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高脂血、溶血标本对荧光定量聚合酶链反应测定低水平HBV-DNA的影响
目的：探讨高脂血、溶血标本对荧光定量聚合酶链反应（PCR）测定低水平 HBV‐DNA检测结果的影响。方法对收治的100例三酰甘油（TG）正常（TG≤1．46 mmol／L）、实时荧光定量PCR测定为（4．0～9．0）×103 IU／mL的乙型肝炎患者采集血清标本，进行即刻检测，另外选择100份乙肝五项全阴且测不出HBV‐DNA的高TG标本和100份乙肝五项全阴且测不出 HBV‐DNA的全血标本分别制备成高脂血、溶血血清标本，同时进行高脂血和非高脂血、溶血血清和非溶血血清的 HBV‐DNA荧光定量PCR检测，并进行配对 t检验。结果高脂血和非高脂血、溶血血清和非溶血血清的 HBV‐DNA水平差异有统计学意义（P＜0．05）。结论高脂血、溶血标本低水平HBV‐DNA荧光定量PCR定量检测结果较空腹采集即刻检测的结果降低。
关键词： 标本 溶血 高脂血 荧光定量聚合酶链反应 -
3种检测生殖器疱疹方法的对比研究
目的：寻找更为准确、经济、实用的生殖器疱疹病毒感染的检测方法。方法取根据病史及典型的临床症状表现的生殖器疱疹疑似病例患者标本50例，分别采用病毒培养、荧光定量聚合酶链反应（FQ‐PCR）及酶联免疫吸附试验（ELISA）3种方法进行实验室检测，比较各种方法检测的阳性率。结果病毒培养阳性30例，阳性率60．0％；FQ‐PCR检测阳性34例，阳性率68．0％；ELISA检测阳性32例，阳性率64．0％，经χ2检验，三者差异无统计学意义（χ2＝0．69，P＞0．05）。水疱和脓疱标本的阳性率分别为94．6％和83．3％，明显高于其他来源标本的阳性率。结论3种检测方法对临床疑似生殖器疱疹患者的检测阳性率差异无统计学意义（P＞0．05）。相对另外两种检测方法，ELISA因其便宜、实用的优点而适用于临床推广应用。水疱和脓疱标本阳性率明显高于其他类型标本的阳性率，对临床疑似病例的实验诊断，标本以采集水疱和脓疱液为佳。
关键词： 生殖器疱疹 病毒培养 荧光定量聚合酶链反应 酶联免疫吸附试验 -
两种核酸提取方法对丙型肝炎病毒RNA检测效果的比较及应用评价
目的：比较两种核酸提取方法对实时荧光定量聚合酶链反应（FQ‐PCR）检测丙型肝炎病毒（HCV ） RNA病毒载量的影响。方法选择89例2012年10月至2013年6月在肝病中心住院的慢性丙型肝炎抗‐HCV阳性患者，分别用磁珠法和TRIZOL法提取血清标本中HCV RNA ，用FQ‐PCR技术检测 HCV RNA ，并对结果进行对比分析，统计学处理采用χ2检验和 t检验。结果89例抗 HCV阳性标本中以磁珠法提取核酸进行 HCV RNA定量检测的阳性率为73．0％（65／89），以 TRIZOL 法提取核酸进行 HCV RNA定量检测的阳性率为65．1％（58／89），两法提取方法检测阳性率比较有统计学意义（χ2＝3．76，P＜0．05）。两法所测浓度结果换算成对数值，经 t检验两者差异无统计学意义（t＝0．32，P＞0．05）。结论两种方法均可获得较高的回收率、有较高的敏感度和特异度，磁珠法提取 HCV RNA可用于HCV感染者的临床诊断和疗效观察。
关键词： 丙型肝炎 核酸提取 荧光定量聚合酶链反应 灵敏度 -
荧光定量聚合酶链反应检测解脲支原体及沙眼衣原体
目的 应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测解脲支原体(Uu)、沙眼衣原体(Ct),以了解其感染状况及发展趋势,为临床诊断提供依据和帮助.方法 采用FQ-PCR方法对70例患者同时进行Uu、Ct的检测.结果 70例患者Ct的感染率为5.71%;Uu的感染率为57.14%,其中Uu男性感染率为30.56%,女性感染率为85.29%.结论 FQ-PCR技术检测Uu、Ct具有简便、快速、准确的优点;Uu感染率明显高于Ct,已成为生殖道感染的主要病原菌.
