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虎源H5N1亚型禽流感病毒感染小鼠模型的建立
为研究H5N1亚型禽流感病毒的病原特性、致病机理及对其疫苗与救治药物效果评价提供平台,利用本室分离鉴定的虎源A/Tiger/Harbin/01/2002株(简称HAB/01)H5N1亚型禽流感病毒进行连续10倍稀释后,对4～6周龄 雄性BALB/c小鼠经乙醚麻醉后进行滴鼻攻毒,每个稀释度接种10只实验小鼠,测定其MLD50,检测小鼠感染、致病的多项指标,观察期为14d.结果感染小鼠呈现出规律的以肺炎为主的临床症状、病理变化及病死率;测得该病毒对小鼠的MLD50为10-7.1/0.05mL.成功建立了虎源H5N1亚型禽流感病毒感染BALB/c小鼠的实验模型.
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一株H5N1亚型禽流感病毒的分离与鉴定
2004年1月湖北宜昌某鸡场暴发疫病,从该鸡场濒死鸡肺组织中分离到了一株病毒,电镜切片观察到典型的禽流感病毒粒子;采用ELISA检测禽流感抗原为阳性;RT-PCR扩增HA、NA基因并测序,经BLAST分析,HA基因与A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)HA基因同源性为97%;NA基因与A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)NA基因同源性为96%,确定该分离株为禽流感病毒H5N1亚型(A/Chicken/Yichang/Lung-1/04(H5N1)).
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1例人感染高致病性禽流感(H5N1)死亡的调查
目的 探讨2006年2月4日湖南省邵阳市中心医院报告的1例不明原因肺炎死亡病因.方法 访谈病例发病前后相关知情人,了解病例活动情况以及所在地家禽死亡情况,查阅临床病志,对密切接触者进行医学观察,采集病例的鼻咽分泌物、气管吸取物、肺穿刺物、唾液,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR法(Realtime PCR)检测A/H5N1亚型特异的核酸片段.结果 病例发病前6 d有宰杀鸡鸭史,对103例密切接触者经7 d的医学观察,没有发热和异常情况,病例主要表现为双肺渗出性病变伴白细胞计数显著下降迅速进展为呼吸循环哀竭,病例气管分泌物、肺穿刺液H5N1禽流感病毒核酸均为阳性,咽拭子、唾液检测阴性.结论 该病例是一起"禽-人"感染禽流感病毒致死的病例,正常家禽有可能携带H5N1禽流感病毒,应引起高度重视.
关键词： 禽流感 H5N1 RT-PCR Real-time-PCR -
儿童感染高致病性禽流感病毒1例
据世界卫生组织(WHO)统计,自2003年始,截止至2006年7月14日,全球已有230例H5N1型人禽流感病例报道(132例死亡),其中我国报道19例(12例死亡)[1].在存活病例中,有1例在本院明确诊断,早期救治并取得成效,现将治疗经过及体会报告如下.
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H5N1型高致病性禽流感研究进展及其对人类的威胁
H5N1高致病性禽流感是人、禽和其它哺乳动物共患的一种新发传染病,近年禽间疫情波及范围越来越大,人间疫情呈地方性流行趋势.发病人群年龄偏低、病死率高.禽流感病毒有可能变异成一种即有高致病性又有人流感病毒高传播性特点的新型流感病毒,构成越来越严峻的大流行威胁.本文着重就流行病学、病原学及防制对策方面的相关进展进行综述.
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2005年广州市职业人群H5N1、H9N2血清学监测
目的 了解广州地区禽流感病毒H5N1、H9N2在禽类从业人群及生猪从业人群中的感染状况.方法 采集广州地区部分禽类、生猪从业人员以及非从事动物相关工作的人员的全血样本,用微量血凝抑制半加敏法检测H5N1、H9N2抗体.结果 共调查禽类及生猪从业人员共322名,其中禽类及生猪从业人群H9N2抗体阳性率分别为3.94%(8/203)、1.68%(2/119),两者差异无统计学意义(P＞0.05),138名非从事动物相关工作的人员的H9N2抗体均为阴性,三类人群的H5N1抗体均为阴性.结论 禽类从业环境是感染禽流感的危险环境,生猪饲养、屠宰等场所也可能增加感染禽流感的风险.
