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α-黏着斑蛋白在大鼠心脏表达分布随增龄变化的特征
背景:观察α-黏着斑黏着斑蛋白与心脏的先天畸形发育和心肌细胞的分化有着密切的关系.目的:蛋白在大鼠心脏的表达分布特征以及在心肌细胞发育过程中随增龄发生的变化规律.设计:随机对照,观察对比实验.单位:新乡医学院细胞生物学教研室;濮阳职业技术学院生物工程与农业经济系.材料:实验于2003-01/2003-06在新乡医学院形态学研究室完成.选取清洁级Wistar大鼠28只,按年龄分为幼年组、青年组、中年组、老年组,每组7只.方法:所有大鼠在麻醉状态下取大鼠心脏组织,冠状连续系列切片,片厚5 μm.幼年、青年、中年和老年大鼠的心肌细胞α-黏着斑蛋白的表达应用免疫组化方法进行观测.在细胞表面、胞浆中及闰盘处出现棕黄色颗粒为阳性细胞.所有标本均做常规染色(苏木精-伊红染色)为结构对照.主要观察指标:各组大鼠心肌细胞α-黏着斑蛋白的表达.结果:28只大鼠均进入结果分析.①α-黏着斑蛋白在大鼠的心房、心室、乳头肌、室间隔等处的心肌细胞均有表达.②幼年时期α-黏着斑蛋白的免疫标记颗粒大部分集中在心肌细胞末端的闰盘处,少量分散地分布于细胞表面和胞浆中;青年、中年和老年大鼠α-黏着斑蛋白的免疫标记典型的分布在心肌细胞末端的闰盘处.结论:在大鼠心肌发育过程中,α-黏着斑蛋白的表达分布存在增龄变化;α-黏着斑蛋白的分布方式与闰盘的发育是一致的.
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血小板裂解液联合国产多孔钽对MG63细胞增殖以及ITGβ1/Vinculin/F-actin信号通路表达的影响
背景:课题组前期研究发现国产多孔钽有利于MG63细胞的早期黏附、增殖,可用作骨组织工程支架材料.血小板裂解液是富血小板血浆进一步优化后的产物,更适合用于诱导修复骨缺损.目的:在前期研究基础上,深入探索血小板裂解液联合国产多孔钽支架材料对MG63细胞增殖以及ITGβ1/Vinculin/F-actin信号通路表达的影响.方法:培养MG63细胞并接种在国产多孔钽支架上,加入3%、5%、7%、10%血小板裂解液,应用CCK-8法筛选出佳的体积分数7%进行以下实验.实验分组:空白对照组MG63细胞培养;血小板裂解液组:7%血小板裂解液与MG63细胞共同培养;多孔钽组:多孔钽支架材料与MG63细胞共同培养;血小板裂解液-多孔钽组:7%血小板裂解液、多孔钽与 MG63细胞共同培养.扫描电镜观察国产多孔钽及血小板裂解液-多孔钽-MG63细胞复合物的表面形态;CCK-8法检测MG63细胞的增殖状态;qPCR、免疫细胞化学染色、Western-blot检测MG63细胞ITGβ1、Vinculin、F-actin的mRNA和蛋白表达.结果与结论:①扫描电镜显示,MG63细胞均良好地黏附在多孔钽支架表面;②与空白对照组比较,血小板裂解液组与多孔钽组均可促进MG63细胞的增殖(P < 0.05);4组中,血小板裂解液-多孔钽组MG63细胞的增殖显著(P < 0.05);③qPCR、免疫细胞化学染色、Western-blot结果显示,4组中血小板裂解液-多孔钽组MG63细胞的ITGβ1、Vinculin、F-actin的mRNA及蛋白表达多(P < 0.05).说明血小板裂解液和国产多孔钽支架材料能协同促进MG63 细胞的增殖,并能上调ITGβ1/Vinculin/F-actin信号通路mRNA及蛋白的表达,该信号通路的激活可能有助于MG63细胞的增殖、黏附及分化.