关键词： 解脲支原体 沙眼衣原体 荧光定量聚合酶链反应 -
岩黄连提取物体内抗乙型肝炎病毒作用研究
目的 观察岩黄连提取物的体内抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)作用.方法 采用1日龄广西麻鸭感染DHBV,7 d后用聚合酶链反应(PCR)法筛选出DHBV强阳性鸭,随机分成岩黄连高、中、低剂量组[剂量分别为8,4,2mg/(kg·d)],模型对照组(生理盐水)和阿昔洛韦阳性对照组[0.1 mg/(kg·d)]5组,每组10只,各组雏鸭均灌胃给药14 d.于用药前(T0)、用药第7天(T7)、用药第14天(T14)及停药后第3天(P3)分别采血,以荧光定量聚合酶链反应(FO-PCR)法检测血清DHBV-DNA的含量,以改良赖氏法检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬酸氨基转移酶(AST)活性,取肝组织作常规HE染色观察病理改变.结果 岩黄连各剂量组用药后血清DHBV-DNA水平显著降低(P<0.05),P3时中、低剂量组血清有明显回升现象,而高剂量组回升现象不明显;用药前后血清ALT和AST变化与DHBV-DNA水平改变相似;鸭肝脏病理学检查显示岩黄连提取物对DHBV所致肝损伤有显著的保护作用.结论 岩黄连提取物在体内有显著的抗DHBV作用.
关键词： 岩黄连 乙型肝炎病毒 荧光定量聚合酶链反应 -
荧光定量聚合酶链反应技术在子宫内膜结核治疗中的价值
目的 探讨荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术在活动期子宫内膜结核治疗中的价值.方法 应用荧光定量PCR技术对102例患者的子宫内膜进行结核杆菌DNA检测,同时行常规标准诊断方法检测.对荧光定量PCR阳性患者给予正规抗结核治疗,治疗1个月、2个月后分别再次取标本复查荧光定量PCR,观察疗效并决定下一步治疗方案.结果 两种检测方法结果一致者96例(94.12%),结果不一致者6例(5.88%).结论 荧光定量PCR技术的敏感性与特异性较常规检测方法更高,尤其适用于含菌量低的子宫内膜结核的临床诊断和治疗.
关键词： 荧光定量聚合酶链反应 结核分枝杆菌 子宫内膜结核 -
Foxp3基因及调节性T细胞在重症肌无力被动转移幼鼠发病中的作用机制
目的 探讨Foxp3~+CD4~+CD25~+调节性T细胞、Foxp3 mRNA在重症肌无力被动转移模型(passive transferred myasthenia gravis,PTMG)发病中的作用机制.方法 将16只幼年雌性C57BL/6小鼠随机分为2组:模型组和对照组,模型组经腹腔注射含1.0 mg/kg mAb35的Ringer's液0.2 ml建立PTMG模型,正常对照组注射不含mAb35的Ringer's液0.2 ml.采用流式细胞技术检测小鼠脾细胞中CD4~+CD25~+T细胞及Foxp3~+CD4~+CD25~+Tregs含量,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-FQ-PCR)分析2组小鼠脾细胞中Foxp3 mRNA的表达, ELISA法检测2组小鼠血清白介素-2和干扰素-γ的水平.结果 ①模型组小鼠脾细胞中CD4~+CD25~+T细胞与CD4~+T细胞含量的比例与对照组比较有统计学差异[(8.82±0.74)% vs (9.89±0.88)%,P<0.05];模型组Foxp3~+CD4~+CD25~+Tregs与CD4~+CD25~+T细胞含量的比例与对照组比较显著降低[(6.83±1.18)% vs (8.38±0.76)%,P<0.01];脾细胞悬液中Foxp3 mRNA表达量模型组低于对照组[(0.47±0.30) vs (1.53±1.19),P<0.05];模型组小鼠血清IL-2、IFN-γ水平分别为(24.41±13.83) ng/L、(142.31±6.05) ng/L,高于对照组小鼠[(12.09±2.96) ng/L、(109.36±3.64) ng/L](P<0.05).②模型组小鼠Foxp3~+CD4~+CD25~+Tregs数量变化与CD4~+CD25~+T细胞数量呈正相关(r=0.864,P<0.01),对照组小鼠Foxp3~+CD4~+CD25~+Tregs数量变化与CD4~+CD25~+T细胞数量亦呈正相关(r=0.977,P<0.01).结论 Foxp3 mRNA表达下调,导致Foxp3~+CD4~+CD25~+Tregs细胞亚群表达降低,并通过上调的IL-2和IFN-γ介导了Foxp3及Tregs在重症肌无力发病机制中的作用.
