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酸性鞘磷脂酶在镉性肾损害中的变化
目的 观察酸性鞘磷脂酶(ASMase)在镉性肾损害过程中的活性变化及规律,探讨ASMase活性变化与镉性肾损害的关系.方法 60只SD雄性大鼠随机分为对照组和实验组,实验组动物腹腔注射1mg/kg Cd2,每天1次、每周5次,对照组注射等体积的生理盐水.染毒第0、1、3、5和7周末实验组、对照组每组各随机处死6只动物,收集血、尿及肾组织.ELISA法测尿β2微球蛋白的含量,高效液相色谱法测血、尿及肾组织中ASMase活性,制作病理切片观察肾组织病变情况.结果 随染毒时间的延长,肾组织有不同程度的病理改变.与对照组相比,实验组动物肾脏系数随染毒时间的延长而增加(P＜0.05);尿β2微球蛋白含量随染毒时间的延长而增加(P＜0.05);血、尿、肾组织匀浆上清液中ASMase活性从染毒第3周开始随染毒时间的延长而增加(P＜0.05).结论 镉性肾损害中ASMase活性随染毒时间的延长而增加.
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丁酸盐通过调控酸性鞘磷脂酶缓解烫伤诱导的T细胞损失的小鼠实验研究
目的 探讨丁酸盐调控烫伤诱导的T细胞变化的作用机制.方法 将小鼠随机分为3组:对照组(腹腔注射灭菌的生理盐水1.5 ml)、烫伤组(烫伤模型)和丁酸组(烫伤模型+腹腔注射1 g/kg的丁酸注射).采用高效液相色谱于烫伤模型建立后第1、2、3、4、5、6、7和8天检测对照组和烫伤组小鼠粪便中丁酸盐浓度.平板培养法检测3组中肠道菌群,试剂盒法检测酸性鞘磷脂酶(Asm)活性,流式细胞术检测T淋巴细胞各细胞亚型的表达.采用Ficoll-Paque梯度离心法从小鼠脾脏中分离T淋巴细胞.将细胞分为3组:对照组(不处理)、Asm抑制组(10μM的Asm抑制剂地昔帕明)和Asm抑制+丁酸组(Asm抑制剂+100μM的丁酸),检测各组细胞中Asm活性及T淋巴细胞各细胞亚型的表达.结果 与对照组相比,烫伤后第3、5、6、7和8天小鼠粪便中丁酸浓度均显著降低(P<0.05).丁酸盐可显著增加烫伤后小鼠粪便中乳酸杆菌属、双歧杆菌属、普拉梭菌和罗氏菌属的含量(P<0.05),降低硫酸盐还原菌的含量(P<0.05).丁酸盐可促进烫伤后Asm激活,增加烫伤后脾脏CD4 T细胞、CD4初始T细胞、CD8 T细胞及CD8初始T细胞的数量(P<0.05).Asm抑制组中Asm的活性显著低于对照组,而Asm抑制+丁酸组高于Asm抑制组(P<0.05).Asm抑制组CD4 T细胞、CD4初始T细胞、CD8 T细胞及CD8初始T细胞的数量均低于对照组,而Asm抑制+丁酸组高于Asm抑制组(P<0.05).结论 丁酸盐可通过激活Asm修复烫伤诱导的肠道菌群失衡,缓解烫伤诱导的T细胞丢失.
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酸性鞘磷脂酶和心血管疾病的研究进展
酸性鞘磷脂酶是鞘脂类代谢的一种关键酶,它通过水解鞘磷脂生成神经酰胺进而生成神经鞘氨醇和鞘氨醇-1-磷酸等一系列生物活性脂.酸性鞘磷脂酶可分为溶酶体鞘磷脂酶和分泌型鞘磷脂酶两种,两者在体内的分布位置和结构均有差异,可以产生不同的生物学作用.
