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铁皮石斛对高糖环境下人脐静脉内皮细胞线粒体膜电位的影响
目的 研究铁皮石斛多糖对体外高糖环境下人脐静脉内皮细胞线粒体膜电位的影响及其作用机制.方法 将常规培养的人脐静脉内皮细胞分为DMEM/低糖培养基组(对照组)、DMEM/高糖培养基组(33.3 mmol/L)(高糖组)、3个不同浓度铁皮石斛多糖高糖组(100、200、400 μg/ml)共5组,培养48 h后MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测线粒体膜电位.结果 33.3 mmol/L高糖环境下人脐静脉内皮细胞生长受抑,细胞线粒体膜电位降低,铁皮石斛多糖能剂量依赖性地有效拮抗上述改变,且有统计学意义(P＜0.05).结论 铁皮石斛多糖可能通过升高高糖环境下的人脐静脉内皮细胞线粒体膜电位,增加高细胞活力,而对其具有较好的保护作用.
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铁皮石斛多糖对冠心病模型家兔心功能及心肌收缩能力的影响
目的:观察铁皮石斛多糖对冠心病模型家兔心功能、心肌收缩能力的影响,并探讨其相关作用机制.方法:30只健康家兔随机分为对照组、模型组、铁皮石斛多糖低、中、高剂量组5组,每组6只.采用左冠状动脉放置缩窄环方法,制备冠心病模型.低、中、高剂量组铁皮石斛多糖按100,200,400 mg· kg-1 ig给予,每天1次,连续21 d.对照组、模型组ig给予等体积生理盐水.记录左室收缩压(LVSP),左室舒张末压(LVEDP),左室压力变化大上升和下降速率(±dP/dtmax),动脉收缩压(BPs)和动脉舒张压(BPd),心室质量指数,RT-PCR法检测心肌细胞α-肌球蛋白(α-MHC)mRNA,β-肌球蛋白(β-MHC)mRNA表达,免疫组化检测肌动蛋白(actin)表达.结果:与对照组比较,模型组LVEDP,LVWI,RVWI均升高(P＜0.01,P＜0.05),而LVSP,±dp/ dtmax,BPs均降低(P＜0.01,P＜0.05),α-MHC mRNA表达显著下降(P＜0.01),β-MHC mRNA升高(P＜0.05),模型组actin蛋白表达呈阳性的心肌细胞较多.与模型组比较,铁皮石斛多糖低、中剂量组LVEDP降低(P＜0.01,P＜0.05),而LVSP,±dp/ dtmax,BPs均升高(P＜0.01,P＜0.05),α-MHC mRNA表达显著升高(P＜0.01),β-MHC mRNA表达下降(P＜0.05),各剂量组actin蛋白表达呈阳性的心肌细胞较少.结论:铁皮石斛多糖一定程度上恢复心肌舒缩能力、改善心功能.
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铁皮石斛多糖对高糖诱导的血管内皮依赖性舒张功能的影响
目的:探讨铁皮石斛多糖(dendrobium polysaccharides,DP)对高糖诱导的SD大鼠胸主动脉内皮依赖性舒张功能(endothelium dependent relaxation,EDR)的影响.方法:采用离体血管灌流方法,观察不同浓度DP对高糖诱导的大鼠胸主动脉EDR的影响.Western Blot法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)及核转录因子-κB (NF-κB)的表达.结果:高糖(44 mmol·L-)显著抑制了血管环EDR,而对非内皮依赖性舒张功能没有影响;DP(200,400和800 μg· mL-)逆转了高糖对EDR的抑制作用.高糖显著增加胸主动脉中GRP78和CHOP及NF-κB的表达(P＜0.05).与高糖组比较,高糖+DP(200,400和800 μg· mL-1)组GRP78和CHOP及NF-κB的表达均显著降低(P＜0.05).结论:DP对高糖诱导的EDR抑制具有保护作用,其机制可能与抑制内质网应激和NF-κB信号通路有关.
