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组蛋白甲基化抑制剂DZNep对小鼠缺血再灌注损伤肾脏的保护作用
目的：探讨组蛋白甲基化抑制剂DZNep在小鼠肾脏缺血再灌注损伤模型中对肾脏的早期保护作用。方法：18只C57BL／6小鼠随机分成假手术组（sham组）、缺血再灌注损伤组（IR组）和缺血再灌注＋治疗组（IR＋DZNep组）。后两组建立缺血再灌注损伤模型，IR＋DZNep组双侧腹股沟皮下注射DZNep（1 mg／kg）100μL。假手术组游离双侧肾蒂但不阻断。术后36 h采集标本，评价肾功能和肾组织病理学损伤；通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测肾小管上皮细胞凋亡情况；通过检测髓过氧化物酶（M PO ）评价炎症细胞的浸润程度；采用实时定量反转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测肾脏组织相关炎症细胞因子水平。结果：肾脏缺血再灌注损伤后36 h ，与IR组相连，IR＋DZNep组小鼠血肌酐和尿素氮水平明显下降（69．17±3．49 v s 103．83±14．62，9．56±1．07 v s 0．75±15．83；P＜0．05）；病理损伤减轻，肾小管细胞凋亡减少，炎症细胞因子水平降低（P＜0．05）。结论：DZNep可以通过抑制细胞凋亡、减轻炎症反应等方式降低小鼠缺血再灌注损伤肾脏的损伤程度，发挥对肾脏的保护作用。
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EZH2基因对人食管癌细胞增殖的影响
目的:探讨过表达或沉默果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)基因对食管癌细胞增殖的影响.方法:选用人食管癌细胞株ECA 109、TE1、KYSE30、KYSE 170作为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qPCR)、Western blotting法分别检测食管癌细胞EZH2mRNA和蛋白的表达水平,然后采用qPCR检测过表达和沉默EZH2基因后对4株食管癌细胞EZH2mRNA的表达变化;CCK-8增殖实验、克隆形成实验检测过表达和沉默EZH2基因及EZH2抑制剂DZNep(3-deazaneplanocin A)处理对食管癌细胞增殖能力和克隆形成率的影响.结果:食管癌ECA 109、TE1细胞中EZH2 mRNA和蛋白水平明显高于KYSE30、KYSE 170细胞(P＜0.05).食管癌TE1、ECA 109细胞转染EZH2-ShRNA后EZH2表达水平下调(均P＜ 0.05)、细胞增殖能力降低(1.07±±0.08 vs 1.59±±0.09,P＜0.05;0.88±0.08 vs 1.05±0.11,P＜0.05)、克隆形成数下调[(200.00±11.43) vs (480.00±±13.10)个,P＜0.05;(88.00±±8.16) vs (220.00±±±14.69)个,P＜0.05].KYSE30、KYSE 170细胞转染EZH2过表达质粒后EZH2表达水平升高(均P＜0.05)、细胞增殖能力显著增强(1.06±0.07 vs 0.76±0.06,P＜0.05;3.36±±0.30 vs 1.50±0.08,P＜0.05)、克隆形成数显著升高[(45.00±3.27) vs (18.00±±1.63)个,P＜0.05;(65.00±4.08) vs (23.00±±2.45)个,P＜0.05];DZNep处理后,ECA109和TE1细胞增殖能力降低(均P＜0.05)、克隆形成数下降(均P＜0.05).结论:EZH2基因能有效促进食管癌细胞的增殖和克隆形成能力,为深入研究EZH2作为食管癌治疗的新靶点提供了实验研究基础.
关键词： 食管癌 果蝇Zeste基因增强子人类同源物2 DZNep 细胞增殖 -
DZNep在肿瘤治疗中的研究进展
近年来,果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)被认为是一种致癌基因,EZH2抑制剂DZNep(3-deazaneplanocin A)因其通过阻断EZH2途径对肿瘤发挥潜在的抗增殖和促凋亡作用而备受关注.DZNep是一个全新的染色质修饰药物,越来越多的证据表明DZNep参与肿瘤细胞增殖、凋亡、侵袭、转移及新生血管形成等病理生理过程.DZNep可能为肿瘤治疗提供新的途径.本文对近年来DZNep在肿瘤治疗中的研究进展进行综述.
