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陈皮-半夏对内皮细胞损伤保护机制的研究
目的 研究陈皮-半夏能否通过对Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC-3)等自噬通路的调节作用及其空白干预内皮细胞损伤的机制.方法 分离培养脐静脉内皮细胞(HUVEC),将其实验分为空白对照组,ox-LDL损伤模型组(模型组),陈皮-半夏小、中、大剂量组.MTT法,观察陈皮-半夏对内皮细胞存活率的影响;Western blot法观察陈皮-半夏对内皮细胞Beclin-1、LC-3表达的影响.方法 与空白对照组比较,模型组细胞存活率显著下降(P＜0.01),Beclin-1、LC-3表达显著升高(P＜0.01).陈皮-半夏中、大剂量组细胞存活率均较模型组显著上升(P＜0.01),Beclin-1水平较模型组显著下降(P＜0.01).陈皮-半夏3个剂量组的LC-3水平均较模型组显著下降(P＜0.05).结论 陈皮-半夏可能通过抑制血管内皮细胞中Beclin-1、LC-3的表达,发挥提高内皮细胞存活率治疗动脉粥样硬化的作用.
关键词： 陈皮 半夏 Beclin-1基因 微管相关蛋白1轻链3 内皮细胞 大鼠 -
正常和低氧环境下转染 beclin-1对乳腺癌细胞BT-549的抑制作用
目的 研究转染beclin-1基因对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞BT-549在正常及低氧环境下的增殖抑制情况,促自噬和促凋亡作用,以及其对细胞迁移能力的影响.方法 利用脂质体将真核载体pDS-RED-C1-beclin-1转染进入BT-549细胞作为实验组,空白组细胞和转染pDS-RED-C1空质粒的细胞分别作为空白对照组和阴性对照组,用RT-PCR 检测转染后beclin-1mRNA表达,Western blot检测转染后蛋白表达.在正常及低氧环境下分别培养后用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测细胞增殖率,吖啶橙染色后用荧光显微镜观察细胞自噬情况,流式细胞仪检测细胞凋亡百分比.通过细胞划痕试验研究转染beclin-1基因对细胞迁移能力的影响.RT-PCR和Western blot结果 及MTT所测增殖率结果 用单因素方差分析,自噬和凋亡的差异采用卡方检验分析.结果 beclin-1基因被成功转染进细胞;转染后目的 基因组beclin-1 mRNA和蛋白表达均高于对照组,72 h明显.MTT测定结果:正常与低氧环境下实验组48 h和72 h增殖率均低于对照组(48 h P1=0.002,P2=0.000;72 h P1=0.006,P2=0.001; P1和P2分别为正常与低氧环境下统计结果 ),beclin-1与低氧刺激有明显交互作用(P=0.016),即二者能增强彼此对细胞增殖率的抑制作用.吖啶橙染色镜下观察正常和低氧环境下实验组自噬发生率明显高于空白对照组(P1=0.004,P2=0.001),阴性对照组与空白对照组间差异无统计学意义(P>0.050).流式细胞仪检测正常和低氧环境下实验组凋亡发生率均高于空白对照组(P1=0.045,P2=0.008).体外划痕试验发现转染beclin-1后细胞迁移能力降低.结论 在正常和低氧环境下,转染beclin-1基因可抑制TNBC细胞BT-549增殖,促进细胞发生自噬及凋亡,并且降低其迁移能力.
关键词： Beclin-1基因 乳腺肿瘤 自噬 -
自噬与胃癌相关肿瘤基因的作用研究
自噬是一个保守的依赖溶酶体的降解途径，可降解长寿命蛋白质、细胞器和部分细胞质，是细胞内的再循环系统。自噬对肿瘤的发展过程扮演双重角色，在肿瘤发生早期，自噬能抑制癌前细胞的持续生长而减少肿瘤的发生；当肿瘤进展到中晚期阶段时，肿瘤细胞可利用自噬机制对抗营养缺乏和缺氧而获得生存。自噬与胃癌的发生、发展有非常密切的联系，但与胃癌发生的详细机制尚不清楚。该文就自噬与胃癌相关肿瘤基因之间的作用关系予以综述，希望能对胃癌的预防和诊治提供新的策略。
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微管相关蛋白轻链3及自噬基因Beclin-1在低氧性肺动脉高压大鼠模型肺组织中的表达
目的 探讨微管相关蛋白轻链3(LC3)及自噬基因Beclin-1在低氧性肺动脉高压大鼠肺组织中的表达及其意义.方法 成年雄性SD大鼠30只,随机均分为低氧组和常氧组.建立低氧性肺动脉高压模型,采用蛋白质免疫印记法分别检测两组大鼠肺组织中LC3含量及Beclin-1蛋白的表达.结果 低氧组肺组织中LC3及Beclin-l蛋白含量较对照组显著增高(P＜0.05).结论 低氧性肺动脉高压大鼠的自噬途径被激活,可能参与了低氧性肺动脉高压的发病过程.