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两种石斛多糖提高小鼠免疫活性的初步研究
目的 初步评价齿瓣石斛多糖和铁皮石斛多糖对小鼠免疫功能的影响.方法 体外培养小鼠脾淋巴细胞,观察齿瓣石斛多糖和铁皮石斛多糖分别与刀豆蛋白协同作用下对脾淋巴细胞增殖和细胞中γ-干扰素及白细胞介素-2含量的影响；动物实验中,分别灌胃给予不同剂量的齿瓣石斛多糖和铁皮石斛多糖,连续给药14 d后,复制绵羊红细胞致小鼠足肿胀模型,观察两种石斛多糖对小鼠足趾肿胀度和胸腺、脾脏指数的影响.结果 齿瓣石斛多糖和铁皮石斛多糖中剂量组均能显著刺激脾淋巴细胞的增殖,中、高剂量组均能促进脾淋巴细胞中γ-干扰素和白细胞介素-2的分泌；此外,两种石斛多糖高剂量组均可明显增加小鼠足趾肿胀度和脾脏指数,但各剂量组对小鼠胸腺指数无影响.结论 齿瓣石斛多糖和铁皮石斛多糖能一定程度上提高小鼠的免疫活性.
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铁皮石斛多糖对脂多糖诱导的巨噬细胞免疫调节作用
目的 研究经分段醇沉所得铁皮石斛多糖(DOP)对巨噬细胞(RAW264.7)的免疫调节作用.方法 采用分步醇沉法得到不同相对分子质量的铁皮石斛多糖,四唑盐比色法(MTT)检测DOP对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞的保护作用,中性红法检测巨噬细胞的吞噬活性,酶联免疫吸附实验法(Elisa)检测培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量,格里斯试剂比色法(Griess)检测一氧化氮(NO)的释放水平,流式细胞仪检测细胞的极化分型.结果 醇浓度为75％时,醇沉的多糖得率大;DOP能促进RAW264.7细胞增殖,增强巨噬细胞的吞噬活性,降低巨噬细胞TNF-α、IL-6、NO的释放水平,促进细胞分泌TGF-β1并向M2型极化,其效应具有显著性差异(P＜0.01).结论 铁皮石斛多糖能够对RAW264.7细胞起到免疫调节的作用,其机制可能与其促进细胞的吞噬活性、降低炎症因子释放水平和改变细胞极化分型有关.
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铁皮石斛降血糖作用的研究概况
铁皮石斛作为药食两用药材,应用非常广泛,本文从铁皮石斛的降糖成分研究、铁皮石斛单味药在降糖机制方面的研究等方面进行了综述概括,这对进一步研究和开发铁皮石斛的药用价值提供重要依据.
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铁皮石斛尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因的克隆与分析
目的:研究尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UGPase)在铁皮石斛不同组织中的表达情况,探讨其与石斛多糖累积的关系.方法:根据铁皮石斛原球茎转录组数据中的DoUGPase1序列设计引物,并利用RACE技术克隆该基因;用生信分析软件预测其蛋白结构,并进行系统发育分析;利用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)技术研究该基因在铁皮石斛不同年份,不同组织中的表达.结果:通过RACE技术得到1个3054 bp基因,命名为DoUGPasel,其ORF长1530 bp,编码510个氨基酸残基,与油棕(Elaeis guineensis)和波斯枣(Phoenix dactylifera)有一定的同源性,且DoUGPase1在3年生的植株中相对表达量整体较高(P＜0.05).结论:我们预测在铁皮石斛的生长发育过程中DoUGPasel基因与多糖累积的活跃程度成正比例.
关键词： 铁皮石斛多糖 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶 qRT-PCR 蛋白结构 -
铁皮石斛多糖对S180肉瘤小鼠免疫功能的影响
铁皮石斛(Dendrobium Candidum Wall.ex Lindl.)为常用贵重药材,它具有滋阴清热、益胃生津、润肺止咳等功效[1].其主要有效成分为石斛类多糖及生物碱,另外还有酚类、菲类、芪类、倍半萜类及香豆素等.现代药理研究报导石斛多糖具有抗肿瘤、增强免疫力、降低血糖等作用,但对荷瘤动物免疫功能的作用报导甚少.本文以S180肉瘤小鼠为动物模型,探讨了铁皮石斛多糖对S180肉瘤小鼠的免疫调节作用,现将结果报告如下.