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DZNep通过上调miR-200c表达延缓MGC-803胃癌细胞侵袭和迁移过程
本文旨在研究组蛋白甲基化修饰调控对胃癌细胞miR-200c的表达调节以及对癌细胞的侵袭和迁移的作用.组蛋白甲基转移酶抑制剂DZNep (2.5 μmol/L)处理MGC-803胃癌细胞系,用实时定量PCR (qRT-PCR)检测细胞miR-200c的表达变化,用Western blot检测上皮间质转化相关蛋白、EZH2、EED、SUZ12、H3K27me3及MMP9的蛋白表达变化,用细胞划痕实验和Transwell法检测细胞迁移和侵袭.结果显示,与对照(DMSO处理)组相比,DZNep (2.5 μmol/L)处理的MGC-803肿瘤细胞miR-200c基因的表达显著提高,ZEB1、ZEB2、N-cadherin的表达显著下调,E-cadherin的表达上调,EZH2、EED、SUZ12、H3K27me3及MMP9的表达均显著降低,细胞迁移、侵袭能力均减弱.以上结果提示,DZNep通过上调miR-200c的表达延缓胃癌细胞侵袭、迁移过程,其机制涉及对上皮间质转化相关蛋白和PRC2 (polycomb repressive complex 2)的表达调节.
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EZH2对HSC-T6细胞增殖活化的影响及其部分机制研究
目的探讨 Zeste 基因增强子同源物2( enhancer of zeste homolog 2,EZH2)表达沉默对大鼠肝星状细胞HSC-T6细胞增殖活化的影响,及其部分调控机制。方法应用EZH2的抑制剂DZNep(3-Deazaneplanocin A)作用于TGF-β1诱导活化的 HSC-T6细胞,采用 Western blot 法检测蛋白EZH2、p-ERK、p-AKT和α-SMA的表达；根据 EZH2的碱基序列设计并合成小干扰 RNA ( small interfering RNA,siRNA),通过脂质体LipofectamineTM 2000转染到HSC-T6细胞内,应用四甲基偶氮唑盐( MTT)法检测HSC-T6细胞的增殖变化,Western blot法检测蛋白EZH2、p-ERK、p-AKT和α-SMA的表达。结果将 DZNep 加入 TGF-β1诱导活化的HSC-T6细胞后, EZH2蛋白水平明显降低,同时 p-ERK、p-AKT和α-SMA蛋白水平亦明显降低；将 EZH2-siRNA转染活化的HSC-T6细胞内,HSC-T6细胞的增殖可明显被抑制,同时EZH2、p-ERK、p-AKT和α-SMA蛋白水平亦明显降低。结论抑制EZH2的表达可明显抑制HSC-T6细胞的增殖活化,EZH2可能是潜在的治疗肝纤维化的靶点。
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DZNep对裸鼠食管鳞癌移植瘤生长的抑制作用
目的:探讨EZH2抑制剂DZNep对裸鼠Eca109细胞移植瘤生长及mTOR/p70S6K信号通路的影响.方法:将Eca109细胞接种于15只裸鼠右侧背部皮下构建裸鼠移植瘤模型后分为3组,每组5只,其中2组分别腹腔注射5-氟尿嘧啶(5-FU)、DZNep治疗2周,另外1组腹腔注射生理盐水作为对照组.观察肿瘤生长情况,采用Western blot检测肿瘤组织中EZH2、SAHH、组蛋白甲基化相关蛋白及mTOR/p70S6K信号通路相关蛋白、Caspase-3、E-cadherin的表达情况,并通过TUNEL法检测肿瘤组织中细胞的凋亡,计算细胞凋亡率.结果:DZNep组肿瘤块质量小于对照组(P＜0.05).与对照组比较,DZNep组肿瘤组织中Caspase-3和E-eadherin表达水平增高,细胞凋亡率升高(P＜0.05).另外,与对照组相比,DZNep组H3 K27 me3表达降低,PTEN表达升高,mTOR和p-p70S6K表达均下降(P＜0.05).结论:DZNep可抑制食管鳞癌移植瘤增长,并诱导肿瘤细胞凋亡;其机制可能是通过对EZH2的抑制增强PTEN的表达,从而抑制mTOR/p70S6K信号通路的激活.
