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子宫内膜异位症患者血清中miR-199a-5p和基质金属蛋白酶-9的表达及意义
目的 探讨miR-199a-5p和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在子宫内膜异位症(EMS)患者血清中的表达及临床意义. 方法 分别采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法及ELISA法检测40例EMS患者(EMS组)与20例输卵管积水患者(对照组)血清中miR-199a-5p和MMP-9的表达,分析miR-199a-Sp和MMP-9的相关性及其与子宫内膜异位症临床特征的关系. 结果 两组血清中均检测出miR-199a-5p和MMP-9的表达,EMS组血清中miRNA-199a-5p表达少于对照组,MMP-9含量高于对照组,差异均有统计学意义.EMS组血清miR-199a-5p相对表达量随r-AFS分期增加而减少,MMP-9表达量随r-AFS分期增加而增加,差异均有统计学意义;EMS组血清中miR-199a-5p和MMP-9的表达量与VAS评分无关.EMS组血清中miR-199a-5p相对表达量与MMP-9呈负相关(r=-0.501). 结论 miR-199a-5p和MMP-9可能参与EMS的发病,且发病机制可能与miRNA调控异常相关.
关键词： miR-199a-5p 基质金属蛋白酶-9 子宫内膜异位症 -
胃腺癌患者血浆中 miR-199a-5p和miR-200c-3p的表达及其诊断和预后判断的价值
目的：探讨胃腺癌病人血浆中 miR -199a -5p、miR -200c -3p 的表达及其诊断和预后判断的价值。方法选取2014年5月至2015年4月胃腺癌病人50例为观察组，同期入选体检健康者50例为研究对照，应用实时荧光定量 PCR 技术检测两组研究对照血浆中的 miR -199a -5p 和 miR -200c -3p 的表达水平情况；比较不同分化程度、淋巴结转移情况的胃腺癌病人的血浆中 miR -199a -5p、miR -200c -3p 表达水平。结果观察组的 miR -199a -5p 表达水平显著低于对照组，差异有统计学意义（ P ＜0.05）；观察组的 miR -200c -3p 表达水平显著高于对照组，差异有统计学意义（ P ＜0.05）；不同分化程度、淋巴结转移情况的胃腺癌病人的血浆 miR -199a -5p、miR -200c -3p 表达水平差异有统计学意义（ P ＜0.05）。结论胃腺癌病人血浆 miR -199a -5p、miR -200c -3p 表达水平与肿瘤分化程度、淋巴结转移情况密切相关，可用于评估胃腺癌的病情严重程度及预后。
关键词： 胃腺癌 miR-200c-3p miR-199a-5p -
人肾癌细胞株miRNA表达差异临床意义研究
目的 miRNA的异常表达会导致肿瘤包括肾癌的产生与增殖.但是miRNA如何促进肾细胞癌的产生与增殖目前仍不十分明确.本研究旨在比较769-P人肾癌细胞株与正常肾组织中表达的miRNA,找出表达差异的miRNA.进一步研究这些表达差异的miRNA在肾细胞癌中表达的临床意义.方法 采用高通量测序技术检测769-P人肾癌细胞株与正常肾脏组织中的miRNA进行测序并对比,比较两者miRNA的表达差异.同时选取2015-06-02-2017-07-02厦门市第二医院20例肾透明细胞癌及癌旁组织(距离组织1 cm),镜下证实为正常的肾脏组织的临床液氮保存标本.进一步比较miRNA在肾透明细胞癌与正常肾组织中的表达差异.结果 769-P人肾癌细胞株与正常肾脏组织中的miR-NA进行测序对比后共检测到19个表达差异有统计学意义的miRNA,均P＜0.05.其中miR-141-3p和miR-199a-5p在769-P人肾癌细胞株中表达明显低于正常肾组织,两者相比差异有统计学意义,P值分别为0.0 218和0.0 069.进一步研究发现,19个miRNA在肾透明细胞癌与正常肾组织仅有miR-141-3p和miR-199a-5p表达差异有统计学意义,P值分别为0.0 057和0.0 369.结论 肾癌中异常表达的miRNA很多,其作用机制复杂,不明确.肾癌中miR-141-3p和miR-199a-5p表达下降促进肾透明细胞癌的增殖,可能成为一类新的临床诊断与基因治疗的分子标志物.
