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细菌壁缺陷对沙门菌代谢特性影响
目的了解细胞壁缺陷沙门菌的代谢特性、某些酶活性及化学构成的特点,探讨细胞壁缺陷对沙门菌代谢的影响及其可能机制.方法定量检测与分析伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌及其经L型变异后形成的细胞突变株(CWDM)和伤寒沙门菌CWDM返祖菌的细胞裂解物中无机离子磷(PO43-)、镁(Mg2+)、钙(Ca2+)、及总蛋白、三酰甘油(TG)、胆固醇(Tch)含量及某些代谢酶的活性,用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)检测伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌的细菌型、CWDMs及伤寒沙门菌CWDM返祖菌的乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶同功酶.结果沙门菌CWDMs的PO43-、Mg2+、Ca2+含量明显低于其亲代细菌型和伤寒沙门菌粗糙型返祖菌( P＜0.01).两菌的CWDMs均可检测出Tch和TG,而其亲代细菌型及伤寒沙门菌返祖菌则不能检出Tch和TG.代谢酶活性检测显示两菌的CWDMs乳酸脱氢酶(LDH)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)的活性明显低于其亲代细菌型或返祖菌(P＜0.01).PAGE检测显示两菌的CWDMs及其亲代细菌型和伤寒沙门菌返祖菌均具有乳酸脱氧酶(LDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)同功酶活性,细菌型及返祖菌有4种不同泳动速率的LDH同功酶,CWDMs仅显示2种快泳动的LDH同功酶,但缺乏慢泳动的2种LDH同功酶.两菌的细菌型和伤寒沙门菌粗糙型返祖菌经PAGE电泳可见一条漫泳动MDH同功酶带,CWDMs电泳后可见快慢泳动2条MDH同功酶带.分光光度法检测证实,细菌型与粗糙型的MDH活性相似;CWDMs的活性则明显较低.结论细胞壁缺陷可导致沙门菌的多种代谢酶活性及某些离子含量明显降低,具有与其亲代细菌型不相同的乳酸脱氧酶同功酶和苹果酸脱氨酶同功酶谱以发显著的Tch和TG代谢活性.由于沙门菌的细胞壁缺陷突变株在获得外源遗传物质时能够有规律地返祖并恢复与其亲代细菌型相同的各种代谢特性,提示细胞壁缺陷所导致沙门菌的代谢改变极可能与相关基因的的表达被抑制或开放有关.在沙门菌的染色体上可能存在有胆固醇代谢等基因,也可能是由于细胞壁缺陷导致了沙门菌的基因发生重排.
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酶校准品在血清酶测定结果标准化中的应用
目的研究酶校准品用于校准 不同的“仪器/试剂”测定系统 时，能否增加各系统间血清酶测定结果的可比性。方法 在日立7170A和CX9全自动生化分析仪上用4种不同的试剂 分别测 定150份不同浓度分布的新鲜血清中的丙氨酸转氨酶(ALT)，天门冬氨酸转氨酶(AST)，碱 性 磷酸酶〔(ALP)，100份〕，肌酸激酶(CK)，γ-谷氨酰转肽酶(GGT)，乳酸脱氢酶(LD)等 6种酶的 活性。同1份标本用4种不同的“仪器/试剂”测定系统进行校准前和校准后测定，比较各 测定系统测定前后的均值。结果发现不同的“仪器/试剂”系统间的测定结果存在一定差异(各系统间均值的 CV值≥7.0%，其中ALP为27.0%，GGT为17.4%)，用统一的酶校准品校准后，各系 统间测定 结果的差异明显减小(除ALP和GGT的CV值分别为6.6%和5.1%外，其余各项目的CV值均 ＜5%)。结论统一的某些酶校准品能增 加不同的测定系统间结果的可比性。
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血吸虫酶类研究进展
酶在血吸虫生物学功能中起着相当广泛而重要的作用,涉及到物质代谢的各方面.本文总结了关于血吸虫的营养代谢、糖酵解、有氧代谢、虫卵的孵化、幼虫移行、尾蚴的穿透及免疫逃避、疫苗候选基因等方面的酶学研究进展.
