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NF-κB及其抑制蛋白I-κBα与大肠癌侵袭和转移的相关性
目的 探讨NF-κB和I-κBα在大肠癌中的表达特点、相互关系及其与大肠癌进展的相关性.方法 免疫组化和Western印迹方法检测48例大肠癌患者手术切除的癌组织以及配对的癌旁正常组织标本中NF-κB,I-κBα和p-IκBα的表达情况,分析这3种蛋白的表达与大肠癌侵袭和转移的相关性.结果 大肠癌组织中NF-κB的表达水平明显高于正常组织(P＜0.01),且随着肿瘤Dukes分期的进展,NF-κB的表达水平呈逐渐升高趋势.大肠癌组织中I-κBα的表达水平明显低于正常组织(P＜0.01),且随着肿瘤Dukes分期的进展,I-κBα的表达水平呈逐渐降低趋势,同时,I-κBα的磷酸化(p-IκBα)水平逐渐升高.结论 在大肠癌组织中I-κBα的磷酸化降解与NF-κB表达升高有助于肿瘤的进展和不良预后.
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铁皮石斛多糖对RAW2647细胞分泌TNF-α的影响
目的 研究铁皮石斛多糖(polysaccharides from Dendrobium officinale,DOP)对小鼠巨噬细胞系RAW264 7细胞分泌TNF-α的影响并探讨其作用机制.方法 MTT法检测细胞活性;ELISA法检测TNF-α的分泌水平;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TNF-α mRNA 表达量;Western blot 技术检测胞质I-κBα 蛋白的表达量.结果 DOP在20~160 mg·L-1范围内明显促进RAW264.7细胞增殖,无细胞毒性;与空白对照组比较,DOP剂量依赖性地促进TNF-α的分泌;上调TNF-α mRNA 表达;Western blot结果显示DOP能明显降低胞质内I-κBα蛋白水平.结论 DOP能增强RAW264 7细胞分泌TNF-α,其作用机制可能与降低胞质内I-κBα蛋白水平,活化核转录因子NF-κB,诱导TNF-α mRNA的表达有关.
关键词： 铁皮石斛多糖 RAW264.7细胞 细胞增殖 TNF-α TNF-α mRNA I-κBα -
高张溶液复苏大鼠创伤失血性休克对肺组织I-κBα水平的影响
目的 探讨高张溶液复苏大鼠THS对肺组织I-κBα水平及该作用对减轻急性肺损伤的意义.方法 实验大鼠分为假创伤失血性休克(Sham)组、大容量等张乳酸钠林格氏液+6%羟乙基淀粉液(RLH)复苏组和小容量高张(7.5%氯化钠)液+6%羟乙基淀粉溶液(HTH)复苏组.采用Western blot技术检测肺组织I-κBα蛋白含量;以RT-PCR检测ICAM-1 mRNA表达水平;以分光光度法测定肺组织MPO活性;光镜下评估肺炎症损伤程度;以干/湿重比代表肺组织水含量.结果 与Sham组比较,肺组织I-κBα含量RLH组明显降低(P＜0.01),HTH组轻微降低且明显高于RLH组(P＜0.01);而ICAM-1 mRNA表达水平RLH组明显增高,HTH组仅轻度增高,低于RLH组(P＜0.05);RLH组MPO活性和炎症损伤评分也均明显高于HTH和Sham两组(P＜0.01),HTH组与Sham组比较差异无统计学意义(P＞0.05);肺水含量在RLH组也有所增高.结论 HTH可明显抑制大鼠THS复苏后肺组织I-κBα的降低,此作用可能与其抑制THS后ICAM-1表达增高和中性粒细胞在肺部大量聚集、从而减轻急性肺损伤有关.
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I-κBα在大鼠局灶性脑缺血再灌注后的作用
目的研究I-κBα在大鼠脑缺血再灌注损伤后作用的蛋白表达的时间和空间分布特点.方法应用Western Blot方法检测对照组及脑缺血2 h再灌注不同时程组(15 h、24 h、48 h)I-κBα蛋白表达水平,并用免疫组化技术研究I-κBα在脑缺血再灌注后作用的空间分布. 结果Western Blot研究发现I-κBα在对照组表达很低,于脑缺血2 h再灌注后15～24 h达到高峰,48 h始有所下降(P＜0.01).免疫组化研究发现:在半暗带的神经元、脑室壁和脉络丛及小血管内皮细胞均有I-κBα的阳性表达.结论由I-κBα介导的NF-κB激活和抑制通路在局灶性脑缺血再灌注损伤的半暗带神经元的存活和血脑屏障中起重要作用.如能在一恰当的时间段内使用合成的I-κBα来抑制NF-κB的激活,可能是一潜在的保护脑组织的治疗途径.
关键词： 再灌注损伤 I-κBα 免疫组化 Western-Blot -
大鼠脑出血后的细胞凋亡及其与NF-κB和Ⅰ-κBα蛋白表达的关系
目的:探讨大鼠脑出血(ICH)后细胞凋亡及其与NF-κB和Ⅰ-κBα蛋白表达的关系和演变规律,本实验用Ⅶ胶原酶联合肝素注入大鼠右侧脑纹状体制备脑出血模型.方法:TUNEL染色(末端脱氧核糖核苷转移酶介导的dUTP缺口末端标记法)观察细胞凋亡的变化;免疫组化SABC法检测NF-κB和Ⅰ-κBα蛋白的表达;West-ern Blot技术检测NF-κB和Ⅰ-κBα蛋白相对光密度值.结果:(1)ICH组TUNEL阳性细胞于出血后12 h可检测到,3 d达高峰,7 d仍有较高表达(P<0.01);(2)ICH组Ⅰ-κBα和NF-κB蛋白免疫阳性细胞分别于出血12 h、3 d达高峰,7 d仍高于假手术组和正常对照组(P<0.01);(3)Western Blot结果显示NF-κB相对光密度比值在ICH 3d出血侧达高峰,I-κBα蛋白相对光密度比值在ICH组ICH侧12 h达高峰,7 d时仍明显高于正常对照组(P<0.05).结论:ICH后存在细胞凋亡;NF-κB和Ⅰ-κBα参与了ICH所致的细胞凋亡.
