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首乌益智胶囊对脑缺血再灌注大鼠学习记忆和海马β淀粉样前体蛋白、早老素1 mRNA表达的影响
目的：探讨首乌益智胶囊对脑缺血再灌注大鼠学习记忆和早老素1（PS1）、β淀粉样前体蛋白(APP)mRNA表达的影响。方法80只大鼠按体质量随机分为假手术组、模型组、首乌益智胶囊组、脑复康组，每组20只。采用大脑中动脉闭塞法制作脑缺血再灌模型。造模后7 d，首乌益智胶囊组和脑复康组分别给予首乌益智胶囊溶液(52 mg/ml)、脑复康溶液(28 mg/ml)灌胃，均为1 ml/(100 g?d)，共28 d，模型组和假手术组等体积生理盐水灌胃。采用Morris水迷宫评价学习和记忆；采用实时荧光定量PCR检测大鼠海马PS1和APP mRNA表达。结果水迷宫实验显示，模型组大鼠逃避潜伏期较假手术组[(12.98±0.70)s比(9.43±0.78)s]显著延长，穿越平台次数较假手术组[(5.08±0.39)次比(7.62±0.43)次]显著减少，首乌益智胶囊组逃避潜伏期较模型组[(9.77±0.58)s比(12.98±0.70)s]显著缩短(P均＜0.01)，穿越平台次数较模型组[(7.40±0.44)次比(5.08±0.39)次]显著增加(P均＜0.01)。首乌益智胶囊组海马PS1和APP mRNA 表达[(0.99±0.01)比(1.08±0.03)]均较模型组[(1.06±0.03)比(1.12±0.04)]显著降低(P＜0.05或0.01)。结论首乌益智胶囊可抑制脑缺血再灌大鼠海马PS1和APP mRNA表达，改善学习和记忆。
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慢性脑灌注不足大鼠海马区早老素-1的表达
目的观测慢性脑灌注不足(CVI)大鼠海马区早老素-1(PS-1)基因及其蛋白产物的动态表达,以探讨脑缺血对PS-1表达的影响.方法110只雄性Wistar大鼠,随机分为对照组及CVI组,每组55只.根据手术后不同时间再将大鼠分为术后3、6、12 h,1、2、3、7、14d和1、2、4个月组,每组5只.结扎双侧颈总动脉建立CVI模型,于术后规定时间取脑组织,行原位杂交及Western印迹检测PS-1基因及其蛋白产物的表达.结果PS-1 mRNA阳性细胞主要是神经元,在大脑皮质Ⅲ、Ⅴ层锥体细胞染色强;海马CA3、齿状回的表达比CA1区更强.与对照组相比,CVI组随着缺血时间的延长,阳性细胞数量减少,结构欠清晰,呈固缩或均匀着色,但明显的细胞坏死改变较少见;组织明显疏松.半定量分析表明,与对照组比较,CVI组阳性细胞积分光密度从第12小时开始升高(7 423±1 609对6 889±2 296),至第3天达高峰(13 356±3 503对7 201±2 239,P＜0.01),之后逐渐下降至接近或略低于对照组水平.在缺血时间更长的CVI组中,齿状回PS-1mRNA阳性神经元数量较CA1区保留更多.Western印迹结果与PS-1 mRNA的变化近似,与对照组积分光密度(183±36)比较,PS-1蛋白含量于双侧颈总动脉结扎术后第12小时轻度升高(249±57),第3天达高峰(966±178),第14天下降至对照组水平,1个月后略低于对照组(103±25).结论脑缺血可以通过影响PS-1的表达促进缺血性脑损伤.
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普伐他汀对慢性脑缺血大鼠脑海马区早老素-1表达的影响
目的 观察降血脂药普伐他汀对慢性脑缺血(CVI)大鼠脑海马区早老素-1(PS-1)蛋白水平的影响.方法 36只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(7只),高脂饮食组随机分为空白对照组(6只)、普伐他汀组(7只)、单纯脑缺血组(7只)及脑缺血+普伐他汀组(9只).采用永久性结扎双侧颈总动脉建立CVI模型.于术后2个月测血脂,行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆及脑左侧海马区匀浆中β淀粉样蛋白(Aβ)水平,蛋白免疫印迹检测海马区PS-1改变.结果 (1)高脂饮食导致大鼠血浆胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)显著升高.普伐他汀可使TC降至接近正常水平,LDL-C有不同程度下降,TG无明显改善.(2)各实验组血浆Aβ水平无统计学差异.脑海马区匀浆中,空白对照组、普伐他汀组Aβ轻度升高,而脑缺血组显著升高(P＜0.01),普伐他汀可以有效降低脑缺血组Aβ水平(P＜0.01).蛋白免疫印迹结果显示高脂饮食组、空白对照组及脑缺血组PS-1全长蛋白明显上调(P＜0.05),而普伐他汀组、脑缺血+普伐他汀组PS-1蛋白可降至接近正常水平.结论 降血脂药物普伐他汀在降低脑缺血后A β产生的同时抑制了PS-1的表达上调,可能对阿尔茨海默病有一定的防治作用.
