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红景天对大鼠肝纤维化肝脏中HAb18G/CD147的表达
目的:探讨红景天对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化肝组织中HAb18G/CD147基因表达的影响.方法:健康♂ SD大鼠60只随机分组:(1)对照组(20只),腹腔给予橄榄油和生理盐水ig;(2)模型组(20只),以CCl4 ip法诱导大鼠肝纤维化;(3)干预组(20只),在造模的同时给予红景天ig.8 wk实验结束时处死动物,留取部分肝脏组织做HE,部分应用半定量RT-PCR检测HAb18G/CD147mRNA的表达情况,部分用免疫组化检测肝组织中HAb18G/CD147的表达.结果:干预组大鼠肝组织中HAb18G/CD147mRNA及蛋白阳性表达阳性率明显均低于模型组(P＜0.05);肝组织HAb18G/CD147蛋白表达与HAb18G/CD147mRNA水平变化成正相关.结论:中药红景天能有效抑制CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝脏中HAb18G/CD147表达.
关键词： 红景天 肝纤维化 HAb18G/CD147 -
新型标志物HAb18G/CD147在大样本胃癌组织中的表达研究
目的:探讨新型标志物HAb18G/CD147在胃癌组织中的表达及其与临床病理学的关系.方法:收集手术切除的胃癌样本552例,构建组织芯片,并以100例癌旁正常胃黏膜组织作为对照.利用免疫组化方法检测2组HAb18G/CD147的抗原表达和定位,并追踪随访胃癌组患者12～72个月.结果:HAb18G/CD147抗原定位于细胞膜,在胃癌组织中表达阳性率高于癌旁正常胃黏膜组织(63％比55％).肿瘤组织中HAb1 8G/CD147的高表达与肿瘤大小、Borrmann分型、Lauren组织学分型、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P＜0.05),但与患者的年龄、性别、肿瘤生长部位、肿瘤分化程度、有无脉管浸润及远处转移间无相关性(P＞0.05).HAb 18G/CD 147阳性表达与患者术后近期生存率显著相关(P=0.023).结论:HAb18G/CD147在胃癌中的表达与胃癌的发展、侵袭性行为及预后均相关,可作为临床评估胃癌生物学行为不良的一项分子标志.
关键词： 胃癌 HAb18G/CD147 肿瘤标志物 组织芯片 -
HAb18G/CD147刺激人肝癌细胞分泌基质金属蛋白酶的机制探讨
目的探讨HAb18G/CD147诱导肝癌细胞基质金属蛋白酶(MMP)分泌和活化的机制.方法应用明胶酶谱分析方法观察HAb18G/CD147分子及其细胞内、外片段高表达对人SMMC-7721肝癌细胞分泌MMP(MMP-2和MMP-9)及其活化的影响,以及细胞内Ca2+信号调控在此过程的作用.结果HAb18G/CD147分子的高表达明显诱导MMP-2和MMP-9的分泌和活化,分泌总量升高(30.45±3.41)%(P＜0.01),而细胞内、外各片段的表达均不能有效刺激MMP的分泌与活化.细胞内Ca2+库释放诱导剂Thapsigargin(Tg)在未转染7721细胞可有效诱导MMP-2和MMP-9的分泌与活化,较对照组升高(58.63±31.04)%(P＜0.05),其诱导作用可受到细胞内Ca2+调节抑制剂S-亚硝基-乙酰青霉胺(S-nitroso-N-acetylpenicillamine,SNAP)的明显抑制,而HAb18G/CD147的高表达则抑制了以上细胞内Ca2+信号通路对MMP分泌和活化的调节作用,使转染的T7721细胞MMP的分泌与活化始终处于高水平稳定状态.结论全长的HAb18G/CD147分子可通过抑制细胞内Ca2+信号调控通路诱导肝癌细胞稳定高表达和活化MMP.
关键词： 癌 肝细胞 肿瘤细胞 培养的 SMMC-7721细胞 基质金属蛋白酶类 HAb18G/CD147 钙离子通道 -
HAb18G/CD147拮抗肽对荷瘤裸鼠的实验性治疗作用
目的研究肝癌转移相关因子HAb18G/CD147的合成拮抗肽(APs)对荷人肝癌裸鼠的实验性治疗作用.方法采用皮下接种人肝癌细胞系HHCC和肝脏原位接种人高转移肝癌细胞系MHCC97-H形成瘤块的BALB/C裸鼠模型,静脉给予APs:2.5 mg/kg,皮下组:隔日1次,共12次;原位组:每日1次,共15次.皮下组:观察接种HHCC细胞后皮下肿瘤生长情况,从d10开始,每4 d测定1次肿瘤体积;观察150 d裸鼠生存情况.原位组:接种MHCC97-H后,d21杀裸鼠,观察肝脏各叶肿瘤播散情况,计数灶数;观察肺脏和腹腔淋巴结转移情况;肝脏、肺脏和淋巴结结合病理学切片检查.结果皮下荷HHCC实验:在d 30 AP-Ⅰ治疗组瘤体积215.0±259.5 mm3,对照组471.4±187.5 mm3,差异有显著性(P＜0.05).AP-1和AP-6治疗组与对照组比较,150 d生命延长率分别为49.8%(P＜0.01)和43.7%(P＜0.05).肝脏原位荷MHCC97-H实验:AP-1和AP-6治疗组,肝内播散灶数少于对照组;肺脏、淋巴结转移也少于对照组.结论HAb18G/CD147拮抗多肽AP-1和AP-6对裸鼠皮下和肝脏原位接种人肝癌的生长抑制和延长生命有明显的作用.