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基于H5Nl证据基础的人禽流感流行病学特征
该文基于近年来国内外报道的高致病性禽流感病毒HSNl流行病学客观证据,借鉴循证医学的思路,系统综述H5N1病毒特征、感染源的广泛性、传播途径的隐蔽性和易感人群的可获得性等流行特征,阐述人禽流感暴发流行的可能性及预防控制的紧迫性.
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广东省2例城市型人感染高致病性禽流感(H5N1)病例的流行病学调查
目的 通过对2例城市人禽流感病例的流行病学调查、分析,探讨无直接病死禽暴露情况下的可能感染来源.为进一步防控禽流感提供科学依据.方法 采用现场流行病学、血清学调查的方法;荧光定量PCR、ELISA、RT-PCR和应急监测等方法进行调查、诊断.结果 2例感染高致病性禽流感病毒(H5N1)确诊病例未发现有明确病死禽接触史,但发病前到过甚至多次到过农贸市场;密切接触者中没有发生不明原因肺炎病例,未发现人一人传播证据.结论 2例人感染高致病性禽流感病例均属城市型感染个案,非人传人病例,感染来源可能与农贸市场环境有关.
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广州市一起水禽H5N1疫情禽流感病毒血凝素基因分析
目的 了解广州市一起水禽H5N1疫情中高致病性禽流感H5N1亚型病毒血凝素(HA)基因的特点以及与其他毒株序列间的关系.方法 自疫点采集97份咽拭子标本及84份环境拭子标本,实时荧光RT-PCR检测H5核酸,从阳性标本中扩增全长HA基因并作序列测定,同2006年广州市及国内其他地区报道的人禽流感病毒HA基因进行比较并作系统发生分析.结果 从一份环境拭子中扩增获得一株H5N1禽流感病毒HA基因,系统发生树分析发现与广州市2006年人禽流感病毒HA序列一致性较高,且与国内其他地区报道的H5NI病毒HA基因属于同一组;从基因序列推导出HA的氨基酸序列,发现其受体特异性为禽源的,蛋白酶水解位点含有多个连续的碱性氨基酸,符合高致病性禽流感病毒的特征.结论 引发此次禽间禽流感的为高致病性H5N1病毒,和广州市人禽流感的H5N1病毒在遗传上有紧密的亲缘关系.禽源性的H5N1病毒仍存在感染人类的可能性,禽类从业人员目前处于感染高致病性禽流感的高危状态,进一步加强对活禽市场和禽类从业人员的监测,对于预防禽流感的流行具有重要意义.
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2013－2014年淮安市禽类职业暴露人群及外环境禽流感病毒监测分析
目的：了解淮安市禽类职业暴露人群H5N1禽流感病毒抗体水平和外环境中禽流感病毒的分布和流行情况。方法2013、2014年在淮安地区范围内，采集禽类职业暴露人群血清200份，用血凝抑制法测H5N1血凝素抗体滴度；采集423份外环境标本，用Real-time PCR法进行FluA、H5N1、H7N9、H9N2病毒核酸检测。结果2013－2014年淮安市禽类职业暴露人群200份血清H5N1血凝素抗体均为阴性。外环境样本禽流感病毒核酸阳性率为6．15％，活禽交易市场、家禽散养户、家禽养殖场这三类外环境样本禽流感病毒核酸阳性率分别为10．18％、2．82％和4．38％，不同监测场所外环境样本禽流感病毒核酸阳性率差异有统计学意义（χ2＝8．050，P＜0．05）。结论淮安地区禽类职业暴露人群血清标本中未检出H5N1抗体阳性标本，禽流感感染风险主要集中在活禽交易市场。
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世卫表示对流感大流行准备充足
世界卫生组织(世卫组织)总干事陈冯富日前表示,H5N1型禽流感病毒教给世界如何提前做准备,现在全世界有更充分的准备来应对一场流感大流行.