关键词： 低氧性肺动脉高压 Beclin-1基因 微管相关蛋白轻链3 自体吞噬 -
AEG-1与BECN-1在甲状腺乳头状癌中的表达及其临床意义
目的：探讨甲状腺乳头状癌（PTC）组织中星形细胞上调基因-1（AEG-1）与Beclin-1基因（BECN-1）的表达及其临床意义。方法选取2015年10月至2016年5月于天津医科大学总医院行甲状腺全切术的30例PTC患者的组织标本，患者均为单侧发病。其中PTC组织取自患侧甲状腺，正常组织取自对侧正常甲状腺。采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测AEG-1与BECN-1在PTC中的表达水平，并分析两者在PTC中的表达与患者临床病理特征的关系。结果 AEG-1在PTC和正常组织中的mRNA测得值分别为0．6261（0．7414）和0．0498（0．0118），差异有统计学意义（Z＝－4．488，P＝0．000）。BECN-1在PTC和正常组织中的mRNA测得值分别为0．0679（0．1981）和0．7857（0．3617），差异有统计学意义（Z＝－5．441，P＝0．000）。在PTC 中，AEG-1和BECN-1的表达与TNM分期（Z＝－3．980，P＝0．000；Z＝－2．265，P＝0．023）、淋巴结转移（Z＝－3．190，P＝0．001；Z＝－2．640，P＝0．008）相关，但与发病年龄（Z＝－1．203，P＝0．229；Z＝－1．162，P＝0．245）、性别（Z＝－1．222，P＝0．222；Z＝－0．453，P＝0．651）、肿瘤大小（Z＝－1．496，P＝0．135；Z＝－1．166，P＝0．244）无关。在PTC中AEG-1与BECN-1的表达呈负相关（r＝－0．343，P＝0．007）。结论 AEG-1在PTC组织中的表达高于正常组织，BECN-1在PTC组织中的表达低于正常组织，AEG-1和BECN-1的表达与TNM分期和有无淋巴结转移相关，可作为PTC预后评价的参考指标。
关键词： 甲状腺肿瘤 星形细胞上调基因-1 Beclin-1基因 -
自噬相关基因Beclin-1在间歇期痛风性关节炎患者外周血单个核细胞中的表达变化及意义
目的 探讨自噬相关基因Beclin-1在间歇期痛风性关节炎(IGA)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达变化及意义.方法 采集40例间歇期IGA男性患者(IGA组)、80例体检健康男性(正常对照组)外周静脉血,分离PBMC并进行培养.用实时荧光定量PCR、Western blotting技术分别检测PBMC中Beclin-1 mRNA、蛋白表达.随机抽取5例IGA患者外周静脉血20 mL,分为未刺激组及尿酸盐晶体(MSU)刺激1、3、6 h组并提取其PBMC,用Western blotting技术检测PBMC中Beclin-1蛋白表达.随机抽取5例IGA患者、5例体检健康者外周静脉血20 mL,将血液标本均随机分为空白对照组、雷帕霉素组、自噬抑制剂组.空白对照组不做干预,其他各组均加入相应试剂进行干预并提取PBMC,用Western blotting技术检测PBMC中Beclin-1蛋白表达;用酶联免疫吸附试验测定干预后IGA患者血浆IL-1β水平.结果 与正常对照组比较,IGA组PBMC中Beclin-1 mRNA、蛋白相对表达量低(P均<0.05).MSU刺激1、3 h组PBMC中Beclin-1蛋白相对表达量较未刺激组高(P均<0.05),而MSU刺激6 h组Bec-lin-1蛋白相对表达量较未刺激组低(P<0.05).IGA患者PBMC中Beclin-1蛋白相对表达量比较:雷帕霉素组较空白对照组低(P<0.01),且自噬抑制剂组高(P均<0.05),恢复至空白对照组水平;体检健康者PBMC中Bec-lin-1蛋白相对表达量比较:空白对照组、MSU组、雷帕霉素组比较差异无统计学意义(P均>0.05),而自噬抑制剂组较其他组低(P均<0.05).IGA患者血浆IL-1β水平比较,MSU、雷帕霉素组较空白对照组高(P均<0.05),雷帕霉素组较MSU组低(P<0.05),自噬抑制剂组较空白对照组、MSU组高(P均<0.05),自噬抑制剂组之间比较差异无统计学意义(P均>0.05).结论 自噬相关基因Beclin-1在间歇期IGA患者外周血PBMC中呈低表达,其可能在IGA发展过程中参与自噬途径并终被自噬溶酶体降解.
关键词： 痛风性关节炎 间歇期 细胞自噬 Beclin-1基因 -
Beclin-1表达对舌癌细胞 Tca8113顺铂敏感性的影响
目的：观察自噬基因Beclin-1表达对舌癌细胞Tca8113顺铂敏感性的影响。方法分别构建过表达和干扰Beclin-1的真核表达载体，并建立稳定表达和稳定干扰Beclin-1的Tca8113细胞模型，RT-PCR和Western blotting法检测Beclin-1表达，MTT法检测上述细胞模型对顺铂的敏感性。结果成功建立稳定表达Beclin-1的细胞模型Tca8113/pLEX-Beclin-1，其与对照细胞系对顺铂的半数抑制浓度（IC50）分别为（11．99±0．34）、（5．03±0．16） mg/L，P＜0．01；成功建立干扰Beclin-1表达的细胞模型Tca8113/pRNAT-Beclin-1-sh1，其与对照细胞系对顺铂的IC50分别为（2．76±0．09）、（5．01±0．18）mg/L，P＜0．01。结论下调Beclin-1表达可增加舌癌细胞Tca8113对顺铂的敏感性。
关键词： 舌癌 Beclin-1基因 顺铂 药物疗法 化学疗法