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不同硬度聚丙烯酰胺调控骨髓间充质干细胞的定向分化
背景:基底材料硬度可以直接影响干细胞的分化命运,但是干细胞向不同体细胞分化的敏感程度及调控机制目前尚不清楚.目的:探讨基底力学性能对骨髓间充质干细胞分化的影响及其机制.方法:通过调控聚丙烯酰胺的力学强度,使之弹性模量分别与神经组织(0.5 kPa)、软骨组织(10 kPa)、心肌组织(20 kPa)以及骨组织(40 kPa)类似.采用酶联免疫吸附法检测骨髓间充质干细胞在不同弹性模量基底上的分化情况,采用细胞骨架染色及免疫荧光染色观察骨髓间充质干细胞在基底上的细胞骨架形态以及黏着斑蛋白表达.结果与结论:①骨髓间充质干细胞在低硬度基底上向神经和软骨方向分化趋势明显,而高硬度基底上向心肌以及成骨方向分化的趋势不明显,说明骨髓间充质干细胞向神经以及软骨方向分化时,对材料的力学性能敏感,向心肌以及成骨方向分化时对材料的力学性能不敏感;②随着基底硬度的提高,黏着斑蛋白的表达量增高,说明在低硬度基底上,骨髓间充质干细胞感应的力学信号较低,激活了某些与软骨和神经分化相关的信号通路的表达,从而促进干细胞向神经和软骨方向分化.
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钛表面微沟槽形貌对人牙龈纤维细胞黏着斑蛋白表达的影响
目的:比较不同尺寸微沟槽表面对人牙龈成纤维细胞(HGF)黏着斑蛋白vinculin表达的影响,作为选择种植体穿龈部分微沟槽尺寸的依据之一.方法:针对HGF大小,设计不同沟槽尺寸,利用光刻技术制作微沟槽形貌,沟槽宽度和间隔分别为15 μm、30 μm和60 μm,沟槽深度为5μm和10 μm,分组为T15/5、T15/10、T30/5、T30/10、T60/5和T60/10,光滑钛(TO)表面为对照组.通过免疫荧光、实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹比较vinculin基因和蛋白水平的表达差异.采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:免疫荧光显示,随着沟槽宽度增加,vinculin的绿色荧光点增多,mRNA和蛋白水平表达T60高,T15低.相同沟槽宽度下,深度改变对该蛋白的表达无显著影响.结论:微沟槽形貌有利于vinculin蛋白的表达,表达量随着沟槽的宽度增加而增加.就vinculin蛋白的表达而言,T60组沟槽更适合作为穿龈部分的沟槽尺寸.
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Lasp-1在食管鳞癌中的表达及其临床意义
食管鳞癌是我国常见的上消化道恶性肿瘤,且患者手术时多已处于进展期,预后往往不佳[1].主要原因是食管癌在很早就发生了浸润、转移.Lasp-1蛋白(LIM and SH3 domain protein 1)是新近被发现的一种细胞迁移运动中特殊的黏着斑蛋白,已证实在乳腺癌、卵巢癌、肝癌等恶性肿瘤中过度表达并和肿瘤的发生、侵袭和转移有密切关系[2-3].
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VCL在诊断前列腺癌及判断恶性程中的作用
目的 探讨黏着斑蛋白( vinculin,VCL)在诊断前列腺癌及判断恶性程度的作用.方法 应用基因芯片筛选出在前列腺癌与前列腺增生组织特异性表达的基因VCL,免疫组化技术检测VCL蛋白在前列腺癌与癌旁组织中的表达,结合VCL免疫组化评分和前列腺癌患者的临床病理参数进行分析.结果 通过免疫组化染色,我们发现VCL在癌旁组织中的表达明显强于前列腺癌组织(P=0.002),在前列腺癌并转移组织中的表达亦明显强于原位前列腺癌组织(P =0.003).VCL表达与前列腺癌患者血清PSA水平(P=0.011)、Gleason score(P =0.003)和肿瘤TNM分期(P=0.014)负相关,与前列腺癌转移(P=0.000)正相关,而与患者年龄(P=0.685)无明显相关.结论 VCL低表达与肿瘤的恶性程度相关,VCL缺失可能导致恶性肿瘤细胞迅速生长,可结合血清PSA水平对前列腺癌疑似患者进行早期诊断及初步判断肿瘤恶性程度.