关键词： 肝细胞癌 HAb18G/CD147 拮抗肽 转移 实验性治疗 -
βig-h3 mRNA在人肝癌细胞系中的差异表达及其意义
目的:测定转化生长因子β(TGF-β)诱导分子βig-h3 mRNA在人肝癌细胞系中的表达情况. 方法:培养人肝癌细胞T7721(转染并稳定高表达HAb18G/CD147)、7721(未转染HAb18G/CD147)、人肝细胞癌细胞系(HHCC)和正常人张氏肝细胞QZG,提取总RNA,设计合成特异性引物,以β-肌动蛋白(β-actin)作为内参照,检测βig-h3 mRNA的差异表达情况. 结果:逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)结果显示,TGF-β诱导分子βig-h3的mRNA在人肝癌细胞中的表达水平明显高于正常肝细胞(P<0.01),其在人肝癌细胞系中的表达水平依次为HHCC>T7721>7721,在正常肝细胞QZG中表达水平低. 结论:证明了βig-h3 mRNA在人肝癌细胞系中高表达,为进一步探讨βig-h3在肝癌细胞黏附和转移过程中的作用机制奠定了基础.
关键词： βig-h3/TGFΒI 肝癌 HAb18G/CD147 黏附 -
HAb18G/CD147的表达与卵巢上皮性恶性肿瘤侵袭转移及意义的研究进展
卵巢恶性肿瘤死亡率居妇科恶性肿瘤之首,由于早期症状隐匿,缺乏早期诊断方法,故多数临床病患发现时已属晚期.卵巢上皮性恶性肿瘤为常见,由多因素参与、多步骤完成的发生、转移过程一直是学者研究的焦点.HAb18G/CD147广泛存在肿瘤组织中,通过诱导生成基质金属蛋白酶(MMP-s)促进肿瘤生长,C-Jun氨基末端激酶(JNK)途径过度激活等,参与卵巢恶性肿瘤的侵袭转移.作为一种新型肿瘤抗原,HAb18G/CD147可能成为一种早期诊断、综合评估卵巢上皮性恶性肿瘤的有效指标.
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肝癌细胞内HAb18G/CD147信号转导通路关键分子的筛选
目的 筛选肝癌细胞内HAb18G/CD147信号转导通路中差异表达的关键分子.方法 提取SMMC-7721细胞和T7721细胞(SMMC-7721经稳定转染并高表达HAb18G/CD147的肝癌细胞),应用信号转导相关基因芯片筛选两种肝癌细胞内差异表达的关键分子.结果 基因芯片结果显示共有13个差异表达的基因,在高表达HAb18G/CD147的T7721细胞系中,表达下调的基因包括:骨形成蛋白(BMP)家族的BMP-2、BMP-5,内皮素1(ET-1),结缔组织生长因子-富含半胱氨酸血管生成诱导物61-肾母细胞瘤过表达基因(CCN)蛋白家族的WISP-2(Wnt1-induced signaling proteins-2/CCN5)和富含半胱氨酸蛋白61(cysteine-rich 61/CCN1),前列腺干细胞抗原(PSCA);表达上调的基因包括:白细胞介素10受体α(IL-10Rα),趋化因子家族的IL-6、IL-8和CXC趋化因子配体2(CXCL2/GROβ),线粒体超氧化物歧化酶2(SOD2),B因子(Bfactor)和转化生长因子β(TGF-β)诱导基因克隆3(βig-h3)的表达.结论 共筛选出HAb18G/CD147信号转导通路相关的13个差异表达基因,这些基因与肝癌细胞免疫微环境重塑、血管形成、增殖、侵袭和迁移等生物学过程相关.