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姜黄素对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠的抗痴呆作用研究
目的 建立阿尔茨海默病(AD)大鼠模型,观察姜黄素对AD模型大鼠淀粉样前体蛋白(APP)和早老素-1(PS-1)表达的影响,探讨其相关的抗痴呆机制.方法 60只Wistar大鼠分为:对照组(A,n=15)、模型对照组(B,n=15)和低(C,n=15)、高剂量(D,n=15)姜黄素治疗组；Morris水迷宫实验检测各组大鼠的逃避潜伏时间和平台跨越次数；real-time PCR检测各组APP和PS-1 mRNA表达的变化；Western blot检测各组β淀粉样蛋白(Aβ)、APP和PS-1蛋白表达的变化.结果 与A组比较,B组逃避潜伏时间出现显著性的延长(P＜0.01),平台跨越次数显著性的减少(P＜0.01).与B组比较,姜黄素治疗的C和D组AD大鼠的逃避潜伏时间显著的减低(P＜0.05),和平台跨越次数显著增加(P＜0.05).Real-time PCR和Western blot分析显示B组APP和PS-1 mRNA和蛋白的表达均显著高于A组(P＜0.01),而姜黄素治疗的C和D组则可以显著减低APP和PS-l的表达(P＜0.05).Western blot检测显示B组中Aβ的表达水平显著高于A组,C和D组Aβ的表达水平出现了显著的减低.结论 姜黄素具有抗AD大鼠痴呆活性,下调APP和PS-1表达,减少AD大鼠脑组织中Aβ的异常聚集可能是其作用的主要机制.
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人参皂甙Rb1对阿尔茨海默病样大鼠海马结构β-分泌酶和早老素-1表达的影响
目的:观察人参皂甙Rb1对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马结构β-分泌酶(BACE)和早老素-1(PS-1)表达的影响,探讨人参皂甙Rb1防治AD的可能机制.方法:SD大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,用D-半乳糖联合三氯化铝建立AD大鼠模型,治疗组在造模后给予腹腔注射人参皂甙Rb1;采用Morris水迷宫测试大鼠的空间学习记忆能力,免疫组织化学显色和免疫印迹方法检测大鼠海马结构BACE和PS-1的表达.结果:模型组大鼠各时间段的逃避潜伏期均较对照组延长,治疗组对应时间段的潜伏期较模型组明显缩短;模型组大鼠海马结构BACE和PS-1的表达较对照组增高,而治疗组BACE和PS-1表达均较模型组明显下调.结论:人参皂甙Rb1可明显改善D-半乳糖联合三氯化铝制作的AD大鼠学习记忆障碍,其机制可能与下调海马结构BACE和PS-1的表达有关.
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阿尔采末病淀粉样前体蛋白(APP)和早老素-1(PS-1)双重基因稳定转染细胞系的建立
目的构建APP751和PS-1(M146L)双重基因稳定转染的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系,以用于β-分泌酶或γ-分泌酶抑制剂的研究和相关药物的筛选.方法从人胎盘基因文库中用多聚酶链反应(PCR)方法扩增野生型和突变型PS-1(M146L)基因,并重组克隆到PCI-neo质粒,用脂质体(LipofectAmine)法将野生型和突变型(M146L)PS-1转染至含APP751表达基因的CHO细胞,选择培养液筛选能稳定表达目的基因的CHO细胞株.用免疫沉淀和ELISA测定分析细胞表达产物.结果建立了数株能表达Aβ和PS-1的CHO细胞.在转染细胞株中高表达的SP-1为全长45 kd的PS-1蛋白;野生型PS-1和突变型PS-1(M146L)以及单纯APP751转染的CHO细胞株均可分泌Aβ多肽,且突变型PS-1(M146L)转染的细胞株分泌到条件培养液中的Aβ1-42比其它细胞株增加了近两倍.结论突变型PS-1(M 146L)的高表达可促使Aβ1～42的分泌增加.我们建立的PS-1和APP双重基因稳定转染的CHO细胞株模型,可用于β-分泌酶或γ-分泌酶抑制剂的研究和相关药物的筛选.