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肺孢子虫肺炎大鼠支气管肺泡灌洗液酶含量变化及大蒜素治疗对其影响
目的 研究卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)酶含量变化以及大蒜素治疗对其影响.方法 用地塞米松连续肌肉注射Wistar大鼠,诱导建立PCP大鼠模型.诱导第3、6、9周分别于后腿肌肉深部注射大蒜素治疗(10mg/kg,1次/d,连续5 d).同时设甲氧苄氨嘧啶(TMP)-磺胺甲基异噁唑(SMZ)治疗对照组(SMZ/TMP组)、PCP模型对照组和空白对照组.于后1次治疗3 d后处死大鼠,无菌收集BALF,测定谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、胆碱脂酶(CHE)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)及其同工酶(CKMB)、a-羟丁酸脱氢酶(HBDH)、a-L-岩藻糖甘酶(AFU)、5'-核苷酸酶(5'NT)及腺苷脱氨酶(ADA)含量.结果 PCP模型组ALP含量[(573.41±350.63)U/L]显著高于空白对照组[(210.56±114.41)U/L](q=4.682,P＜0.01)、大蒜素治疗组[(392.07±217.57)U/L](q=3.851,P＜0.05)以及SMZ/TMP组[(325.21±180.65)U/L](q=4.380,P＜0.01).CK、CKMB及5'NT含量,PCP模型对照组[依次为948.94±403.43、489.47±254.46及(6.76±3.11)U/L]显著高于空白对照组[426.22±319.00、213.33±144.54及(3.22±1.20)U/L](q=4.696,3.784,3.812,P＜0.05).AST、ALT、CHE、LDH、HBDH、AFU及ADA含量,4组之间差异均无统计学意义(F=1.852,0.958,2.470,1.423,1.178,1.342,0.611,P＞0.05).结论 PCP大鼠BALF中ALP、CK、CKMB及5'NT含量显著升高,大蒜素治疗可使ALP含量显著降低.
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密达利对湖北钉螺酶组织化学作用的观察
目的 观察经密达利(40%四聚乙醛水剂)处理的钉螺组织酶活性变化,探讨密达利杀螺机制.方法 取湖北钉螺60只,均分2组.实验组用100 mg/L密达利浸泡2 d,取存活的钉螺,分离完整的软体组织,制作冷冻切片,用酶组织化学方法对乳酸脱氢酶(LDH),琥珀酸脱氢酶(SDH)、细胞色素C氧化酶(CCO)、乙酰胆碱酯酶(AChE)和一氧化氮合酶(NOS)进行染色,用显微图像分析系统定量测定其平均灰度值,每种酶均取10只钉螺组织切片测定其灰度值.同时设未经药物处理的湖北钉螺对照组.结果 钉螺肝组织、口囊组织的CCO灰度值,实验组分别为0.2042±0.0463和0.1695±0.0526,分别低于对照组的0.5556±0.0878和0.6082±0.0723,两者差异有统计学意义(t=12.26,P＜0.01);神经节的AChE灰度值,实验组为0.2618±0.0330,低于对照组的0.5100±0.0295,差异有统计学意义(t=18.72,P＜0.01).口囊、肌纤维中的LDH灰度值,实验组分别为0.5801±0.0982和0.4043±0.1091,分别高于对照组的0.1798±0.0476和0.0624±0.0342;咽管的NOS灰度值,实验组为0.3502±0.1310,高于对照组的0.2139±0.0603,差异有统计学意义(t=3.41,P＜0.01).肌纤维和口囊的SDH灰度值,实验组分别为0.1835±0.0771和0.4649±0.1039,与对照组间的差异无统计学意义(t=0.51,P＞0.05).结论 密达利能抑制钉螺神经传导和能量代谢酶活性.
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辅酶Q的生物合成途径以及相关的酶和基因
综述了辅酶Q在生物体中的合成途径以及催化各步反应的酶和编码基因.
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单甲氧聚乙二醇化学修饰药物酶的研究进展
用单甲氧基聚乙二醇(1)化学修饰药物酶是生化药物研究开发的重要手段之一.本文综述了1化学修饰药物酶的一般方法及修饰后酶在生物和理化性质方面的变化,同时对1研究前景进行展望,并指出了尚待解决的问题.
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草酸代谢酶的研究进展
草酸是一种高毒性化合物,它在体内的蓄积可引起各种病理状态,包括肾结石、高草酸尿症等.生物草酸代谢酶有草酸氧化酶、草酸脱羧酶和草酰辅酶A脱羧酶/甲酰辅酶A转移酶.对这些酶的研究可为预防草酸相关疾病提供新的途径.
