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HPV16L1-E7重组腺病毒载体疫苗免疫BALB/c小鼠的研究
目的:探讨人乳头瘤病毒16型L1-E7重组腺病毒载体疫苗的免疫效应.方法:①将rAd5HPV16L1-E7载体疫苗在293细胞中扩增后,以肌肉注射、腹腔注射、滴鼻和灌胃途径免疫小鼠,采用ELISA法测其血清IgG抗体水平;②制备脾细胞悬液,加入到96孔无菌培养板中,并分别加入rAd5HPV16L1-E7特异性蛋白和RPMI1640+10%胎牛血清,加入3H-TdR1μCi/孔,做T-细胞增殖实验;③取经过培养56 h的培养液进行IFN-γ的测定.结果:不同途径免疫的BALB/c小鼠血清IgG抗体水平均高于对照组(P＜0.05),但以肌注组产生抗体量多,IFN-γ和T-细胞增殖亦高于对照组(P＜0.05).结论:rAd5HPV16L1-E7重组活病毒疫苗既能刺激T-细胞产生细胞介导的免疫应答,又能刺激B-细胞产生抗体介导的免疫应答,说明其具有很好的免疫原性.
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张应变条件下miR－33调控移植静脉内膜增生的机制研究
目的：探究张应变条件下microRNA－33（miR－33）调控移植静脉内膜增生的机制，为缓解静脉移植内膜增生提供潜在治疗方法。方法：SD大鼠进行“套管法”自体静脉移植，Elastin－van Gesion染色观察内膜增生情况。使用FX4000细胞应力加载装置（ Flexcell International ）对静脉平滑肌细胞加载频率1．25 Hz、幅度10％的张应变以模拟静脉在动脉环境受到的张应变力学刺激。 qRT－PCR检测miR－33表达，Western blotting检测相关蛋白，BrdU增殖实验和CCK－8试剂盒检测细胞增殖。双萤光素酶报告基因验证miR－33与靶基因的作用关系。骨形态发生蛋白3（BMP3）特异性siRNA干扰片段、重组蛋白以及miR－33 in－
hibitor和mimics用于研究细胞功能和相关信号通路。在体局部注射miR－33 agomir和antagomir来验证miR－33在静脉移植内膜增生中的作用。结果：移植静脉出现明显内膜增生，miR－33显著降低，而BMP3、p－Smad5和p－Smad2表达明显上升；牵拉条件下得到与移植静脉中相同的结果。双萤光素酶报告基因实验证明BMP3是miR－33的靶基因。 miR－33 mimics抑制BMP3及下游信号分子p－Smad2、p－Smad5表达和细胞增殖； miR－33 inhibitor 或者BMP3重组蛋白得到类似结果。在体注射miR－33 agomir降低BMP3及下游信号分子表达，亦可缓解静脉移植内膜增生。结论：miR－33－BMP3－Smad信号通路参与移植静脉平滑肌细胞增殖；miR－33可以缓解静脉移植内膜增生过程，具有潜在临床应用前景。 -
信号传导与转录激活因子-3通过上调miR-21促进食管癌细胞增殖的实验研究
目的 探讨信号传导与转录激活因子3 (STAT3)蛋白通过上调miR-21促进食管癌细胞增殖的机制.方法 检测正常食管上皮细胞株和几株食管癌细胞株STAT3和miR-21的表达,选取一株STAT3表达相对高的作为实验对象.si-STAT3干扰STAT3的表达后检测miR-21的表达,通过MTT 和Western blot实验分别检测对细胞增殖能力以及对PI3K-Akt信号通路的影响.结果 与正常食管上皮细胞相比,食管癌细胞株中STAT3和miR-21的表达明显升高,Western blot结果显示,食管癌细胞株中STAT3的表达水平明显高于正常食管上皮细胞.选择STAT3表达量高的TE-2细胞作为后续实验对象,干扰STAT3后,miR-21的表达明显降低.MTT实验结果显示,与NC组相比,sh-STAT3组食管癌细胞株增殖能力明显降低,而sh-STAT3联合miR-21组增殖能力无明显变化.Western blot结果显示,与NC组相比,sh-STAT3组p-Akt表达明显降低,sh-STAT3联合miR-21组p-Akt表达无明显改变.结论 STAT3通过上调miR-21促进食管癌细胞增殖,可能与PI3k-Akt信号通路有关.
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鼻咽癌干细胞的研究进展
鼻咽癌高发于我国华南地区、东南亚等地.目前鼻咽癌的治疗主要以放疗为主,因其高转移率及局部复发,5年生存率徘徊于10%～40%.目前鉴别肿瘤干细胞的"金标准"[1] 是联合肿瘤细胞体外增殖实验及动物移植瘤实验.肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)具有分化潜能,其大部分子代细胞为非致瘤细胞,具有增殖能力但不能生发和维系肿瘤等特征,移植极少量该型细胞到免疫缺陷动物即可成瘤.故针对鼻咽癌CSCs的靶向治疗在鼻咽癌的治疗具有广泛的前景.CSCs是肿瘤中存在的极少部分具有自我更新、多向分化潜能、维系肿瘤生长的恶性细胞.传统放化疗不能完全消除肿瘤,因为遗留了真正致瘤的CSCs,被认为是肿瘤复发、转移及放化疗抗拒的根源.鼻咽癌中也可能存在CSCs,针对鼻咽癌CSCs的靶向治疗在鼻咽癌治疗具有广泛的前景.但寻找特异的鼻咽癌CSCs分选标志物是研究的颈瓶.本文拟对鼻咽癌CSCs存在证据及表面标志物筛选等方面的进展进行简要综述.
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芪莲汤药物血清对小鼠脾淋巴细胞增殖及白细胞介素-2分泌的实验研究
目的:用血清药理学方法研究芪莲汤对小鼠免疫功能的影响,探讨其可能的作用机制.方法:用MTT法测定不同浓度芪莲汤药物血清对美洲商陆(PWM)诱导的脾淋巴细胞增殖的活细胞数;用ELISA法测定不同浓度芪莲汤药物血清对PWM诱导的淋巴细胞分泌白细胞介素-2(IL-2)的水平.同时设白山云芝多糖组作为阳性药物对照组.结果:20%和10%芪莲汤药物血清可增强PWM诱导的脾淋巴细胞增殖能力,与空白对照血清组比较差异有显著性(P<0.05).20%芪莲汤药物血清作用效果要优于白山云芝多糖组,差异有显著性(P<0.05).20%芪莲汤药物血清使PWM诱导的脾淋巴细胞IL-2表达增加,与空白对照血清组比较,差异有显著性(P<0.05).结论:芪莲汤药物血清可正向调节小鼠脾淋巴细胞的增殖及IL-2的表达.