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微生物来源酸性鞘磷脂酶抑制剂NF-0265A的研究
目的筛选信号转导相关疾病中重要靶点-酸性鞘磷脂酶抑制剂.方法使用ODS柱色谱,制备TLC和Sephadex LH-20色谱等方法进行化合物的分离纯化,利用紫外、质谱等理化分析以及核磁共振等分析方法进行结构解析,利用酸性和中性SMase的活性测定方法进行活性评价.结果从微生物代谢产物的菌种中,筛选得到一个活性化合物NF-0265A,其对酸性SMase的IC50为68.7 μnol·L-1.对中性SMase的活性测定的结果表明,此物质在200μmol·L-1的浓度下未见抑制作用,此化合物的化学结构与TAN-1446A的甲醇加成物相同.结论 NF-0265A为第一个微生物来源的酸性SMase特异性的抑制剂,该化合物在信号转导系统和免疫系统的活性尚未见报道.
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丹皮酚通过酸性鞘磷脂酶／神经酰胺通路改善血管紧张素Ⅱ所致动脉内皮功能障碍
目的:探讨丹皮酚(Paeonol,Pae)对血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,AngⅡ)所致动脉内皮功能障碍的保护作用及其机制.方法:采用实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blot检测酸性鞘磷脂酶(acid sphingomyelinase,ASM)基因及蛋白表达;采用免疫组织荧光检测血管环神经酰胺(ceramide,Cer)含量变化;采用血管环张力描记技术检测主动脉血管环的舒张功能;采用二氢乙啶荧光探针(dihydroethidium,DHE)检测血管环超氧阴离子(superoxide anion,O2-·)水平.结果:与对照组相比,AngⅡ孵育后主动脉对乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)的舒张反应显著降低,Pae与AngⅡ共孵育则无明显改变;AngⅡ及Pae孵育后,动脉对硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)的舒张反应均无明显变化;AngⅡ孵育可增高动脉环O2-·水平,这一反应被Pae明显抑制;与对照组相比,AngⅡ孵育动脉ASM mRNA水平无明显改变,但蛋白表达显著增加,Cer含量显著增多,Pae与AngⅡ共孵育动脉ASM蛋白及Cer水平与对照组相比均无明显改变;采用神经酰胺酶抑制剂N-oleoylethanolamine (OEA)增加动脉Cer含量后,Pae降低动脉O2-·水平以及增强Ach舒张反应的效应被显著抑制.结论:Pae通过ASM/Cer通路改善AngⅡ所致动脉氧化应激增强和内皮功能障碍.
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高通量检测戈谢病和尼曼匹克病A/B型的超高效液相色谱-串联质谱法的建立
目的 建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术测定干血滤纸片中酸性葡萄糖脑苷脂酶(ABG)和酸性鞘磷脂酶(ASM)活性的方法.方法 将干血滤纸片样本提取液与酶作用底物和内标的混合溶液孵育过夜,反应液经萃取、氮气吹干及复溶后采用UPLC-MS/MS检测产物浓度及内标,计算酶活性.评价该方法的线性、精密度和准确性.结果 UPLC-MS/MS测定ABG和ASM活性的批内、批间精密度为3.6％～8.4％,批内、批间准确度为101％～ 115％.正常新生儿中ABG和ASM活性呈偏态分布(P＜0.01),以第0.5～ 99.5百分位数法确定ABG及ASM活性的参考区间分别为5.52～49.50和2.02～ 15.44 μmol·L-1·h-1.经临床验证,UPLC-MS/MS能有效检出戈谢病(GD)或尼曼匹克病A/B型(NPA/B)患儿,检出率为100％.结论 UPLC-MS/MS能同时测定干血滤纸片中ABG、ASM活性.该法快速、特异,可用于新生儿中GD、NPA/B的高通量筛查及临床检测.
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酸性鞘磷脂酶在非酒精性脂肪性肝病中的作用及应用前景
酸性鞘磷脂酶(ASMase)与多种肝脏疾病的发病机制相关.近年来研究发现,ASMase在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者及动物肝脏中表达增加,且可导致氧化应激、脂质沉积、脂毒性、炎性反应、纤维化等改变.此文综述了ASMase在NAFLD发病机制中的作用,并评价其在NAFLD的预测、诊断、靶向治疗以及预后判断方面的潜在应用价值.