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荧光定量聚合酶链反应检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因的表达水平及临床应用
目的 探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) mecA基因的表达水平及临床价值.方法 系统研究了FQ-PCR法检测MRSA mecA基因的灵敏度、重复性、定量范围和扩增效率.采用FQ-PCR法检测临床分离的103株金黄色葡萄球菌,并与传统PCR法和苯唑西林纸片扩散法检测结果相比较.结果 FQ-PCR法检测MRSA mecA基因的批内CV为3.1％,批间CV为4.7％,灵敏度1.0 × 103拷贝数/mL,定量范围(1.0 × 103～1.0×106)拷贝数/mL,扩增效率84.8％.与传统PCR法相比较,FQ-PCR法检测MRSA mecA基因的Kappa值为0.95,敏感度94.9％,特异度99.1％,阳性预测值97.4％,阴性预测值98.3％.103株金黄色葡萄球菌中,FQ-PCR法检出mecA基因阳性37株、阴性66株,mecA基因的表达水平为(3.72±2.83) ×105拷贝数/mL,表达阳性率35.9％;苯唑西林纸片扩散法检出MRSA27株、MSSA 76株,MRSA阳性率26.2％,FQ-PCR法的检出率显著高于苯唑西林纸片扩散法(P＜0.01).结论 FQ-PCR是一种敏感、特异的定量检测MRSA mecA基因的方法,在MRSA的快速、准确鉴定中具有重要的临床应用价值.
关键词： 荧光定量聚合酶链反应 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 mecA基因 表达水平 -
FQ-PCR方法检测HBsAg阳性患者的乙型肝炎病毒复制情况
HBV-DNA是乙型肝炎病毒(HBV)存在、复制和活动的标志,传染性的特征是HBV感染直接和可靠的标志.用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法能准确的定量检测血清中HBV的数量和免疫指标.本组对34例HBsAg阳性患者血清HBV-DNA定量测定结果作出分析,以指导临床治疗.对于HBsAg阳性患者检测HBV-DNA的拷贝量.HBsAg(+)、HBcAb(+)、HBeAg(+)(简称大3阳);HBsAg(+)、HBcAb(+)、HBeAb(+)(简称小3阳);HBsAb(+)、HBcAb(+)、HBeAb(+)(简称恢复期).FQ-PCR可以检测HBV的真实感染和复制情况,对于乙型肝炎的诊断治疗方案的选择和疗效有较大的指导意义.
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产妇无症状HBV携带者乳汁中HBV-DNA检测的意义
[目的]探讨无症状HBV携带产妇乳汁及血清中HBV-DNA含量的关系.[方法]应用荧光定量聚合酶链反应PCR法(FQ-PCR)检测166名无症状HBV携带产妇乳汁及血清中HBV-DNA含量,并分析其相关性.[结果][1]166例无症状HBV携带产妇血清中HBsAg、 HBeAg、 HBV-DNA 3指标阳性率分别为100%、59.0%、89.2%,均明显高于乳汁标本阳性率(P均<0.05).[2]乳汁HBV-DNA含量与血清HBV-DN4含量呈正相关(r=0.56, P<0.01).[结论]无症状HBV携带产妇乳汁和血清HBV-DNA具有正相关性,高病毒血症患者的乳汁具有较高传染性.
关键词： HBV携带者 产妇 HBV-DNA 乳汁 荧光定量聚合酶链反应 -
产妇无症状HBV携带者唾液中HBV-DNA检测的意义
[目的]探讨无症状HBV携带产妇唾液及血清中HBV-DNA含量的关系.[方法]荧光定量聚合酶链反应PCR法检测166名无症状HBV携带孕妇唾液及血清中HBV-DNA含量,并分析其相关性.[结果][1]166例无症状HBV携带产妇血清中HBsAg、 HBeAg、 HBV-DNA 3指标阳性率分别为100%、59.0%、89.2%,均明显高于唾液标本阳性率(P均<0.05).[2]唾液HBV-DNA含量与血清HBV-DNA含量呈正相关(r=0.56, P<0.01).[结论]无症状HBV携带产妇唾液和血清HBV-DNA具有正相关性,高病毒血症患者的唾液具有较高传染性.
