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藏医白脉疗法对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用及对海马齿状回Jagged1表达的影响
目的：探讨白脉疗法对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用及对海马齿状回Jagged1表达的影响。方法线栓法制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型。随机分为假手术组、模型组、白脉疗法组,脑缺血1.5小时,分别再灌注7天、14天,通过氯化三苯基四氮唑( triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色观察脑梗死面积,苏木精-伊红染色法( hematoxylin-eosin staining ,HE)染色观察皮层细胞形态变化,并应用免疫组化法检测各组大鼠海马齿状回Jagged1阳性细胞数量。结果(1) TTC染色观察到正常脑组织呈鲜红色,梗死区脑组织呈苍白色,并且随着再灌注时间的延长可见梗死区扩大,白脉疗法组的脑梗死体积小于模型组,且14天时与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。(2) HE染色表明白脉疗法组脑缺血大鼠皮层神经元的损伤程度低于模型组。(3)白脉疗法可以上调脑缺血大鼠海马齿状回SGZ的Jagged1表达,术后7天、14天Jagged1阳性细胞数高于模型组、假手术组,且有显著性差异(P<0.05)。结论白脉疗法对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑损伤有一定的保护作用,且可促进大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后海马齿状回区Jagged1的表达,Jagged1的表达增加可能是白脉疗法通过Notch通路促进脑缺血损伤后内源性神经干细胞增殖分化的分子机制之一。
关键词： 白脉疗法 Jagged1 海马齿状回 局灶性脑缺血再灌注模型 -
养阴通脑颗粒有效成分在局灶性脑缺血大鼠体内药动学与药效学结合研究
目的:研究养阴通脑颗粒主要有效成分——葛根素、川芎嗪、阿魏酸在局灶性脑缺血再灌注模型大鼠体内的药动学与药效学的相应变化,建立药代动力学-药效动力学模型(PK-PD模型),为养阴通脑颗粒临床应用提供实验依据.方法:将SD大鼠随机分为正常组、模型组、给药组(葛根素50mg/kg、川芎嗪150mg/kg、阿魏酸150mg/kg),采用线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型后尾静脉注射给药,于不同时间点眼眶取血,应用HPLC检测3种有效成分的血药浓度.ELISA法检测转化生长因子-β1 (TGF-β1)、缺氧诱导因子-1α (HIF-1α)的含量.建立PK-PD模型,应用DAS 3.2.6进行模型拟合以及数据分析.结果:高效液相色谱-二极管阵列检测器测定葛根素、川芎嗪、阿魏酸方法稳定,3种有效成分线性回归方程分别为川芎嗪Y=0.0139X-0.0032(R2=0.9999),葛根素Y=0.0156X-0.0006(R2=0.9999),阿魏酸Y=0.0690X-0.0203(R2=0.9994),表明具有良好的线性关系.方法学考察稳定,日间、日内精密度RSD均＜10％,回收率均在90％～120％之间,稳定性符合药物体内分析要求;与模型组比较,给药组15min后TGF-β1、HIF-1α含量显著降低(P＜0.01);PK-PD拟合表明,给药组与两个药效指标拟合度良好,实测值和模型预测值相近.结论:高效液相色谱-二极管阵列分析方法专属性强,各成分分离度好,分析时长适宜,操作简单快速,总量统计矩可将川芎嗪、葛根素、阿魏酸的各项药动学参数整合.经养阴通脑颗粒有效成分治疗后,给药组TGF-β1、HIF-1α含量均有所改善,建立PK-PD模型,能够评价和预测中药多成分多效应之间的相关性.