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马铃薯三糖熊果酸衍生物抑制H5N1流感病毒进入靶细胞
目的：研究马铃薯三糖熊果酸衍生物能否通过抑制H5N1流感病毒进入靶细胞，作为潜在的新型抗流感药物进行研发。方法以马铃薯三糖熊果酸甲酯1为先导化合物，设计并合成4个目标化合物，利用建立的H5N1假病毒活性检测方法，测试化合物的抑制活性。结果化合物1b，1c和1d对源自A/Thailand/Kan353/2004的H5N1假病毒毒株有明显的抑制作用且化合物1 d的活性好，其IC50达到0.96±0.10μmol/L。结论初步构效关系研究表明，熊果酸的C-17位羧基被酯化后可显著提高其抗病毒活性；将羧基转化成酰胺后可提高抗病毒活性并降低对靶细胞MDCK的细胞毒性。
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人流感病毒H1N1与禽流感病毒H5N1感染人神经胶质细胞的实验研究
目的:研究人流感病毒(H1N1)及禽流感病毒(H5N1)感染人神经胶质细胞后,促炎症因子的分泌特点.方法:分离培养人胶质细胞,用H1N1及H5N1分别感染刺激人胶质细胞；用RT-PCR技术探求白细胞介素(IL)-1β、-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α变化.结果:与阴性对照比,H1N1和H5N1感染人神经胶质细胞IL-1β、-6和TNF-α的表达量均增高,且H5N1的表达量多于H1N1.结论:H1N1与H5N1可体外感染人神经胶质细胞,并诱导其分泌大量促炎症因子,提示此与流感病毒感染中枢神经系统所致的功能紊乱及免疫病理损伤有关.
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人禽流感H5N1病例流行病学特征分析
目的:分析人禽流感(HAI)H5N1病例的流行病学特点,监测其发病模式有无变化,为指导下一步防控工作打下基础.方法:采用方差分析、χ2检验、Kruskal-Wallis检验和等级相关等方法分析各国向WHO报告的实验室确诊人甲型流感(H5N1)病例的流行病学资料.结果:14个国家和地区人感染禽流感H5N1病例380例,死亡241例.亚洲9个国家病例数占全球总病例数的89.2%,全球病例男:女=0.93∶1,平均发病年龄为20岁,95%的病例年龄小于40岁,10～39岁为病例高发年龄.2004～2008年的平均发病年龄、发病到住院和到死亡的间隔时间无统计学意义.病死率随时间的变化也无增加趋势.结论:HAI发病模式并无明显改变,但禽流感对人类的危害程度依然严重,尤其应该重视禽流感冬、春季的防控工作.
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梧州市2009～2011年禽类环境标本禽流感病毒调查
目的 了解梧州市禽类环境标本禽流感病H5N1、H9N2感染情况,以应对流感流行预警提供依据. 方法 采集2009～2011年梧州市禽类环境标本126份进行反转录-聚合酶联链式反应(RT-PCR)检测. 结果 梧州市禽类环境存在禽流感病毒,A型流感病毒阳性达19.05％,H9亚型禽流感病毒核酸阳性率10.32％；H5亚型禽流感病毒核酸阳性率7.14％. 结论 梧州市禽类环境禽流感病毒存在较为广泛,提示应继续加强禽流感病毒的监测,了解流感病毒株的流行动态,应对流感流行、禽流感的预警、防控意义重大.