关键词： HBV携带者 产妇 HBV-DNA 唾液 荧光定量聚合酶链反应 -
荧光定量PCR检测戊肝病毒的应用价值探究
目的 探讨荧光定量PCR检测HEV RNA的应用价值.方法 从110 535份血清标本中,随机抽取标本200份,分别进行ELISA检验和荧光定量PCR分析.结果 69例ELISA阳性的标本经荧光定量PCR检测均为阳性,31例ELISA可疑的标本经荧光PCR检测也均为阳性,100例ELISA阴性的标本中有2例经荧光定量PCR检测结果为阳性.经Kappa检验,Kappa值为0.72,可认为2种方法检测结果具有中度一致性.采用Stuart-Maxwell检验,结果显示PCR与ELISA检出3种情况的边际概率不相等(x2=33,P=0.00,P＜0.05),提示2种方法检测结果存在差异,即荧光PCR的阳性检出率更高.结论 荧光定量PCR检测HEV RNA能客观地反映HEV感染、复制及病程变化,修正或补充对ELISA测定结果的判定和解释,有利于HEV感染的早期诊断.
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荧光定量聚合酶链反应检测性病患者感染单纯疱疹病毒Ⅱ的实验研究
[目的]了解泸州地区门诊性传播疾病(STD)患者感染单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)情况.[方法]采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测428例门诊STD患者泌尿生殖道HSV-Ⅱ.[结果]STD患者中HSV-Ⅱ,阳性率为22.43%;316例男性患者中,阳性率22.47%;女性患者中,阳性率16.96%.定量测定显示:STD患者HSV-Ⅱ病毒载量高9.65×107 copies/ml,低1.56×102 copies/ml.[结论]FQ-PCR检测技术具有简便、快捷、准确、特异性强的特点,有较高的临床实用价值,可作为临床诊断感染HSV-Ⅱ病毒的依据.
关键词： 荧光定量聚合酶链反应 性传播疾病患者 单纯疱疹病毒Ⅱ型 实验研究 -
荧光定量聚合酶链反应检测人乳头瘤病毒的实验研究
目的:探讨尖锐湿疣(CA)患者人乳头瘤病毒(HPV)的感染情况及荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HPV与分型的临床意义.方法:用FQ-PCR测定292例CA患者疣体组织或分泌物的HPV6、11和HPV16、18及HPV-DNA载量.结果:292例CA患者标本中HPV-DNA阳性感染率95.55%,其中HPV6、11型感染率85.62%,HPV16、18型感染率22.95%,HPV6、11型和HPV16、18型混合感染的感染率为13.01%.定量测定结果显示:HPV6、11型患者病毒载量高1.0×108 copies/ml,低2.8×103 copies/ml;HPV16、18型患者病毒载量高1.0×108 copies/ml,低2.75×104 copies/ml.结论:FQ-PCR检测技术具有灵敏、简捷、安全、特异性等的特点,其定量检测的结果可为临床治疗及观察CA患者感染HPV后病情变化提供可靠依据,有较高的临床实用价值.
关键词： 荧光定量聚合酶链反应 人乳头瘤病毒 实验研究 -
应用荧光定量PCR技术检测小儿尿液中人巨细胞病毒
目的:探讨荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)方法检测尿液中人巨细胞病毒(HCMV)对儿童HCMV活动性感染的检测价值.方法:对收集的175份临床标本分别用FQ-PCR方法及低基质磷酸化蛋白(pp65)抗原血症检测方法进行平行检测比较.结果:71例临床患者尿液FQ-PCR检测阳性59例;血液pp65抗原检测阳性53例.尿液中HCMVD-NA检测结果与HCMVpp65抗原血症的一致性为84.2%.结论:FQ-PCR检测敏感性要高于pp65抗原血症检测,可以有效提示体内病毒的活跃程度,具有良好的应用价值.
关键词： 人巨细胞病毒 荧光定量聚合酶链反应 pp65抗原血症 -
荧光定量聚合酶链反应用于非脊髓灰质炎肠道病毒定性方法的评估
目的 在河北省脊灰实验室应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法对非脊髓灰质炎肠道病毒(NPEV)进行定性.方法 采用荧光定量PCR法对既往河北省脊灰实验室分离到NPEV进行检测,并将检测结果与中和实验鉴定结果和新流程方法检测结果进行比较分析.结果 75株用中和实验方法定性的NPEV与荧光定量PCR方法检测的符合率为98.7％(74/75),33株用新检测流程定性的NPEV与荧光定量PCR方法检测的符合率为81.8％.结论 荧光定量PCR用于NPEV进行定性的检测方法是可行的.