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铁皮石斛多糖对RAW2647细胞分泌TNF-α的影响
目的 研究铁皮石斛多糖(polysaccharides from Dendrobium officinale,DOP)对小鼠巨噬细胞系RAW264 7细胞分泌TNF-α的影响并探讨其作用机制.方法 MTT法检测细胞活性;ELISA法检测TNF-α的分泌水平;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TNF-α mRNA 表达量;Western blot 技术检测胞质I-κBα 蛋白的表达量.结果 DOP在20~160 mg·L-1范围内明显促进RAW264.7细胞增殖,无细胞毒性;与空白对照组比较,DOP剂量依赖性地促进TNF-α的分泌;上调TNF-α mRNA 表达;Western blot结果显示DOP能明显降低胞质内I-κBα蛋白水平.结论 DOP能增强RAW264 7细胞分泌TNF-α,其作用机制可能与降低胞质内I-κBα蛋白水平,活化核转录因子NF-κB,诱导TNF-α mRNA的表达有关.
关键词： 铁皮石斛多糖 RAW264.7细胞 细胞增殖 TNF-α TNF-α mRNA I-κBα -
铁皮石斛滴眼液的制备工艺研究
目的:优选铁皮石斛多糖提取、纯化及滴眼剂配制的工艺参数,为工业化生产提供依据.方法:采用硫酸-苯酚比色法测定铁皮石斛样品中的多糖含量;采用单因素和正交试验优选水提、醇沉的工艺参数;采用等级一致性检验法优选滴眼液的配制参数.结果:佳水提工艺为:铁皮石斛鲜药材经冷冻干燥(-55℃、-0.01 Mpa)后,粉碎、过40目筛,过筛后粉末加30倍量水浸泡lh,提取3次,提取时间分别为3,2.5,2h,第2、3次提取加水量分别为25倍和20倍,提取温度为85℃.佳醇沉工艺为:提取液浓缩至固液比为1:3时,加乙醇使含醇量达85％,静置24 h.滴眼液配制参数为:采用3％聚氧乙烯氢化蓖麻油作为稳定剂,0.25％苯甲酸钠和0.25％尼泊金乙酯作为防腐剂.结论:优选的铁皮石斛多糖提取、纯化及滴眼剂配制工艺合理可行、重复性好,适合于工业化生产.
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铁皮石斛多糖对人脐静脉内皮细胞基因表达谱的影响研究
目的:探讨铁皮石斛多糖对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)基因表达谱的影响.方法:以HUVEC为对象,采用MTS法检测不同剂量铁皮石斛多糖(50、100、200、400、800μg/mL)对HUVEC细胞增殖活性的影响,并计算30％细胞生长抑制浓度(IC30)以筛选后续试验剂量;采用基因表达谱芯片技术检测铁皮石斛多糖作用24 h后HUVEC细胞基因表达谱的变化情况,筛选差异表达基因;利用DAVID生物信息学资源数据库对差异表达前5位的基因进行GO富集分析和KEGG通路富集分析;以免疫相关差异表达基因为对象,采用实时荧光定量聚合酶链反应法(qRT-PCR)对芯片检测结果进行验证.结果:经100、200、400、800μg/mL铁皮石斛多糖作用后,HUVEC细胞的存活率均显著降低(P<0.05或P<0.01);IC30值为408μg/mL.经400μg/mL(据IC30值确定)铁皮石斛多糖作用后,HUVEC细胞中共有差异表达基因91个,其中表达上调的有84个、表达下调的有7个.上、下调表达差异前5位的基因分别为SELE、CCL2、CXCL6、IL8、ICAM1以及VWCE、CPT1A、CLU、CCL14、CINS4,主要与免疫调节、炎症反应等有关.HU-VEC细胞中的差异表达基因主要分布于胞外区域,富集于细胞因子的产生及反应、刺激反应等生物学过程,发挥趋化因子及其受体活性等分子功能;其中上调表达基因SELE、ICAM1、CXCL2等主要富集于肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、甲型H1N1流感、单纯疱疹病毒感染等通路,下调表达基因CCL14主要富集于趋化因子信号通路.qRT-PCR验证结果显示,ICAM1基因的相对表达量显著升高,CCL14基因的相对表达量显著降低(P<0.05),与芯片检测结果一致.结论:经铁皮石斛多糖处理后,HUVEC细胞共有91个基因表达差异明显,且以表达上调为主.表达差异基因可能通过TNF信号通路、甲型H1N1流感、单纯疱疹病毒感染等通路参与机体免疫调节.
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铁皮石斛多糖的研究进展
现代药理学研究表明，铁皮石斛多糖具有抗氧化、抑菌、调节免疫等作用。本文对铁皮石斛多糖的提取工艺、药理作用及植物多糖类护肤品的研究开发方面进行阐述，为开发铁皮石斛多糖相关护肤品提供依据。
