首页 > 文献资料
-
腺病毒介导的cox-2反义RNA对食管癌细胞株DNA和蛋白质合成的影响
目的:构建表达人cox-2反义RNA的腺病毒载体,研究其对人食管癌细胞株DNA和蛋白质合成的影响.方法:把人cox-2的cDNA片段反向克隆于穿梭质粒pHCMVSPlA的CMV启动子之下,获得pAd-AShcox-2,通过脂质体与pJM17共转染293细胞,经同源重组产生编码cox-2反义RNA的重组腺病毒--Ad-AShcox-2.经PCR的方法鉴定为阳性克隆并大量扩增、纯化,转染食管癌细胞EC9706,采用生长细胞计数,免疫细胞化学、3H-TdR、3H-Leucine掺入法,研究对食管癌细胞生长、DNA及蛋白质合成的影响.结果:成功构建并扩增、纯化得到编码cox-2反义RNA的重组腺病毒Ad-AShcox-2,滴度达0.86×1012 PFU/ml;Ad-AShcox-2感染肿瘤细胞后,cox-2表达水平明显降低,3H-TdR、3H-Leucine掺入量明显减少,与对照组在48h、72h、96h比较有显著性差异(q48h=16.36及16.36,q72 h=39.07及19.90,q96 h＝54.80及30.33;P＜0.001);同时发现食管癌细胞的生长明显受抑制.结论:表达cox-2反义RNA重组腺病毒感染人食管癌细胞后可降低cox-2表达水平,使DNA合成降低、蛋白质合成减少,且抑制食管癌细胞生长、增生,提示抑制coX--2的表达可能是治疗食管癌的一种新途经.
-
N-乙酰-L-半胱氨酸对矽肺模型大鼠肺泡巨噬细胞基质金属蛋白酶2、9表达的影响
在SiO2粉尘引起的矽肺纤维化过程中,肺泡巨噬细胞具有重要作用.基质金属蛋白酶(MMP)是降解细胞外基质的主要酶类.肺泡巨噬细胞分泌的MMP-2和MMP-9能够降解肺泡基膜,从而启动肺间质纤维化[1].目前,阻断肺泡巨噬细胞氧化损伤对其分泌MMPs影响的研究尚不多见.本研究以N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)为抗氧化剂,应用免疫细胞化学和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,探讨NAC对矽肺纤维化模型大鼠肺泡巨噬细胞MMP-2和MMP-9表达的影响.
-
银杏叶制剂对低氧肺动脉平滑肌蛋白激酶Ca表达的影响
银杏叶提取物可明显抑制低氧性肺动脉高压的发生并阻止低氧介导的右心室肥厚的形成[1-3],但机制尚未明确.我们应用原位杂交、免疫细胞化学及四甲基偶氮唑盐(MTT)微量比色法等技术观察了银杏叶制剂(BN52021)对低氧肺动脉平滑肌细胞(PA SMC)增殖速率及蛋白激酶C(PKC)α mRNA表达的影响,以探讨银杏叶制剂治疗低氧性肺动脉高压的机制.
-
Wnt信号通路分子在大鼠神经干细胞分化过程中的表达
目的：观察Wnt信号通路主要分子[β-连环蛋白（β-catenin）和糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）]在神经干细胞（NSCs）体系的表达及其在增殖和分化过程中的变化，探讨其在神经干细胞分化中可能的调控作用。方法采用原代培养方法，自14～16d大鼠胚胎大脑皮质获得含大量细胞团的NSCs体系。应用含10%胎牛血清培养液诱导NSCs分化。Western印迹检测NSCs在加入胎牛血清12，24，48和72h后，β-catenin与GSK-3β在分化过程中的动态变化。结果免疫细胞化学染色显示NSCs细胞团及散在的单个细胞多呈巢蛋白（nestin）阳性，显示NSCs分化过程中两者存在持续表达，β-catenin分子表达呈现逐渐减少趋势，而GSK-3β分子表达则呈现逐渐增加趋势。结论提示Wnt信号通路与NSCs的增殖和分化过程密切相关，呈现出由活跃到逐步抑制的过程，为研究Wnt信号通路参与NSCs增殖分化调控的机制提供了载体。
-
去分化来源表皮干细胞与在体表皮干细胞之间的差异分析
目的:比较去分化来源的表皮干细胞与在体表皮干细胞之间的异同点.方法:采用碱性成纤维细胞诱导因子(bFGF)诱导表皮细胞去分化形成表皮干细胞;由人包皮分离、培养在体表皮干细胞.采用免疫细胞化学染色法、流式细胞检测技术、细胞染色体核型检测技术及逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR)观察去分化来源的表皮干细胞与在体表皮干细胞之间细胞表面标志蛋白表达、细胞亚群及染色体核型等方面的差异.结果:免疫细胞化学染色结果表明,去分化来源的表皮干细胞能够表达表皮干细胞及其亚群特异性的表面标志蛋白,如β1整合素、角蛋白19(CK19)、CK14等,而CK10的表达为阴性.流式细胞技术检测结果显示去分化来源的表皮干细胞及在体表皮干细胞中α6+CD71-、α6+CD71+及CD71表达阳性的细胞亚群分别占被检测细胞总数的22.8%、68.14%、0及45.39%、33.11%、0.02%.细胞染色体核型检测分析结果显示去分化来源的表皮干细胞与在体表皮干细胞的染色体均为23对、46条,核型正常.此外,RT-PCR检测结果表明去分化来源的表皮干细胞与在体表皮干细胞中β1整合素、CK19、CK14及CK10的mRNA表达水平差异无显著性.结论:去分化来源的表皮干细胞和在体表皮干细胞之间存在着细胞亚群的分布差异,提示其具有更强的增殖能力;二者在细胞核型和表面标志蛋白表达等方面具有相似性.去分化来源的表皮干细胞可以作为表皮干细胞的替代细胞应用于皮肤重建与再生的相关研究.