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酸性鞘磷脂酶对肿瘤生长的影响及其应用价值
酸性鞘磷脂酶( acid sphingomyelinase,aSMase)是鞘酯类代谢中一种重要的酶.关于aSMase在肿瘤中作用的研究还较少,但已发表的研究提示其与肿瘤的发生和发展有一定的关系.本文对aSMase的激活机制、在肿瘤生长中的作用及其应用价值进行了综述.
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酸性鞘磷脂酶/神经酰胺通路在疾病发生发展中作用机制的研究进展
酸性鞘磷脂酶/神经酰胺通路可介导细胞凋亡、炎症和自噬等多种细胞活动,与心脑血管疾病、代谢类疾病、肺部和肝部疾病以及神经系统疾病等多种疾病的发生、发展密切相关.酸性鞘磷脂酶现已成为多种疾病的临床生物标记物和潜在的治疗靶点.综述酸性鞘磷脂酶/神经酰胺通路在各种疾病中的生物学功能和作用机制新研究进展,旨在为相关疾病的治疗提供新思路.
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百草枯所致小鼠肺纤维化时肺组织酸性鞘磷脂酶表达上调
目的:观察百草枯所致C57BL/6小鼠肺纤维化时肺组织酸性鞘磷脂酶(acid sphingomyelinase,ASM)的表达变化,初步探讨ASM在百草枯所致肺纤维化发生发展中的潜在病理意义.方法:将20只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和百草枯组,百草枯组动物腹腔注射20 mg/kg百草枯,对照组动物注射等体积生理盐水,单次注射百草枯21 d后麻醉动物进行支气管肺泡灌洗,取支气管肺泡灌洗液(bronchial alveolar lavage fluid,BALF)检测灌洗液中细胞总数、总蛋白浓度,ELISA法检测BALF中IL-6和TNF-α水平;取肺组织,HE染色和Masson染色观察组织形态学变化和胶原沉积,TUNEL染色和Caspase-3活性检测细胞凋亡情况,DHE染色检测活性氧(reactive oxtgen species,ROS)水平,Real time PCR、免疫组织化学、Western Blot检测肺组织中ASM mRNA 和蛋白表达.结果:用百草枯处理后,C57BL/6 小鼠肺组织肺泡排列紊乱、部分肺泡出现塌陷、肺泡间隔增厚、炎性细胞浸润,肺组织中出现大量胶原沉积.与对照组相比,百草枯组小鼠BALF中细胞总数增多(P＜0.01),总蛋白浓度增加(P＜0.01),IL-6和TNF-α水平升高(P＜0.05);肺组织中TUNEL染色阳性细胞数增多(P＜0.01),Caspase-3活性增加(P＜0.05),ROS水平升高,ASM mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05).结论:ASM可能参与百草枯所致肺纤维化的病理生理过程,其具体作用机制有待进一步研究证实.
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地昔帕明对兔动脉斑块细胞凋亡及内质网应激的影响
目的 观察地昔帕明(DES)对动脉粥样硬化(AS)模型兔斑块内细胞凋亡及内质网应激的影响.方法 腹主动脉球囊损伤及高脂饲料喂养12周建立兔AS模型,后4周随机分为AS和AS+DES组,同时设立普通饲料喂养的正常对照(NC)组和DES组,DES剂量为4 mg·kg-1·d-1,对照组以生理盐水代替灌胃治疗.12周末,观察各组兔血清血脂水平,UPLC法测定血浆及主动脉酸性鞘磷脂酶(ASM)和神经酰胺含量,TUNEL染色测定凋亡细胞,Western blot检测GRP78和CHOP蛋白表达.结果 DES干预对正常兔和AS模型兔的TG、TC、HDL-C、LDL-C、ox-LDL水平无明显影响,但可降低血浆和主动脉ASM、神经酰胺含量及腹主动脉斑块凋亡细胞数量,下调斑块组织的GRP78和CHOP蛋白表达.结论 DES可通过抑制ASM活性,下调神经酰胺水平,改善内质网应激,从而减少AS斑块内的细胞凋亡,缓解AS斑块形成.