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阿尔茨海默病患者早老素-1基因第3外显子突变分析
目的 探讨阿尔茨海默病(AD)早老素-1(PS-1)基因第3外显子的突变特点.方法 采用聚合酶链反应及基因测序技术,对12例血管性痴呆(VD)患者、13例散发性阿尔茨海默病(SAD)患者的PS-1基因第3外显子片段进行扩增与序列分析.结果 VD患者PS-1基因第3外显子未发现突变,SAD患者中有1例PS-1基因第3外显子扩增片段发现1处缺失突变.结论 在SAD中存在PS-1基因第3外显子突变.
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早老素-1V97L基因突变对家族性Alzheimer病SH-SY5Y细胞Aβ42产生的影响
目的 探讨早老素-1(presenilin-1,PS-1)Val97Leu位点突变对家族性Alzheimer病SH-SY5Y细胞Aβ42产生的影响.方法采用一步法定点突变技术,由含有野生型(wild type,wt)PS-1的pcDNA3.1/Zeo(+)质粒合成携带有突变位点Val97Leu的突变型(mutation type,mt)PS-1质粒并转染至神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞中,筛选出稳定表达的细胞系.用ELISA法和放射免疫法来检测培养基及胞浆中Aβ42和总Aβ含量;同时检测APP及BACE表达水平的变化.结果48小时,转染突变PS-1基因的细胞,细胞内和细胞外Aβ42的含量较24小时有显著提高,且相对未转染、wt和mock转染的细胞也有显著提高,而各组间总Aβ的含量变化无明显差异.APP及BACE的表达水平各组间也无明显差异.结论 此中国人阿尔茨海默病家系中发现的PS-1基因Val97Leu突变为一新的突变位点,可选择性引起细胞内外Aβ42的增高,因此认为是一病理性突变.
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散发性阿尔茨海默病早老素-1基因第5号和第8号外显子突变研究
目的探讨散发性阿尔茨海默病(SAD)与早老素-1(PS-1)基因突变的关系.方法采用多聚酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析技术对68例SAD患者的PS-1基因第5号和第8号外显子进行突变检测.结果所有病例PS-1基因第5号和第8号外显子的PCR-SSCP分析结果均显示两条单链和一条双链,未发现异常泳动,推断没有存在突变.结论SAD和家族性AD(FAD)的致病原因存在差异,在SAD中PS-1基因第5号和第8号外显子不存在突变或突变率极低,并非SAD致病的重要因素.
关键词： 阿尔茨海默病 早老素-1 基因突变 多聚酶链反应-单链构象多态性 -
突变型早老素-1致维甲酸诱导PC12细胞ERp29表达增强及其意义
目的 探讨突变型早老素-1(PS-1)对维甲酸(RA)诱导PC12细胞基因表达的影响,寻找与阿尔茨海默病发病机制相关的基因.方法 分别建立表达突变型和野生型PS-1的经RA诱导的基因工程化PC12细胞,应用银染mRNA差异显示技术研究突变型PS-1对RA诱导的PC12细胞基因差异表达的影响.结果 成功建立了表达突变型和野生型PS-1的经RA诱导的基因工程化PC12细胞后,应用银染mRNA差异显示技术发现29型内质网蛋白(ERp29)在表达突变型PS-1的基因工程化PC12细胞中高表达,并与细胞凋亡密切相关.结论 突变型PS-1致细胞内ERp29的表达增强可能是内质网应激的结果,ERp29表达增强与阿尔茨海默病的发生与发展可能存在着密切关系.
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Wnt信号传导通路在阿尔茨海默病中的研究进展
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种中枢神经系统的退行性变性疾病,主要表现为进行性的认知功能障碍和精神神经异常.AD的病因与发病机制至今尚未阐明.由于在神经系统的发育过程中,Wnt信号传导通路在细胞间黏附及细胞分化上起着重要作用,所以它越来越受到人们的关注.近来有研究表明Wnt信号传导通路中多个信号分子的改变均与AD的发生、发展密切相关.
