方法检测急性摄入3 g/kg后大鼠海马中CREB磷酸化(p-CREB)水平随时间的变化.[结果]Morris水迷宫检测结果显示,随酒精摄入剂量增加,潜伏期及游泳路程均呈延长趋势,其中2 g/kg组和3 g/kg组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);急性摄入3 g/kg酒精0.5、1及2 h后,潜伏期及游泳路程明显延长(P＜0.05),其中2 h高.4 h恢复.Westem Blot结果显示急性摄入3 g/kg酒精后0.5、1及2 h CREB磷酸化水平逐渐升高,2 h达到高,4 h降至正常水平.[结论]急性摄入酒精引起记忆功能改变存在量效、时效规律.大鼠海马中CREB磷酸化水平变化与其相一致,提示酒精可能通过引起海马内记忆功能相关蛋白CREB磷酸化水平升高引起记忆功能的改变.
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硝酸镧对小鼠学习记忆低剂量兴奋效应及其机制研究
[目的]观察硝酸镧对小鼠学习记忆的低剂兴奋效应及其与cAMP反应元件结合蛋白(CREB)和Jun-氨基末端激酶(JNK)蛋白磷酸化水平的关系.[方法]以0.002、0.02,0.2、2.20 mg/kg硝酸镧染毒ICR小鼠4周,每天测定小鼠水迷宫的反应时间和错误次数;试验结束时,取小鼠大脑分离海马和皮质.采用western blot测定p-CREB和p-JNK的含量.[结果]小鼠水迷宫的反应时间在染毒第4周时随着剂量的升高,呈现逐渐缩短.然后又逐渐延长的趋势,0.2 mg/kg组的反应时间短;而错误次数则出现相反的趋势,2mg/kg组的错误次数少.硝酸镧经口染毒小鼠4周,0.2 mg/kg剂量组小鼠海马的CREB(6.20±3.2)和JNK(4.11±2.92)磷酸化水平升高,与溶剂对照组相比,差异有显著性.硝酸镧染毒各剂量组小鼠的皮质CREB和JNK磷酸化与对照组相比差异无显著性.[结论]硝酸镧经口染毒引起小鼠海马CREB和JNK蛋白的磷酸化水平升高,这与小鼠的学习记忆能力的变化的趋势一致,提示低剂量硝酸镧可能通过引起学习相关蛋白磷酸化水平的升高而对小鼠的空间学习记忆产生促进作用.
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柴胡疏肝散通过mir124调控海马神经元内p-CREB、BDNF表达的机制研究
目的:探索Mir124对大鼠海马神经元内p-CREB、BDNF蛋白的影响和作用机制以及中药柴胡疏肝散对此通路的干预作用.方法:培养海马神经元,并予中药柴胡疏肝散含药血清干预,转染rno-mir124建立mir124高表达系,实时定量RT-PCR检测mir124表达水平,Western-blot检测p-CREB、BDNF蛋白表达.结果:海马神经元经转染mo-mir124后成功建立了mir124高表达系,转染后p-CREB和BDNF蛋白表达降低,差异有显著性;而予柴胡疏肝散含药血清处理可抑制mir124表达,并进一步降低p-CREB,但空白血清加转染mir124组与柴胡疏肝散处理加转染mir124组之间比较,BDNF蛋白表达差异无统计学意义.结论:海马神经元内mir124表达升高,可以降低CREB磷酸化,进一步降低BDNF蛋白表达,从而影响海马神经元的可塑性,而中药柴胡疏肝散可以抑制mir124的表达,促进CREB磷酸化.
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慢性束缚应激对大鼠血清皮质酮和前额叶皮质p-CREB表达的影响
目的:探讨慢性束缚应激对大鼠血清皮质酮水平和前额叶皮质p-CREB表达的影响.方法:将30只雄性SD大鼠随机分为对照组,慢性束缚应激1周组和2周组.比较应激前后大鼠血清皮质酮水平和前额叶皮质p-CREB表达的变化.结果:束缚应激1周组和2周组大鼠血清皮质醇浓度分别为(356.78±112.21)ng/m1、(558.49±98.32)ng/ml,均高于对照组(198.21±101.35)ng/ml),有统计学差异.束缚应激1周组(3.78±0.12)和2周组(2.39±0.08)大鼠前额叶皮质的p-CREB水平低于对照组(6.08±0.19),p＜0.01.结论:慢性束缚应激引起大鼠血清皮质酮水平增高和前额叶皮质p-CREB水平降低.