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meteorin 蛋白促进氧糖剥夺后星形胶质细胞的存活
目的： meteorin在脑梗死后的表达和影响尚不明确。文中旨在探讨meteorin在局灶性脑缺血再灌注（ middle cerebral artery occlusion， MCAO）模型的表达和定位，以及通过建立体外氧糖剥夺（ oxygen-glucose deprivation， OGD）模型，观察meteorin对神经元、星形胶质细胞OGD后的影响。方法大鼠按随机数表法随机分为6组：假手术组，再灌注后6 h、12 h、24 h、3 d、7 d组。建立大鼠MCAO模型，取皮层脑组织行免疫印迹检测meteorin的表达，用免疫组化的方法检测meteorin的细胞定位。建立体外OGD模型，将原代大鼠神经元分为对照A组、OGD A组、OGD＋重组meteorin蛋白A组、OGD＋PBS A组；将原代大鼠星形胶质细胞分为对照B组、OGD B组、OGD＋重组meteorin蛋白B组、OGD＋PBS B组。用免疫细胞化学的方法检测meteorin的表达。用CCK-8染色检测其细胞活性。结果 meteorin在MCAO模型后表达下调，3 d时表达量低（ P＜0．01），主要表达于神经元和星形胶质细胞中。 meteorin作用于OGD损伤的神经元后，与对照A组A值（1．51±0．06）比较， OGD A组、OGD＋meteorin A组、OGD＋PBS A组的A值减小（0．63±0．09、0．78±0．22、0．60±0．09），差异有统计学意义（ P＜0．01）；但OGD＋meteorin A组、OGD A组、OGD＋PBS A组差异无统计学意义（ P＞0．05）。给予meteorin干预后对OGD引起星形胶质细胞损伤的影响，与对照B组A值（2．43±0．12）比较，OGD B组、OGD＋meteorin B组、OGD＋PBS B组的A值（1．24±0．17，1．51±0．30，1．23±0．16）减小（P＜0．01）；OGD B组、OGD＋PBS B组A值亦较OGD＋meteorin B组减小（P＜0．05）。结论 meteorin在局灶性脑缺血再灌注后主要表达在神经元星形胶质细胞中，给予外源性重组meteorin可促进OGD后星形胶质细胞的存活。
关键词： meteorin 氧糖剥夺 局灶性脑缺血再灌注模型 星形胶质细胞 神经元 -
2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉对大鼠脑缺血再灌注损伤后Bcl-2和Bax表达的影响
目的:观察脑缺血再灌注后2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉(2-BFI)对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响.方法:采用线栓法建立SD大鼠脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组、模型组和用药组(2-BFI 3 mg/kg).于再灌注24 h后断头取脑,用免疫组化染色法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果:用药组Bcl-2阳性细胞数明显高于模型组(P＜0.01),Bax阳性细胞数明显低于模型组(P＜0.01).结论:2-BFI于脑缺血再灌注后立即给药能显著上调Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达.
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小鼠大脑中动脉栓塞模型脑血流量与梗死体积相关性分析
目的:探讨线栓法制备小鼠局灶性脑缺血再灌注模型成功的两种评价方法间的相关性,为评价该模型提供一种新的方法和标准.方法:20只雄性KM小鼠,随机分为模型组(n=10)、假手术组(n=10),采用线栓法阻塞大脑中动脉(MCA)建立局灶性脑缺血再灌注模型,分别于术前、缺血即刻、缺血2h、再灌注即刻、再灌注24 h利用激光散斑成像技术监测各组小鼠脑血流量变化,再灌注24 h后进行神经功能评分,并行TTC染色法检测脑梗死体积百分比,相关分析判断脑血流量变化与梗死体积百分比之间的相关性.结果:与假手术组相比,模型组小鼠出现明显的神经功能异常,TTC染色显示出明显的脑梗死,梗死侧脑血流量明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).缺血即刻、缺血2h小鼠脑血流量变化与再灌注24 h脑梗死体积的相关系数R2值分别为0.55、0.28(P ＜0.05).结论:缺血即刻的皮层血流变化与梗死体积具有较好的线性相关.小鼠脑血流量变化是除神经功能评分和脑梗死体积以外另一种可判断小鼠局灶性脑缺血模型制作成功的可靠且实用的方法.
关键词： 局灶性脑缺血再灌注模型 神经功能评分 脑梗死体积 脑血流量 -
VEGF动员内源性EPCs促进MCAO/R小鼠神经功能恢复
目的 观察局灶性脑缺血再灌注模型(middle cerebral artery occlusion/reperfusion, MCAO/R)小鼠外周循环中血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)的数量变化,并应用血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)动员小鼠自体骨髓中的EPCs,观察脑梗死小鼠的神经功能恢复情况.方法 以MCAO/R小鼠为研究对象,通过腹腔注射VEGF动员体内的EPCs(每日1次,持续1周),在动员过程中的第1、4、7天进行神经功能评分,然后从内眦静脉采血,使用流式细胞仪检测MCAO/R组及MCAO/R+VEGF组小鼠外周血中EPCs的数量;并断头取脑,对脑组织TTC染色后计算并比较小鼠脑梗死体积的变化.结果 MCAO/R+VEGF组在动员过程中,外周血中的EPCs在给药第1天开始增加,第4天达到高峰并持续到第7天;并且在这3个时间点上,MCAO/R+VEGF组与其他两组比较均具有统计学意义(P<0.01).神经功能评分:MCAO/R+VEGF组在动员后神经功能评分值持续降低,且该组在给药第4天及第7天的评分较同时间点的MCAO/R组降低(P<0.05).脑梗死体积:MCAO/R+VEGF组在给药后梗死灶体积逐渐缩小,且该组在给药第4天及第7天的梗死灶体积较同时间点的MCAO/R组显著缩小(P<0.01).结论 应用VEGF能显著动员MCAO/R模型小鼠骨髓中的EPCs,被动员的EPCs能够增强出生后的血管新生,达到缩小梗死灶,促进神经功能恢复.