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HAb18G/CD147在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义
目的:探讨HAb18G基因产物表达与食管鳞状细胞癌(ESCC)临床病理特征及预后的关系.方法:应用免疫组化SP染色法分析了108例食管鳞状细胞癌标本中HAb18G基因产物表达情况和定位,并对其进行了术后3年随访.结果:HAb18G基因产物在有淋巴结癌转移和预后差的食管鳞状细胞癌病例中高表达;HAb18G的高表达与食管鳞状细胞癌的浸润转移、分化程度均相关(P＜0.05);淋巴结转移和HAb18G表达可作为食管鳞状细胞癌患者预后独立指标.结论:HAb18G在食管鳞状细胞癌中的表达与食管癌的发生发展、浸润转移和预后密切相关,可作为临床预测浸润转移和估计预后的一个重要参考指标.
关键词： HAb18G/CD147 食管鳞状细胞癌 免疫组化 预后 -
不同免疫方案制备抗HAb18G/CD147胞外区多克隆抗血清的比较
目的: 制备针对肝癌相关抗原HAb18G/CD147胞外区不同表位的抗血清, 比较不同免疫方案的免疫效果.方法: 以原核表达的GST-HAb18GEF融合蛋白、重组真核表达质粒pcDNA3/HAb18G及HCC细胞为免疫原, 分别采用蛋白常规免疫、 DNA肌肉免疫及pcDNA3/HAb18G-HCC booster(DNA-cell booster)免疫接种BALB/c小鼠.采用间接ELISA和细胞ELISA, 同时测定免疫血清中抗变性和天然HAb18GEF IgG抗体的滴度和Ig亚类.用Western blot检测各免疫方案制备的抗血清, 与变性HAb18GEF抗原结合的特异性.用免疫荧光法验证DNA-cell booster免疫接种法制备的抗血清, 与细胞膜上天然HAb18G抗原的结合特异性.结果: 以GST-HAb18GEF常规免疫后, 可诱导高滴度的IgG1抗体产生, 但针对的多为HAb18GEF的变性或线性表位; 以pcDNA3/HAb18G肌肉免疫后, 可诱导针对其天然表位的IgG2a抗体产生, 但滴度较低; 以DNA-cell booster免疫后, 可诱导中等滴度、针对其天然表位的IgG2a和IgG1抗体产生.结论: 不同免疫方案可诱导针对HAb18GEF不同表位、不同滴度的多克隆抗血清, 为淘筛针对其不同表位的多样性抗体奠定了基础.
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βig-h3在肝癌细胞系中差异表达的筛选和鉴定
目的:筛选并鉴定TGFβ诱导分子βig-h3基因在肝癌细胞系T7721和7721中的差异表达. 方法:培养肝癌细胞系T7721(转染并稳定高表达HAb18G/CD147), 7721(未转染HAb18G/CD147),提取总RNA,荧光交换标记(Cy5和Cy3) 筛选信号转导相关基因芯片;RT-PCR检测基因芯片初步筛选出的差异分子(βig-h3)在肝癌细胞T7721和7721中的差异表达. 结果:①经基因芯片差异分析,在高表达HAb18G/CD147的T7721细胞中TGFβ诱导分子βig-h3的mRNA表达明显上调,为7721细胞的4.4倍;而TGFβ1的mRNA表达无明显差别. ② RT-PCR显示βig-h3mRNA在T7721中的表达水平明显高于7721(t=14.42, P<0.01). 结论:经基因芯片筛选分析,发现HAb18G/CD147分子与TGFβ诱导分子βig-h3的表达成正相关, HAb18G/CD147的高表达诱导了βig-h3的表达增高,为进一步探讨在细胞内信号转导通路中HAb18G/CD147分子促进肝癌细胞侵袭和转移的作用机制奠定了基础.
关键词： HAb18G/CD147 癌 肝细胞 βig-h3/TGFBI 肿瘤转移 -
肝癌相关抗原HAb18G反义RNA表达质粒的构建及克隆鉴定
目的构建HAb18G反义RNA表达质粒载体. 方法用DNA重组技术将人HAb18G基因反向克隆到真核表达质粒PCI-neo中,构建成HAb18G反义RNA表达质粒PCI-asHAb18G. 用阳离子脂质体介导转染人肝癌细胞系HHCC,经G418筛选后获得的克隆进行鉴定. 结果 HAb18G反义RNA表达质粒载体PCI- asHAb18G经限制性酶切及部分序列分析证明基因插入正确. 流式细胞仪及免疫组化SP法染色均证实:转染细胞HHCC/asHAb18G中HAb18G表达为阴性,而转染空载体的HHCC/neu及HHCC均为强阳性. 结论成功构建了HAb18G反义RNA表达质粒载体PCI-asHAb18G. 为进一步研究HAb18G蛋白分子的生物学功能及肝癌的基因治疗研究奠定了基础.
关键词： 肝肿瘤 遗传载体 RNA 反义 HAb18G/CD147