关键词： 荧光定量聚合酶链反应 非脊髓灰质炎肠道病毒 中和实验 -
强的松联合依那普利对实验性IgA肾病小鼠肾组织表达TGF-β1的影响
目的 探讨强的松联合依那普利对IgA肾病(IgAN):b鼠肾组织TGF-β1含量及其mRNA表达的影响.方法 用"口服牛血清白蛋白联合尾静脉注射葡萄球菌肠毒素B"法复制小鼠IgAN模型,设正常对照组、模型对照组、强的松组、依那普利组和强的松联合依那普利治疗组.荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法分别检测各组小鼠.肾组织TGF-β1 mRNA表达、免疫组化SABC法检测各组小鼠肾组织TGF-β1的含量.结果 模型组小鼠.肾组织TGF-β1含量及其mRNA表达显著高于正常组(P＜0.05);强的松组、依那普利组和强的松联合依那普利治疗组小鼠肾组织TGF-β1含量及其mRNA表达分别低于模型组,差异均有显著性(P＜0.05);强的松联合依那普利治疗组TGF-β1含量及其mRNA表达分别低于强的松组和依那普利组(P＜0.05);强的松组TGF-β1含量及其mRNA表达低于依那普利组(P＜0.05).结论 IgAN肾组织TGF-β1含量及mRNA的表达明显增加;在抑制IgAN小鼠肾组织TGF-β1表达方面,单用强的松疗效优于单用依那普利、合用强的松和依那普利疗效优于单用强的松或单用依那普利.
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FQ-PCR检测女性生殖道HSVⅡ感染临床分析
单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)属嗜神经性的DNA病毒,按其抗原性不同分为二类:Ⅰ型(HSV-I)主要侵犯口、咽、扁桃体、皮肤等部位;Ⅱ型(HSV-Ⅱ)主要侵犯生殖器部位,引起人的生殖器疱疹(genital herpes,GH),HSVⅡ是GH的主要病原体,约占生殖器疱疹的85%[1].由于几乎所有的感染是通过性行为感染,并且感染后易反复发作、难以治愈,给患者身心带来很大的痛苦,随着HSV对人类危害被揭示与阐明,对女性生殖器官HSVⅡ感染进行监测,显得很有必要.我们采用.荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative-polymerase chain reaction)对我院妇科门诊735例可疑单纯疱疹病毒感染者的生殖道标本做HSVⅡ-DNA荧光定量PCR检测,以了解哈尔滨地区女性生殖器官HSVⅡ感染的情况,现报告如下.
关键词： 荧光定量聚合酶链反应 单纯疱疹病毒 核酸 -
荧光定量PCR在产前诊断染色体非整倍体中的应用
目的 探讨荧光定量-PCR(quantitative fluorescence PCR,QF-PCR)对羊水细胞染色体非整倍体检测的准确性及在产前诊断中的价值.方法 应用QF-PCR与染色体核型分析技术对6034例孕妇的6066份羊水标本进行检测.结果 QF-PCR与核型分析均检出了135例21、18、13号和X、Y染色体的数目异常,一致率为100％.对67例羊水细胞培养失败的样本成功进行了QF-PCR检测;鉴定出7例母血细胞或母体细胞污染的羊水标本;对32对双绒毛膜双羊膜囊双胎的STR位点的一致性进行了鉴定,22对的STR位点不一致;检出12例胎儿的STR位点荧光峰面积比值处于临界值或部分为异常值,提示可能有染色体数目异常,经核型证实均为染色体数目异常的嵌合体.结论 QF-PCR是产前诊断中染色体核型分析技术的必要补充,在快速产前诊断中具有重要临床价值.
关键词： 荧光定量聚合酶链反应 染色体非整倍体 产前诊断 染色体核型分析 -
BCR/ABL阴性骨髓增生性疾病患者JAK2-V617F点突变与外周血三系变化的相关性
目的 探讨BCR/ABL阴性骨髓增生性疾病患者JAK2-V617F突变的阳性率以及突变量与外周血三系变化的相关性.方法 对191例确诊为BCR/ABL阴性的骨髓增生性疾病患者进行JAK2-V617F突变检测,分别以外周血中红细胞、白细胞、血小板计数进行分类统计,分析不同类型的标本JAK2-V617F基因点突变的发生率及相对定量变化.结果 外周血红细胞、白细胞、血小板计数不同范围的标本JAK2-V617F突变阳性率有统计学差异.随着外周血红细胞、血小板计数增高,JAK2-V617F突变阳性率也随之增高,且以三系均增多者JAK2-V617F突变率为高(92.86％).结论 BCR/ABL阴性的骨髓增生性疾病JAK2-V617F点突变发生率与外周血三系变化存在明显的相关性.外周血三系变化、尤其是红细胞计数与BCR/ABL阴性的骨髓增生性疾病JAK2-V617F突变的阳性率以及突变相对定量存在一定的相关性.