关键词： 局灶性脑缺血再灌注模型 血管内皮祖细胞 血管内皮生长因子 -
线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的实践探讨
目的：观察不同线栓头端处理方法及不同插线深度对线栓法制作成年Wistar大鼠大脑中动脉阻断再灌注模型（MCAO/R）造模效果及大鼠存活率的影响。方法依据改良Longa线栓法制作MCAO/R模型，插入不同深度尼龙线制作模型。于24小时、48小时后测定神经功能缺损评分并观察各组大鼠存活率。比较线栓头端蘸蜡处理法和熏香烧灼处理头端法制作MCAO/R模型48小时存活率及神经功能缺损评分。结果第二组、第三组、第四组大鼠24小时和48小时的存活率和神经功能缺损评分与第一组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。其中大鼠存活率第一组高，第四组低；神经功能缺损评分第一组低，第四组高。两种线栓头端处理方法在相同插线深度（1.8 cm、2.0 cm、2.2 cm）的存活率和神经功能缺损评分方面比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论蘸蜡法与熏香烧灼法处理线栓头端对造模成功率无明显影响。线栓插入越深，神经功能缺损评分越高，存活率越低。线栓插入深度2.0 cm更适用于建立大鼠MCAO/R模型。
关键词： 线栓法 大鼠 局灶性脑缺血再灌注模型 -
雌激素对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障作用研究
目的：观察雌激素对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障（ blood-brain barrier,BBB)的通透性、Occludin表达的影响,探讨雌激素在脑缺血中的作用。方法随机将去势雌性大鼠分为假手术组、模型组、雌激素预处理组,选取缺血再灌后4 h,24 h,3 d 3个时间点作为观察点,对各个时间点脑水肿情况、Occludin蛋白表达、血脑屏障通透性改变进行考察分析,并选取24 h和3 d作BBB超微结构电镜观察,脑水肿改变情况采用脑含水量百分数测定；蛋白质表达采用western blot方法；血脑屏障通透性改变采用伊文思蓝（EB)比色法。结果与假手术组比较,局灶性脑缺血再灌4 h模型组大鼠脑组织含水量及EB含量均增加（P<0.05),随缺血再灌时间延长,脑组织含水量、脑组织EB含量持续增加,至24 h,达到高峰（P<0.01),与同时间点模型组比较,各治疗组大鼠脑组织含水量、EB含量均有不同程度降低（P<0.05或P<0.01),以24 h组降低为显著（P<0.01)。电镜观察雌激素预处理组较模型组同时间点比较BBB TJ 开放减轻,星形胶质细胞足突及毛细血管管周水肿较轻,以3 d组显著。 Western blot检测Occludin蛋白表达,发现模型组4 h 时Occludin蛋白表达较假手术组减弱,但无显著性差异（P>0.05),24 h组Occludin蛋白表达较假手术组减弱,有显著性差异（P<0.05),3 d组Occludin蛋白表达进一步减弱,有明显差异（P<0.01),雌激素组4 h时Occludin蛋白表达较同时间点模型组比较无显著性差异（P>0.05),雌激素24 h及3 d组Occludin蛋白表达较同时间点模型组比较均升高,有显著性差异（P<0.05)。结论局灶性脑缺血大鼠动物血脑屏障超微结构可见紧密连接发生断裂,内皮细胞内小泡数量增加及星形胶质细胞足突肿胀,可能是大鼠局脑缺血时血管源性脑水肿的重要因素。大鼠局灶性脑缺血,随缺血再灌时间延长,紧密连接相关蛋白occludin的表达明显下降,提示occludin在调节紧密连接通透性变化的过程中有重要作用。雌激素上调紧密连接Occludin蛋白的表达,有可能是其维护血脑屏障完整性减轻脑水肿的机制之一。
关键词： 雌激素 血脑屏障 紧密连接 闭锁蛋白 局灶性脑缺血再灌注模型