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血管内皮损伤因子与职业性手臂振动病的关联性
目的 研究血管内皮损伤因子与职业性手臂振动病(HAVD)的关联性.方法 采用判断抽样方法,以23例男性HAVD患者为HAVD组,以61名男性手传振动作业工人为振动接触组,以64名男性非手传振动作业工人为对照组.采用酶联免疫吸附法检测3组人群血浆中肌球蛋白轻链2(MLC2)、内皮素-1(ET-1)和黏着斑蛋白(VCL)水平.采用Logistic回归分析筛选HAVD的关联指标,以之构建新的多变量模型指标(Y),通过受试者工作特征(ROC)曲线筛查判断HAVD的指标.结果 3组人群血浆中MLC2水平由高到低依次为HAVD组>振动接触组>对照组(P<0.05).HAVD组人群血浆中ET-1水平低于对照组(P<0.05),但与振动接触组比较,差异无统计学意义(P>0.05).3组人群血浆中VCL水平比较,差异无统计学意义(P>0.05).经Logistic回归分析排除年龄、工龄、吸烟、饮酒和自觉症状等混杂因素后,MLC2水平越高者,发生HAVD的风险越高(P<0.05);ET-1水平越低者,发生HAVD的风险越高(P<0.05).采用MLC2、ET-1判断HAVD的ROC曲线下面积(AZ)分别为0.820和0.524,采用以MLC2和ET-1构建的(Y)判断HAVD的AZ为0.799;AZ由高到低依次为MLC2>(Y)>ET-1(P<0.01).结论 HAVD患者血浆中MLC2与ET-1水平均与HAVD有关联;MLC2作为生物标志物筛查HAVD的效果优于ET-1.未发现VCL与HAVD有关联.
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血管内皮损伤相关蛋白研究进展
职业性手臂振动病(Hand-arm vibration disease,HAVD)是由于长期从事手传振动作业而引起以手部末梢循环和(或)手臂神经功能障碍为主的疾病,并能引起骨关节-肌肉功能的损伤[1],在我国已列为法定职业病.HAVD血管损伤方面的病理生理机制主要包括血管结构和功能的异常[2],其发生与血管壁(特别是内皮细胞)中的活性物质、神经递质、细胞因子、代谢酶等变化密切相关[3],机体在接触振动早期出现的微循环小血管损伤及后期出现的振动性白指(Vibration white finger,VWF)均与上述物质的改变有一定联系[4].本研究结合国内外文献,对与血管内皮损伤有关的蛋白的研究进展进行综述,探讨其在损伤血管中的表达及可能的作用机制,为HAVD的血管损伤机制研究和早期诊断提供依据和借鉴.
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纯钛表面接枝RGD肽对成骨细胞早期附着铺展生物学行为的影响
目的:评价RGD肽修饰的纯钛表面对原代大鼠成骨细胞早期生长附着铺展的影响.方法:利用分子自组装技术在纯钛表面引入活性氨基,化学接枝GYRCDS肽,间接免疫荧光染色技术观察黏附早期材料表面细胞骨架蛋白肌动蛋白(actin)和黏着斑蛋白细胞内黏着斑蛋白(vinculin)表达分布情况.结果:黏附肽修饰后的材料表面细胞早期附着更快,铺展形态更加充分.结论:采用分子自组装活性RGD肽修饰后的纯钛表面对成骨细胞早期附着铺展等生物学行为有明显改善.