关键词： miR-141-3p miR-199a-5p 肾透明细胞癌 高通量测序 -
癌痛消颗粒对移植性肝癌模型大鼠肝癌组织miRNAs表达的影响
目的 用大鼠Walker-256移植性肝癌模型研究癌痛消颗粒对大鼠肝癌miRNAs的调节作用,以探讨癌痛消颗粒抗肝癌的可能机制.方法 将60只大鼠移植性肝癌模型随机分为5组,即癌痛消颗粒高剂量组(A组)、中剂量组(B组)、低剂量组(C组)、5-Fu组(D组)、生理盐水组(E组),于造模后第8天对癌痛消治疗组及生理盐水组灌胃给药,5-Fu组腹腔注射给药,连续用药14 d后停药24 h,处死大鼠,取出瘤块,用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术观察肝癌特定miRNAs(miR-199a-3p、miR-199a-5p、miR-18)表达水平.另设正常饲养组(F组)大鼠10只,不进行造模及给药,供实验结束时作空白对照用结果 造模组与空白对照组比较miR-18有更高水平的表达,miR-199a-3p,miR-199a-5p表达水平降低;造模各组(A、B、C、D组)药物干预后与生理盐水组(E组)比较肝癌组织miR-18表达水平降低,miR-199a-3p,miR-199a-5p表达水平升高(P＜0.01);和E组比较,A、B、C、D组均可明显调节miRNAs水平,癌痛消中剂量组比5-FU组更为明显(P＜0.01) 结论 口服癌痛消颗粒对大鼠移植性肝癌组织的miRNAs表达具有一定的调控作用,提示癌痛消的抗癌机制可能与调控肝细胞癌发生和发展相关的miRNAs水平有关.
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Caveolin-1和miR-199a-5p在缺血性脑卒中患者外周血及模型大鼠脑组织、脾脏中的表达及其意义
目的 探讨缺血性脑卒中(IS)患者外周血及模型大鼠脑组织、脾脏中miR-199a-5p和膜微囊蛋白(Cav)-1的表达水平及临床意义.方法 初发IS患者(发病24 h内)外周血标本24例,同时收集在体检中心体检的健康人外周血标本22例.Ficoll淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞(PBMC).荧光定量PCR检测PBMC中miR-199a-5p和Cav-1的表达水平.采用改良Zea Longa线栓法构建SD大鼠大脑中动脉梗死(MCAO)模型.再灌注24 h后进行神经功能评分,收集脑皮质和脾脏组织.荧光定量PCR检测脑皮质和脾脏miR-199a-5p和Cav-1表达水平.结果 IS患者外周血PBMC中miR-199a-5p表达明显升高(P<0.001),Cav-1 mRNA表达显著下降(P<0.05).与假手术组比较,MCAO模型组脑皮质和脾脏miR-199a-5p明显升高(P<0.001,P<0.01),Cav-1 mRNA表达显著下降(P<0.001,P<0.01).结论 miR-199a-5p和Cav-1可能为IS患者重要的炎症指标.
关键词： 缺血性脑卒中 miR-199a-5p 膜微囊蛋白-1 -
miRNA-199 a-5 p通过SP1调节ERK5抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭的机制
目的：探讨miR-199a-5p对乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭影响及其作用机制。方法转染miR-199a-5p mimic至MDA-MB-231细胞,Transwell侵袭实验检测miR-199a-5p对MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响。采用细胞免疫荧光、Western blot法检测上皮细胞-间充质转化( epithelial-mesenchymal transition, EMT)分子标志物 E-cadherin、vimentin 的表达。应用Western blot法检测miR-199a-5p mimic及其LNA-siRNA对ERK5、pERK5、EGF、SP1表达的影响。染色体免疫共沉淀( chroma-tin immunoprecipitation, CHIP)技术检测SP1是否与ERK5启动子区结合。结果 miR-199a-5p能抑制MDA-MB-231细胞的侵袭,降低vimentin的表达,增强E-cadherin的表达。同时,miR-199a-5p降低ERK5表达并抑制其磷酸化；EGF、SP1的表达也相应减少。相反,应用LNA-siRNA抑制miR-199a-5p后,ERK5、pERK5、EGF、SP1的表达上调。 CHIP结果显示SP1能与ERK5启动子区结合。结论 miR-199a-5p通过调节EGF、SP1下调ERK5的表达并抑制其磷酸化,进而发挥对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭的抑制作用。
关键词： 乳腺肿瘤 miR-199a-5p ERK5 Sp1 侵袭 -
七氟烷预处理上调miR-199a-5p对脊髓缺血/再灌注损伤的保护作用
目的 研究miR-199a-5p在七氟烷预处理大鼠脊髓缺血/再灌注损伤(SCIRI)中的作用.方法 将24只SD 大鼠随机分为:假手术组( Sham组)、模型组( I/R组)、七氟烷+模型组(SEVO+I/R组). Sham组给予同样的手术,但不吸入七氟烷或夹闭主动脉弓;I/R组无创动脉夹夹闭主动脉弓14 min后再灌注,以建立 SCIRI 模型;SEVO +I/R 组,建立SCIRI模型前吸入2.4%的七氟烷3 h. Basso Beattie Bresna-han评分法评价神经运动功能;TUNEL染色观察细胞凋亡情况;伊文思蓝( EB)测定血-脊髓屏障( BSCB)通透性;real-time qPCR 检测miR-199a-5p含量;Western blot测定脊髓组织中caspase-9和Bcl-2 水平.结果 与假手术组比较,I/R组神经运动功能评分降低,细胞凋亡率增加,BSCB通透性增加,miR-199a-5p表达降低,caspase-9表达增加,Bcl-2表达减 少;与I/R组比较,SEVO+I/R组神经运动功能评分增加,细胞凋亡率减少,BSCB 通透性减少,miR-199a-5p 表达增加, caspase-9表达减少,Bcl-2表达增加.结论 七氟烷预处理可能通过增加miR-199a-5p,减少BSCB通透性及细胞凋亡,保护大鼠SCIRI.