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离体SH-SY5Y细胞内酸化对早老素-1表达的影响
目的 研究早老素-1(PS1)在细胞内pH值降低时的表达情况,探讨细胞内pH值变化对γ-分泌酶活性的影响.方法 本研究抑制细胞表面酸碱调节基因Na+-H+交换泵第一亚型(NHE1)的表达和酸化培养基,使细胞内pH值降低,构建细胞内酸化的SH-SY5Y细胞模型,将实验对象分为正常组、阴性对照组、NHE1组和酸化培养基组,应用ELISA法及western blotting,检测各组PS1的蛋白浓度及表达,分析细胞内pH值变化对PS1表达和活性的影响及其与γ-分泌酶的关系.结果 检测胞膜离子交换蛋白NHE1组和酸化培养基组细胞内的PS1活性和蛋白表达较正常对照组和阴性对照组有显著增高(P＜0.05),而NHE1组和酸化培养基组组间比较无明显差异,正常对照组和阴性对照组组间比较也无明显差异.结论 细胞内pH值降低可促使PS1表达量增加,活性增高,提示细胞内pH值降低可能促使γ-分泌酶活性增高.
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家族性阿尔茨海默病早老素-1基因突变研究
目的探讨早老素-1(presenilin-1, PS-1)基因的突变在家族性痴呆患者发病机理中的作用. 方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性(polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism, PCR-SSCP)和DNA测序技术检测2例家族性阿尔茨海默病型痴呆(familial Alzheimer's disease,FAD)患者、53例散发性阿尔茨海默病型痴呆(sporadic Alzheimer's disease,SAD)患者、60例血管性痴呆(vascular dementia,VD)患者及90名健康老年人 PS-1基因第6外显子.结果 DNA测序在SSCP泳动异常标本中发现1123位点和1300位点发生错义突变,其中,FAD患者2例均在1300位点发生突变,SAD组2例在1123位点发生突变、2例在1300位点突变,VD组1例在1123位点发生突变;1123位点发生C→G突变(Cys 23 Trp), 1300位点发生A→C突变(Asp 200 Ala).结论 FAD及SAD患者存在 PS-1基因第6外显子突变,上述两个突变位点均位于早老素蛋白的重要功能区,此突变可能为病理性突变.
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阿尔茨海默病患者早老素-1基因与ApoE基因关联分析
目的 探讨早老素-1(presenilin-1,PS-1)基因第8外显子3'端内含子,Apolipoprotein E(ApoE)基因等位基因多态性相互作用在散发性阿尔茨海默病(sporadic Alzheimer's disease,SAD)发病机理中的作用.方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测了75例SAD患者和73名正常老年人的PS-1基因第8外显子3'端内含子、ApoE基因等位基因多态性分布.结果 PS-1、ApoE基因多态性与SAD发病有明显关联:SAD发病与PS-1基因的等位基因2呈明显负关联,等位基因1呈明显正关联.SAD发病与E2等位基因呈明显负关联,与E3、E4等位基因无关联.ApoE基因多态性和PS-1基因多态性相互作用对SAD发病无明显影响.结论 PS-1基因的等位基因2和ApoE2等位基因对SAD发病可能有保护作用;PS-1基因的等位基因1可能是SAD发病的危险因素之一,ApoE基因多态性与PS-1基因多态性相互作用对SAD发病无明显协同作用.
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D-半乳糖联合染铝大鼠海马结构Aβ3及相关蛋白的表达
目的:探讨D-半乳糖联合染铝的阿尔茨海默病大鼠海马结构Aβ及其相关蛋白的表达及其分布.方法:30只雄性SD大鼠随机分为2组,即:对照组和模型组(n=15).模型组每日腹腔注射D-半乳糖60 mg/kg和灌胃三氯化铝500 mg/kg,连用60 d;对照组给予等量生理盐水进行腹腔注射和灌胃.铃木镀银法观察神经原纤维缠结的形成,确定模型是否成功.免疫组织化学法观察海马结构三个亚区的Aβ、β分泌酶(BACE)和早老素-1(PS-1)蛋白的表达.结果:铃木镀银染色可见模型组大鼠颞叶、顶叶皮层及海马神经元内的神经原纤维缠结.模型组大鼠海马CA1、CA3区及齿状回Aβ表达较强,与对照组相比差异显著(P＜0.01);模型组海马CA3区神经元的BACE和PS-1蛋白表达量较对照组明显增加(P＜0.01).结论:D-半乳糖联合染铝的阿尔茨海默病大鼠海马结构Aβ、BACE及PS-1表达均明显上调,可能是导致AD大鼠功能障碍的主要原因.
