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NS1融合蛋白文献资料
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H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白表达影响因素分析
目的 优化高表达禽流感病毒NS1蛋白的实验方法.方法 将基因工程菌接种LB培养基,设定IPTG终浓度为0.3mmol/L,诱导温度为37℃,诱导表达6.0h,SDS-PAGE分析融合蛋白表达情况,确定佳诱导时间.以0.1mmol/L为梯度,设置不同IPTG诱导浓度,37℃诱导4.0h,分析融合蛋白表达,确定佳IPTG诱导浓度.设定IPTG至终浓度为0.6mmol/L,分别于24℃、28℃、32℃、37℃和42℃下诱导表达4.0h,分析融合蛋白表达,确定适诱导温度.采用优表达条件,超声裂菌后SDS-PAGE分析融合蛋白,Western blotting对融合蛋白进行鉴定.结果 当培养温度为37℃,IPTG浓度为0.3mmol/L时,融合蛋白GST-NS1在IPTG诱导5.0h时的表达量高,达28.5％；当IPTG诱导浓度为0.6mmol/L,在37℃诱导表达4.0h时,融合蛋白的表达量可达27.9％.选用优化的表达条件,IPTG 0.6mmol/L,37℃诱导表达4.0h,融合蛋白的表达量高可达33.2％.进一步分析显示,融合蛋白大部分以可溶形式表达,其表达量可占菌体总蛋白的25.1％.经SDS-PAGE电泳、电转移后,用小鼠抗GST单克隆抗体进行免疫印迹分析,出现一条阳性反应带.结论 通过实验优化了工程菌诱导表达的佳IPTG浓度、适时间和培养温度,实现了融合蛋白的可溶性高表达.