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几种酶在大鼠内吞体膜上的细胞化学定位
目的研究多种酶在不同器官内吞体膜上的活性.方法用细胞化学方法,以Ce3+或Pb2+作捕捉剂,分别检测碳酸酐酶,Mg2+-ATP酶,Na+-K+-ATP酶,5′-核苷酸酶,NADPH oxidase 在大鼠肾近曲小管上皮细胞、肝细胞以及人体嗜中性白细胞内吞体膜上的酶活性.结果上述碳酸酐酶,Mg2+-ATP酶,Na+-K+-ATP酶,5′-核苷酸酶及NADPH oxidase 分别在大鼠肾脏近曲小管,肝脏及人体白细胞的内吞体膜上都有酶活性存在.结论内吞体功能复杂,它可能与细胞的pH值,水盐代谢,能量、蛋白质的代谢以及活性氧的产生等都有一定的关系.
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不同检测系统4种心肌酶测定结果的比对与临床可接受性评价
目的通过对同一检验科不同检测系统进行方法比对和偏差评估,探讨不同检测系统间天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)和肌酸激酶心型同工酶(CK-MB)4种心肌酶测定结果是否具有可比性,为血清酶测定的标准化和临床实验室认可提供实验数据.方法参考NCCLS的EP9-A文件,以日立7170生化分析仪、罗氏原装试剂、c.f.a.s校准品和质控品组成的检测系统(已通过ISO/IEC 17025标准认可)为比较方法,其他不同检测系统为实验方法,检测病人新鲜血清中4种心肌酶,用配对t检验和回归统计法分析实验方法(Y)和比较方法(X)测定结果均值处的相对偏差或医学决定水平处的系统误差,以美国临床实验室修正法规(CLIA'88)规定的室间质量评价允许误差范围的1/2为标准,判断不同检测系统的临床可接受性.结果除检测系统3、4的AST结果,检测系统1、2、3的CK-MB结果与比较方法的系统误差或均值处的相对偏差不能被接受外,其余项目测定结果的偏差临床可以接受.结论当同一实验室同一检验项目存在2个以上的检测系统时,应进行方法比对和偏差评估,判断其临床可接受性,以保证检验结果的可比性.
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选择适合测定系统的酶校准品
目的研究使用不同的酶校准品校准不同的"仪器/试剂"测定系统的适用性.方法用Dimension RXL临床生化测定系统和配套试剂以及RXL生化仪与Randox、科华-东菱、中生试剂组成的测定系统分别测定50份新鲜血清和BM cfas、Dade、Randox校准品的ALT、AST 、LDH、GGT的活性,然后用各校准品标示值与测定值之比作为校正因子,校正50份新鲜血清的测定结果,后进行校正前后的结果比较和校准品可转换性分析.结果 50份新鲜血清校准前后ALT的CV为10.85%和23.07%,AST的CV为10.48%和24.40%,LDH的CV 为3.89%和8. 62%.GGT的CV 22.63%和26.37%.校准后各项目结果的差异没有减小,反而有增大的倾向. 结论临床实验室必须使用适合自己测定系统的校准品才能保证酶校准结果的准确可靠.
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肠杆菌科菌持续高产AmpC酶的检出及耐药分析
目前认为,肠杆菌科细菌对三代头孢菌素的耐药主要是由质粒介导的超广谱β-内酰胺酶(ESBLS)[1-2]和染色体介导的持续高产AmpC酶[3-4]的产生引起.
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2台日立7600生化分析仪6种血清酶测定结果可比性评价
我科于2001年和2006年先后引进2台7600-020E生化分析仪,由于仪器的损耗程度不同,因此测定结果也可能有一定差异.我们参考文献[1],选取ALT、AST、γGT、ALP、LDH、CK 6种酶进行比对测试.
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实测摩尔吸光度在酶活性测定质量控制中的应用
目的为了提高酶活性测定的质量水平.方法通过以实测摩尔吸光度(ε)校正酶活性测定的计算因子(K值),来观察各实验室经过校正K值后测定的结果是否比校正前测定的结果更具可比性.结果通过对全省三级医院的调查测试,经实测ε校正K值后的测定结果,其离散度远小于校正前的测定结果. 结论结果表明K值的设置不当,是影响酶活性测定结果准确性的重要原因之一.
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血清酶测定室间质量控制的探讨
用连续监测法测定血清(或组织中)酶催化活性水平,是根据摩尔消光系数计算酶活力单位,并不使用标准品来计算,又因测定结果受多种因素影响,所以酶测定结果的室间变异明显大于其他测定项目,实验室间的可比性差,易给临床诊断、治疗造成混乱.
