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益气扶正复方联合依维莫司对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-468的增殖抑制作用及其对Akt/mTOR信号通路的影响

李甜;周钱梅;张卫红

摘要: 目的 探讨益气扶正复方(简称复方)联合依维莫司对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-468细胞的增殖抑制作用及Akt/mTOR信号通路的影响.方法 高效液相色谱法(HPLC)制备益气扶正复方药物,以MTT比色法分别检测10,20,40,80,160 mg· mL-1复方药物及1,10,100,1000 nmol· L-1依维莫司(Everolimus) 12,24,48 h对MDA-MB-468细胞的增殖抑制作用;分别运用IC50浓度的复方40 mg· mL-1与Everolimus 100 nmol· L-1单独及联合干预MDA-MB-468乳腺癌细胞48 h,观察其对细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测其对细胞周期和凋亡的影响;Western blot法检测其对细胞Akt/mTOR信号通路的影响.结果 复方及Everolimus均呈剂量、时间依赖性地抑制了MDA-MB-468乳腺癌细胞增殖,选择IC50浓度的复方40 mg· mL-1与Everolimus 100 nmol· L-1单独及联合干预细胞,联合用药组显著抑制了MDA-MB-468乳腺癌细胞的增殖,同时联合用药组抑制了p-mTOR和p-Akt的活性,提高了PTEN的表达.结论 复方与Everolimus均能抑制MDA-MB-468乳腺癌细胞增殖,两药联用效果更为显著,其作用机制可能与复方与依维莫斯联用抑制了p-mTOR和p-Akt的活性,提高了PTEN的表达有关.

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    目的:利用Box-Behnken响应面法对疏风定喘颗粒黄芩组的提取工艺进行优化.方法:以黄芩苷、白花前胡甲素和固含转移率为考察指标,在单因素试验的基础上,考察乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数4个因素对提取工艺的影响,再结合Box-Behnken中心组合设计试验,进一步优化醇提工艺参数.结果:单因素试验结合Box-Behnken响应面法优选黄芩组的佳工艺为:8倍量70%乙醇,提取两次,每次1.0 h,在此条件下黄芩苷、白花前胡甲素的转移率分别达到89.57%、87.90%,固含转移率为32.35%.结论:单因素试验结合响应面法可用于优化疏风定喘颗粒黄芩组的提取工艺,该工艺稳定可行,为工业化生产提供科学的依据.

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    目的:通过吸波面积法对组分中药白花蛇舌草肠溶胶囊中多成分体外释放度进行测定,探讨中药复杂体系多成分体外释放度测定的可行性.方法:配制槲皮素、齐墩果酸、豆甾醇混合对照品溶液,经紫外-可见分光光度法在200-600 nm下进行全波长扫描,通过Origin软件拟合并计算吸光度-波长曲线下面积(简称吸波面积,Area under the Absorbance-wavelength Curve,AUAWC),采用吸波面积法对组分中药白花蛇舌草肠溶胶囊中混合总药物的释放量进行测定.同时,采用高效液相色谱法分别测定槲皮素、齐墩果酸、豆甾醇各单一成分的体外释放特性,并对两种方法的结果进行比较和分析.结果:吸波面积法和高效液相色谱法测得组分中药白花蛇舌草肠溶胶囊中混合总药物、槲皮素、齐墩果酸、豆甾醇在酸性介质0.1 mol·L-盐酸中2h胶囊壳无破损,稳定性良好,不释放;在0.2 mol· L-1磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中120 min释药完全,累积释放百分率分别为99.47%、90.87%、95.65%、98.49%,混合总药物不同时间的累积释放量与槲皮素、齐墩果酸、豆甾醇三者药物累积释放量之和接近.结论:吸波面积法用于组分中药白花蛇舌草肠溶的体外释放度方法科学、可行、方便,可用于中药复杂体系多成分体外释放度的测试,其与高效液相色谱法的联合使用为西药复方、组分中药以及复杂体系的中药复方制剂的体内外相关性研究提供了科学思路和可行途径.

  • 人参皂苷对昼夜颠倒应激大鼠能量代谢干预作用的代谢组学研究

    作者:范自全;周明眉;邢丽娜;吴建兵;王晓艳;魏世道;恽祥惠;贾伟

    目的:利用代谢组学技术研究光照改变造成昼夜颠倒应激对大鼠能量代谢的影响,同时评价人参皂苷的干预作用.方法:大鼠24只分为正常对照组、昼夜颠倒模型组和人参皂苷干预组(100mg·kg-1),适应1周后,对模型组和人参皂苷干预光照进行日/夜颠倒8天,称取实验前及开始后每天各组大鼠体重,分别称取实验前及第8天各组白天及夜晚食量.第8天结束后,取大鼠血清TMCS衍生后,进行GC-MS分析,采用偏小二乘判别分析法研究模型组与正常组之间的代谢物组差异,评价人参皂苷的干预作用.结果:昼夜颠倒应激对大鼠体重及食量均有促进升高作用(P<0.05),且食量与正常组相比呈昼夜颠倒趋势;人参皂苷一定程度上抑制应激作用的升高趋势.代谢组学研究表明,昼夜颠倒应激与机体能量代谢、蛋白质吸收与降解、脂肪酸代谢、胆固醇代谢等途径改变有关,人参皂苷具有改善作用.结论:人参皂苷可改善昼夜颠倒造成的代谢物质改变,其机制可能是通过调节兴奋性和抑制性神经递质等上游代谢通路,继而改变下游的物质变化.

  • 大孔吸附柱色谱法优选接骨木的纯化工艺

    作者:韩华;殷鑫;杨炳友;杨柳;夏永刚;王秋红;匡海学

    目的:优选接骨木的纯化工艺。方法:以莫诺苷为指标,采用不同型号大孔吸附树脂优选接骨木根皮乙醇提取物的佳纯化工艺。上样量小于1、250(莫诺苷、树脂)的接骨木醇提取物,水洗脱通过AB-8型大孔吸附柱色谱,弃去20倍柱体积的水洗脱液,以10%乙醇完全洗脱,洗脱液,浓缩,冷冻干燥,即得接骨木总苷。结果:总苷中莫诺苷含量大于50%。结论:该提取工艺简单、可靠、重复性好,适用于工业生产。

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