关键词： 食管鳞癌 EZH2抑制剂 DZNep 裸鼠 mTOR/p70s6K信号通路 -
DZNep对 Eca109细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响
目的：探讨 DZNep处理食管鳞状细胞癌 Eca109细胞后对其增殖、凋亡及迁移能力的影响。方法：DZNep处理Eca109细胞48 h，以DMSO处理48 h的Eca109细胞作为对照。采用EdU荧光显微镜法检测细胞增殖率，流式细胞仪检测细胞凋亡率， Transwell 小室检测细胞迁移数。结果：DZNep处理后的Eca109细胞增殖率为（34．60±4．45）％，低于对照组的（42．37±4．64）％（t＝3．625，P＝0．002）；其细胞凋亡率为（16．27±3．70）％，高于对照组的（7．38±0．77）％（t＝7．061，P＜0．001）；迁移到下室的细胞数为（179±38）个，较对照组的（494±99）个少（t＝8．912，P＜0．001）。结论：DZNep能够抑制Eca109细胞的增殖和迁移，促进其凋亡。
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组蛋白甲基化转移酶EZH1/2在小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化中的作用
目的 探讨组蛋白甲基化转移酶EZH1/2在小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化中的表达变化规律及EZH2选择性抑制剂DZNep对EZH1/2在小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化中表达的影响.方法 通过体外培养小鼠子宫内膜基质细胞,小鼠子宫内膜基质细胞生长到80％～90％时进行雌孕激素诱导蜕膜化及加抑制剂处理分成以下4组,对照组:2％FBS/DMEM(含P/S);蜕膜化组:加入含有E2(10 nmol/L)+P4(1μmol/L)的2％FBS/DMEM(含P/S);抑制剂(DZNep)组:加入含有DZNep(20μmol/L)的2％FBS/DMEM(含P/S);蜕膜化加抑制剂组:加入含有DZNep(20μmol/L)+E2+P4的2％FBS/DMEM(含P/S),0、24、48、72 h拍照,48 h换液,72 h收细胞.利用免疫荧光化学及Real-time PCR方法从蛋白和mRNA水平检测EZH1/2在小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化中的表达.结果 (1)小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化72 h中EZH1/2基因的表达明显上调,蜕膜化组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);(2)蜕膜化联合抑制剂组与对照组相比,抑制剂组可以促进EZH1mRNA和EZH2 mRNA的表达,差异有统计学意义(P<0.05);与蜕膜化组相比,蜕膜化加抑制剂组EZH1 mRNA和EZH2 mRNA的表达上调,差异有统计学意义(P<0.05);(3)DZNep联合蜕膜化处理抑制EZH2蛋白的表达,但促进EZH1蛋白的表达.结论 (1)EZH1/2基因参与mESC蜕膜化过程;(2)DZNep单独可以促进小鼠子宫基质细胞蜕膜化;(3)在小鼠子宫内膜蜕膜化细胞中,DZNep在转录水平可以促进EZH1/2 mRNA的表达,在蛋白水平抑制EZH2的表达、促进EZH1的表达.
关键词： 组蛋白甲基化转移酶 小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化 DZNep -
DZNep通过下调EZH2蛋白表达抑制人前列腺癌PC3细胞增殖
目的 研究EZH2蛋白抑制剂DZNep对前列腺癌PC3细胞增殖的影响及其用于人前列腺癌治疗的潜在价值.方法 MTT分析DZNep处理、siRNA敲低EZH2和EZH2过表达对PC3细胞增殖的影响,Western blot检测EZH2和Bax/Bcl-2的表达.结果 DZNep抑制PC-3细胞增殖、诱导细胞凋亡,上调Bax基因表达并下调Bcl-2基因表达.敲低EZH2抑制PC3细胞增殖,过表达EZH2则拮抗DZNep对PC3细胞的增殖抑制.结论 DZNep通过下调EZH2表达、诱导细胞凋亡发生从而抑制PC3细胞增殖.DZNep具有抗人前列腺癌治疗的潜在应用前景.