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酶类测定底物耗尽的监测
在用生化分析仪检测酶类项目时,常有一些高活性样品使底物耗尽,如果仪器不具备识别功能或识别参数设置不当就会产生错误结果.为能正确反映测定结果,多数全自动生化分析仪设置了底物耗尽指示系统.现就东芝MEGA800生化分析仪采取的监测底物耗尽的办法,以检测ALT为例介绍如下.
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基于“实验设计”的临床酶学参考方法测量不确定度评定模型的建立
目的 以血清γ-谷氨酰基转移酶(GGT)催化活性参考方法测量不确定度评定为例,建立临床酶学催化活性测量参考方法的不确定度评定模型.方法 依据GGT参考方法测量流程,以GGT催化活性浓度为核心评价指标,确立影响GGT催化活性浓度测量的主要因素.采用实验和理论评估相结合的方法对已确认的各因素对GGT催化活性测量的影响量进行评定.以波长和温度对GGT催化活性参考方法测量影响量的评估为例,介绍基于“实验设计”的各因素对GGT参考方法测量灵敏系数的评定方法,在此基础上按GUM理论评定每一因素的相对标准不确定度并将其作为一个独立的不确定度分量按GUM理论合成到GGT测量的标准不确定度中,以标准不确定度×2得到扩展不确定度,建立GGT参考方法测量不确定度评定模型.结果 建立的GGT催化活性参考方法测量不确定度评定模型为:Cenzyme =1/ει·vreaction+vsample+vstarter/vsample·ΔA/Δt·f0·fcv.结论该不确定度评定模型适用于酶催化活性参考方法测量不确定度的评定.
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氯硝柳胺悬浮剂对钉螺影响的酶组织化学观察
目的 观察氯硝柳胺悬浮剂对钉螺体内酶活性的影响,以研究其杀螺机制.方法 实验钉螺采集于江苏省镇江市丹徒区有螺江滩,分为2组:用药组钉螺采用25%氯硝柳胺悬浮剂,按2.0 g/(L·m2)进行喷洒,对照组钉螺采用蒸馏水喷洒.钉螺去壳后分离出软体,置冰冻切片机切片,按常规进行细胞色素C氧化酶(CCO)、乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、胆碱酯酶(CHE)和一氧化氮合酶(NOS)的酶组织化学染色、制片,显微镜下观察着色反应结果,采用显微图像分析系统定量测定并比较灰度值.结果 用药组钉螺CCO、LDH、SDH、CHE和NOS定位口囊、肌纤、表膜、神经节、肝脏、咽管等部位的酶活性明显低于对照组.结论 氯硝柳胺影响钉螺体内神经介质传递和能量供应障碍,导致钉螺的各项生理功能紊乱和丧失,是引起钉螺死亡的原因之一.
关键词： 25％氯硝柳胺悬浮剂 钉螺 酶 酶组织化学 -
氯硝柳胺悬浮剂对日本血吸虫尾蚴影响的酶组织化学观察
目的采用酶组织化学技术,观察经氯硝柳胺悬浮剂处理后的日本血吸虫尾蚴体内酶活性变化,以研究其杀蚴机制.方法将正常尾蚴和经氯硝柳胺悬浮剂浸泡后的尾蚴粘附于盖玻片上,室温晾干;分别对2组尾蚴进行细胞色素C氧化酶(CCO)、乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乙酰胆碱酯酶(AChE)和一氧化氮合酶(NOS)的酶组织化学染色;常规法制片,显微镜观察着色反应;采用显微图像分析系统定量测定其平均灰度值.结果CCO、LDH、SDH、AChE和NOS在尾蚴的头器、腹吸盘和尾干部位的酶活性较高.其中用药组CCO、LDH和NOS的活性明显高于对照组,SDH用药组和对照组的活性变化差异无显著性,而AchE用药组的活性明显低于对照组.结论氯硝柳胺引起尾蚴耗能加剧导致机体的能量供应障碍,能量的短时间耗竭是引起尾蚴死亡的主要原因之一.
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血清酶质量控制若干问题探讨
血清酶类项目的质量控制首先要统一测定方法,确立使用IFCC参考法或我国的推荐法,统一测定温度,实验条件必须一致.其次是要用仪器原厂家的酶校准物来校准酶的测定,如无校准物可采用高质量的定值血清来作监控,但不能作为标准品来校仪器.每天详细记录失控情况,并按失控程序作相应处理.以提高血清酶测定的准确率和实验室间的可比性.