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酸性鞘磷脂酶在环境健康中的潜在作用
酸性鞘磷脂酶(acid sphingomyelinase,ASM)是一种通过水解鞘磷脂产生酰胺的重要溶酶体酶.近的调查结果显示,在酰胺诱导细胞凋亡的启动以及许多常见疾病(如心血管疾病,糖尿病,肺部疾病,神经系统疾病)的病理生理过程中,ASM都起着重要介导和调节作用.其他研究也表明,活性氧和活性氮的产生,以及环境和职业应激所致的炎症反应都可以激活ASM.ASM的激活会产生大量的酰胺,并引起细胞膜上的酰胺分布异常,这可能导致相应组织和器官(包括肺,肝,肾和神经系统)的损伤.本文综述ASM的基础生物学,重点讨论ASM在环境应激反应过程中的调控和作用.笔者认为ASM激活是环境健康中的一个重要因素,基于ASM的疗法对预防和治疗相应环境因素诱导的组织损伤可能有重要作用.
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酸性鞘磷脂酶在急性肺损伤中的作用
酸性鞘磷脂酶与多种肺部疾病的发病机制相关.急性肺损伤是一种与血氧不足、弥漫性肺泡损伤、炎症以及肺功能缺失有关的危及生命的疾病.炎症性肺部疾病的特征是酸性鞘磷脂酶活性增强导致神经酰胺产量增加,进而使血管渗透性增强,细胞凋亡增多以及肺表面活性剂改变.酸性鞘磷脂酶能够通过增加内皮通透性进而加速急性肺损伤的发病过程.本文对酸性鞘磷脂酶在急性肺损伤中的作用及其靶向治疗的应用价值进行了综述.
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白藜芦醇对糖尿病大鼠心功能障碍及酸性鞘磷脂酶-神经酰胺通路的影响
目的:观察白藜芦醇(RSV)对糖尿病大鼠心功能障碍的影响并探讨其与酸性鞘磷脂酶-神经酰胺通路的关系.方法:通过一次性腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ;30 mg/kg)联合高脂饮食饲养12周构建2型糖尿病(T2DM)大鼠模型.实验分为正常对照(control)组、T2DM组、T2DM+RSV组(灌胃给予糖尿病大鼠白藜芦醇100 mg·kg-1·d-1)和RSV组(正常大鼠灌胃给予同等容量RSV),共灌胃12周,每周称量体重并调整给药剂量.实验结束后,釆用小动物M型超声检测模型大鼠心脏功能、形态和结构的变化;颈动脉插管检测血流动力学变化;生化方法检测血清中糖、脂水平以及心脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;油红O染色和天狼星红染色分别观察心脏组织中脂肪堆积和心肌纤维化情况;高效液相质谱法检测心脏组织中神经酰胺(ce-ramide)含量;Western blot检测酸性鞘磷脂酶(ASMase)和过氧化物酶增殖体激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)的蛋白表达.结果:T2DM组大鼠空腹血糖、甘油三酯、胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇水平均较control组显著升高,心功能显著降低(P<0.05);T2DM组大鼠心脏组织中脂肪堆积、MDA含量显著增加(P<0.05),SOD活性、ATP水平和PGC-1α蛋白表达均显著降低(P<0.05),且出现明显心肌纤维化;给予白藜芦醇治疗12周可显著改善以上指标的异常变化,同时,显著下调糖尿病大鼠升高的心肌ASMase蛋白和ceramide水平.结论:白藜芦醇可显著改善糖尿病诱导的大鼠心功能障碍和心肌纤维化,其机制可能与抑制ASMase-ceramide通路有关.
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酸性鞘磷脂酶在酒精性肝病肝纤维化组织中的表达
目的 探讨酒精性肝病肝纤维化大鼠组织中酸性鞘磷脂酶的表达情况.方法 用乙醇灌胃加高脂饮食诱导大鼠肝纤维化模型.将26只Wistar大鼠分为2组:正常对照组6只、模型组20只.用光学显微镜、电子显微镜及Masson染色观察肝组织病理学变化,应用免疫组织化学、Real-timePCR、Western blot等方法检测肝组织中酸性鞘磷脂酶的表达.用SPSS软件分析,组间均数比较用Student-t检验 结果 肝纤维化大鼠肝脏组织中酸性鞘磷脂酶的mRNA(1.1±0.6比2.2±1.9)和蛋白质(1.00±0.36比1.80±1.26)水平均比正常组明显增加差异均有统计学意义.结论 酸性鞘磷脂酶在酒精性肝纤维化发展中起到一定作用.