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H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白表达影响因素分析
目的 优化高表达禽流感病毒NS1蛋白的实验方法.方法 将基因工程菌接种LB培养基,设定IPTG终浓度为0.3mmol/L,诱导温度为37℃,诱导表达6.0h,SDS-PAGE分析融合蛋白表达情况,确定佳诱导时间.以0.1mmol/L为梯度,设置不同IPTG诱导浓度,37℃诱导4.0h,分析融合蛋白表达,确定佳IPTG诱导浓度.设定IPTG至终浓度为0.6mmol/L,分别于24℃、28℃、32℃、37℃和42℃下诱导表达4.0h,分析融合蛋白表达,确定适诱导温度.采用优表达条件,超声裂菌后SDS-PAGE分析融合蛋白,Western blotting对融合蛋白进行鉴定.结果 当培养温度为37℃,IPTG浓度为0.3mmol/L时,融合蛋白GST-NS1在IPTG诱导5.0h时的表达量高,达28.5％；当IPTG诱导浓度为0.6mmol/L,在37℃诱导表达4.0h时,融合蛋白的表达量可达27.9％.选用优化的表达条件,IPTG 0.6mmol/L,37℃诱导表达4.0h,融合蛋白的表达量高可达33.2％.进一步分析显示,融合蛋白大部分以可溶形式表达,其表达量可占菌体总蛋白的25.1％.经SDS-PAGE电泳、电转移后,用小鼠抗GST单克隆抗体进行免疫印迹分析,出现一条阳性反应带.结论 通过实验优化了工程菌诱导表达的佳IPTG浓度、适时间和培养温度,实现了融合蛋白的可溶性高表达.
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云南通海县禽间H5N1禽流感暴发疫情的现场处置及效果
目的 分析云南通海县发生的H5N1禽流感农场暴发疫情的流行情况,探讨有效防控措施.方法 对养殖场的禽类进行扑杀和无害化处理,对密切接触人员隔离和医学观察,开展不明原因肺炎病例主动搜索,加强暴露人员防护,采集流感样病例和暴露者的咽拭子标本,通过荧光RT-PCR方法检测.结果 有效控制此次禽间H5N1禽流感疫情,标本检测H5N1禽流感病毒核酸均为阴性,密切接触人员无流感样临床症状.结论 此次H5N1禽流感动物暴发疫情,通过卫生和农业两部门积极采取措施,疫情得到控制,方法有效,未发生人感染病例.
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一起养殖场H5N1禽流感暴发疫情的现场处置报告
目的 调查、分析和处置此次H5N1禽流感农场暴发疫情的流行情况,探讨有效防控措施.方法 对养殖场的35018只鸡进行扑杀和无害化处理,对密切接触人员隔离和医学观察,采集职业暴露者的咽拭子标本,通过荧光RT-PCR方法检测,对疫点周围农民开展调查.结果 2012年3月27日-4月8日,控制住H5N1禽流感疫情,标本核酸检测为阴性,密切接触人员和疫点周围农民均无流感样临床症状.结论 此次H5N1禽流感动物暴发疫情,通过卫生和农业两部门积极采取措施,疫情得到控制,方法有效,未发生人感染疫情.
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江西省2004～2005年禽流感(H5N1)高危暴露人群感染状况调查
[目的]了解江西省H5N1禽流感密切接触者感染状况.[方法]调查2004～2005年禽流感和人禽流感疫情的密切接触者204人的暴露方式,采集静脉血5ml,进行马血球血凝抑制试验和微量中和试验,检测禽流感H5N1抗体水平.[结果]被调查的密切接触者农民占66.2%,学生占13.2%,医护人员占1.9%.73%的人接触过疫点内活禽,54.4%的人接触过病死禽,12.7%的人有禽流感患者接触史,接触过程中,多只有16.2%的人采取了一些防护措施,且防护不规范.经检测,所有密切接触者血清标本禽流感H5N1抗体阴性.[结论]该省2004～2005年间禽流感和人间禽流感疫情的密切接触者均未感染H5N1.
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流感大流行的演变过程及预防控制
本文介绍了流感病毒的特征,变异机制,回顾了历史上流感大流行事件,对流感大流行的疫情发展过程进行了分析,从禽流感与人禽流感的关系淡人禽流感的预防控制策略和措施.