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miR-199a-5p在血管紧张素Ⅱ致心肌肥大细胞中的表达变化
目的 研究miR-199a-5p在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)导致肥大心肌细胞中的表达变化.方法 雄性SD大鼠30只,采用完全随机方法将其分为假手术组、模型组、氯沙坦组[10 mg/(kg·d)],每组10只.制备腹主动脉缩窄致心肌肥大模型,在术后第28天,检测心脏质量指数和左心室质量指数,HE染色观察左心室心肌细胞肥大情况,qRT-PCR方法测定左心室miR-199a-5p表达.取10只1～3 dSD乳鼠,消化获得心肌细胞,分为对照组、模型组(1×10-7 mol/L AngⅡ)和氯沙坦组(1 ×10-7 mol/L AngⅡ+1×10-6mol/L氯沙坦钾),qRT-PCR方法测定心肌细胞miR-199a-5p表达;分别转染miR-199a-5p模拟物或者抑制物,观察[3H]-亮氨酸的掺入情况.结果 腹主动脉缩窄大鼠左心室心肌细胞明显肥大,左心室miR-199a-5p表达显著升高(P＜0.05),AngⅡ受体拮抗剂氯沙坦可显著逆转上述变化.体外实验发现氯沙坦可显著降低AngⅡ刺激致乳鼠心肌细胞所致的miR-199a-5p显著升高(P＜0.05),采用转染miR-199a-5p抑制物的方法抑制miR-199a-5p表达可显著抑制AngⅡ刺激所致的心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入(P＜0.01);且转染miR-199a-5p模拟物增加miR-199a-5p表达可显著增加[3H]-亮氨酸掺入(P＜0.01).结论 miR-199a-5p是介导AngⅡ致心肌细胞肥大的重要调节分子,可能在该信号通路中发挥重要作用.
关键词： 腹主动脉缩窄 心肌肥大 血管紧张素Ⅱ 心肌细胞 miR-199a-5p -
miR-199a-5p抑制低氧条件下大鼠气道平滑肌增殖和低氧诱导因子1α表达
目的 探讨miR-199a-5p在常氧及低氧环境下的大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)中的表达以及miR-199a-5p对ASMC增殖的调控和低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响.方法 用贴壁法体外培养大鼠ASMC,在常氧及低氧条件下培养24 h,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ASMC中miR-199a-5p含量;人工合成大鼠miR-199a-5p的拟似物和抑制物,用脂质体转入低氧培养的ASMC,qRT-PCR检测miR-199a-5p及HIF-1αmRNA的表达,Western blot法检测HIF-1 α蛋白的表达,CCK-8法检测ASMC的增殖情况.结果 与常氧组相比,低氧处理促进细胞增殖,低氧组HIF-1α mRNA及HIF-1 α蛋白的相对水平显著升高;低氧组miR-199a-5p的量较常氧组减少;转染miR-199a-5p拟似物可以显著减缓低氧条件下ASMC的增殖,而其抑制物可促进低氧条件下的细胞增殖.拟似物组HIF-1 α蛋白较对照组降低,抑制物组则升高,而低氧条件下各组HIF-1α mRNA水平无明显差异.结论 miR-199a-5p能抑制低氧条件下ASMC的增殖和HIF-1α蛋白的表达.
关键词： miR-199a-5p 低氧诱导因子1α 气道平滑肌细胞 低氧