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远志对锰中毒小鼠学习记忆能力及海马区p-CREB表达的影响
目的:探讨远志对锰中毒小鼠海马学习记忆的影响以及和p-CREB表达的关系.方法:将60只健康雌性成年昆明小鼠随机分为5组,分别为对照组(CG),锰中毒组(MG),锰中毒加远志高剂量组(远志高剂量组,MHG)、锰中毒加远志中剂量组(远志中剂量组,MMG),锰中毒加远志低剂量组(远志低剂量组,MLG).采用腹腔注射氯化锰的方式制作小鼠锰中毒模型,采用灌胃的方式进行远志给药.用Morris水迷宫实验测试其空间学习和记忆能力,用免疫组织化学的方法检测海马内CA1,CA3区p-CREB的表达.结果:在定位航行实验中,远志高、中、低剂量组与锰中毒组相比,其平均逃避潜伏期下降,差异有统计学意义(P＜0.01),而与对照组相比,平均逃避潜伏期变化不大,差异无统计学意义(P＞0.05),锰中毒组与对照组比较,逃避潜伏期明显延长,差异有统计学意义(P＜0.01).在空间探索实验中,远志高、中、低剂量组与锰中毒组相比,其穿越平台次数明显增多,差异有统计学意义(P＜0.01),而与对照组相比,穿越平台次数变化不大,差异无统计学意义(P＞0.05),锰中毒组与对照组相比,穿越平台次数减少,差异有统计学意义(P＜0.01).与锰中毒组相比,远志高、中剂量组海马内p-CREB蛋白的表达显著增多,差异有统计学意义(P＜0.01),而与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05),远志低剂量组与对照组相比,其蛋白的阳性表达减少,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:药物远志能够改善锰中毒小鼠学习记忆能力的机制可能与p-CREB的表达增加有关.
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七氟醚对福尔马林致炎性痛大鼠脊髓的p-CREB表达的作用
目的:初步探讨七氟醚对福尔马林诱发的急性炎性痛大鼠脊髓内p-CREB表达的作用.方法:通过足底皮下注射福尔马林建立大鼠急性炎性痛模型,采用免疫组化的方法,观察七氟醚吸入对福尔马林炎性痛引起的大鼠脊髓内环腺苷酸反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)磷酸化的影响.结果:大鼠足底皮下注射福尔马林后,10 min内脊髓内p-CREB(磷酸化CREB)表达相比对照组明显增加并达到峰值(P＜0.001),1h时下降,但仍高于正常水平(P＜0.001);短时间吸入七氟醚不能抑制注射福尔马林后10 min的脊髓p-CREB表达(P＞0.05),但长时间吸入能完全抑制注射后1h的脊髓内p-CREB表达(P＜0.001).结论:长时间吸入七氟醚对福尔马林炎性痛引起的脊髓p-CREB的表达有抑制作用,提示长时间吸入七氟醚对福尔马林炎性痛可能具有镇痛作用,且可能机制是通过调节脊髓内p-CREB的表达.
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雌激素对全脑缺血再灌小鼠海马CA1区P-CREB和BDNF表达的影响
本文观察了雌激素对全脑缺血再灌的影响并探讨了其作用机制.切除小鼠双侧卵巢同时于颈部皮下植入雌激素(E2)缓释片(OVX-E2组)或安慰剂缓释片(OVX-PLC组).术后18 d,手术暴露双侧颈总动脉并夹闭25 min后再通,制作全脑缺血再灌模型,分别于灌流后1 h,12 h,3 d,7 d取材进行P-CREB和BDNF免疫组化染色和常规Nissl染色,研究E2对雌性小鼠全脑缺血/再灌流损伤后海马CA1区P-CREB和BDNF表达的影响.结果表明:缺血再灌后7 d,OVX-PLC组海马CA1区神经元排列稀疏,细胞层次减少,细胞数低于OVX-E2组(P＜0.01);在缺血再灌后3 d,OVX-PLC组海马CA1区P-CREB阳性细胞数低于OVX-E2组(P＜0.01),而BDNF的表达无统计学差异(P＞0.05);在缺血再灌后7 d,OVX-PLC组P-CREB和BDNF的表达均低于OVX-E2组(P＜0.01).以上实验结果提示,E2在缺血再灌的中后期可能通过上调海马CA1区P-CREB进而促进BDNF的表达,发挥神经元保护作用.