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神经酰胺与抑郁症的相关性研究进展
抑郁症病因至今尚未完全阐明,越来越多的证据表明神经酰胺参与细胞存活、增殖、分化、凋亡等基础生命过程,突破以往惰性脂质的观点,目前神经酰胺作为活跃的第二信使引起广泛关注,其可能是联络抑郁症中枢脑功能损伤与外周炎症、氧化应激之间的重要环节.然而,神经酰胺与抑郁症之间的确切关联机制尚不明确,本文通过对神经酰胺与抑郁症相关的研究进展进行综述,为抑郁症病因的探索提供新思路.
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酸性鞘磷脂酶对免疫细胞的调节及与疾病的关系
酸性鞘磷脂酶(ASM)是一种鞘磷脂酶家族,在多种细胞内表达.ASM不仅介导了溶酶体代谢作用,还参与膜结构的调节和信号转导.其在调节各种生物学进程如细胞凋亡、细胞增殖、细胞代谢和疾病发生中发挥重要作用.ASM参与诱导免疫细胞分化、激活免疫细胞,从而发挥促炎效应;参与免疫细胞表面分子信号活化、启动凋亡过程,从而靶向治疗肿瘤.本文将从ASM介导的信号转导、免疫细胞分化调节和对疾病的影响等方面对ASM与免疫相关的作用进行综述.
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血管紧张素Ⅱ经酸性鞘磷脂酶/神经酰胺通路致动脉内皮功能障碍的作用
目的 探讨酸性鞘磷脂酶(acid sphingomyelinase,ASM)/神经酰胺(ceramide,Cer)通路在血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)致动脉内皮功能障碍中的作用和机制.方法 针对对照组,低、中、高剂量AngⅡ组及ASM抑制剂地昔帕明(desipramine,Dpm)组,采用Western blot检测法、实时定量PCR和免疫荧光化学方法检测ASM、Cer、总内皮型一氧化氮合酶(total endothelial nitric oxide synthase,t-eNOS)和磷酸化eNOS(phosphorylated eNOS,p-eNOS)含量变化;采用血管环张力描记技术检测主动脉血管环的舒张功能;采用二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)荧光探针检测血管环超氧阴离子(superoxide anion,O2-·)水平.结果 与对照组相比,AngⅡ孵育后主动脉对乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)的舒张反应显著降低(P＜0.05),呈剂量依赖性,对硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)的舒张反应无明显改变;AngⅡ孵育组动脉ASM表达显著增加(P＜0.05),Cer含量显著增多(P＜0.05);ASM抑制剂Dpm可显著抑制AngⅡ所致ASM和Cer改变(P＜0.05),亦可使动脉对Ach的舒张反应恢复正常;AngⅡ可显著降低动脉p-eNOS含量(P＜0.05),增加02-·水平(P＜0.05),Dpm则可使p-eNOS增加(P＜0.05),降低O2-· (P＜0.05).结论 ASM/Cer可能通过抑制eNOS磷酸化并增加O2-·含量介导AngⅡI所致动脉内皮功能障碍.
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皮肤屏障结构脂质研究进展-脂质代谢相关酶
角质层细胞间脂质做为构成皮肤屏障的主要结构脂质成分,其含量的降低或结构的改变均会影响皮肤 屏障功能的稳定.脂质代谢相关酶在脂质的合成、水解和分泌中起到了重要作用.本文综述了多种与脂质代谢相关的酶,如激肽释放酶(kallikreins,KLKs)、脂肪酸延长酶(elongation of very long chain fatty acids,ELOVL)、β-葡糖脑苷脂酶(β-glucocerebrosidase,GCase)、酸性鞘磷脂酶(acidic sphingomyclinase,aSMase)、鞘磷脂脱酰酶等,同时也对酶与皮肤屏障之间的密切关系进行了阐述,以期为开发针对维护和修复皮肤屏障功能的护肤产品和洗涤用品等提供理论基础.