-
儿童眼肌型重症肌无力外周血单个核细胞中糖皮质激素受体的表达分析
目的 重症肌无力(myasthenia gravis,MG)是一种自身免疫性疾病(autoimmunity diseases,AID),在其他AID研究中发现糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)表达有异常,故有必要探讨儿童MG中GR表达情况.方法 对新发MG患儿43例及健康儿童19例留取新鲜血液,分离外周血单个核细胞(PBMC)选用RT-PCR法检测GRα、GRβ亚型mRNA表达水平;用免疫细胞化学法观察两组患儿PBMC中GRα、GRβ阳性细胞比例.结果 MG患儿GRα(0.639±0.253)、GRβ(0.508±0.153)阳性细胞比例较对照组(分别为0.344±0.097;0.315±0.127)明显升高(P<0.05),MG患儿GRα(0.698±0.155)、GRβ(0.587±0.236)mRNA表达水平较对照组(分别0.521±0.106;0.471±0.161)显著升高(P<0.05).结论 MG患儿PBMC中GRα、GRβ表达增高可能与GR功能异常有关,这可导致GR释放糖皮质激素(glucocorticoid,GC)受限,故GC的有效利用率下降,从而引起机体内环境紊乱.
-
大鼠脊髓背根神经节神经元的纯化培养
目的:建立一种简单、稳定、高效的大鼠脊髓背根神经节神经元原代纯化培养方法.方法:取新生SD大鼠的脊髓背根神经节,采用胰蛋白酶消化法,制成单细胞悬液,加入阿糖胞苷以纯化细胞,培养于含10%胎牛血清与重组人胶质细胞源性神经营养因子的DF12培养基中,观察神经元生长状况,用细胞计数和神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学染色测定细胞纯度.结果:培养的脊髓背根神经节神经元生长状态正常,有神经突起生长和标记蛋白的表达,可达到90%左右的纯度.结论:本培养方法简单、稳定、高效,为对神经元进一步的深入研究提供了实验模型.
-
单纯Ⅱ型胶原酶消化法分离、培养人退变椎间盘髓核细胞的形态学观察
目的:探讨单纯Ⅱ型胶原酶消化法体外培养扩增人退变椎间盘髓核细胞的可行性.方法:收集20例人退变椎间盘髓核,单纯Ⅱ型胶原酶消化分离出髓核细胞并连续培养传代,倒置相差显微镜和HE染色观察细胞形态学变化,甲苯胺蓝染色检测髓核细胞内聚集蛋白聚糖的表达,免疫细胞化学法行Ⅱ型胶原染色,观察髓核细胞的类软骨表型表达情况.结果:单纯Ⅱ型胶原酶消化法可较好的分离培养人退变椎间盘髓核细胞,20例人退变椎间盘髓核,培养成功16例;原代髓核细胞平均7d贴壁,呈类圆形或多角形,P1代髓核细胞平均12h贴壁,呈大梭形或多角形,两代细胞融合95%所需时间分别为30d和7d,差异有统计学意义(P＜0.01);聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原主要表达于原代和P1代髓核细胞浆内,被甲苯胺蓝染成天蓝色,免疫细胞化学染色主要表现为黄褐色沉淀,两代间聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的表达无统计学差异(P＞0.05).结论:单纯Ⅱ型胶原酶消化法可简化髓核细胞分离步骤,提高培养效率;传一代后髓核细胞增殖速率提高,但仍维持类软骨表型,表达聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原.
-
大鼠小肝细胞移植对急性肝损伤的影响
目的 探讨小肝细胞(small heptocytes,SHCs)移植对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)+2/3肝切(partial hepatectomy,PH)所致急性肝损伤的影响.方法 选择健康SD大鼠20只,饲喂含二乙基亚硝胺(DEN)饲料建立SD大鼠SHCs增殖模型.分离、培养、鉴定(电镜、免疫细胞化学)原代SHCs.SHCs行PKH26膜荧光染色.将实验用同一近交系SD大鼠30只随机平均分成空白对照组(B)、损伤造模组(M)和SHCs移植组(T).B组腹腔注射生理盐水.M组、T组腹腔注射CCk.24 h后戊巴比妥腹腔麻醉,消毒开腹.M、T组行2/3肝切,B、M组门静脉注入生理盐水,T组门静脉注入经膜荧光标记SHCs悬液.4周后.采血测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),并取病理标本做冰冻切片荧光显微镜下观察及HE染色普通光镜下观察.结果 电镜下观察可见SHCs表面少量短而小的微绒毛突起,核浆比例高.呈现未分化细胞的形态.免疫细胞化学观察SHCs胞质AFP、CK-19染色呈棕黄色阳性信号.SHCs移植可以显著降低CCl4+2/3PH致肝损伤血清ALT、AST水平,可以明显改善CCl4+2/3PH致肝损伤肝脏病理改变.T组冰冻切片荧光显微镜下可以观察到由SHCs分化的肝细胞形成的肝板结构.结论 SHCs移植对CCl4+2/3PH所致急性肝损伤有一定治疗作用.
-
脱氧氟尿苷用于提高人卵巢癌细胞株对顺铂敏感性的研究
肿瘤细胞减灭术及术后化学药物治疗(化疗)是目前治疗卵巢癌的主要手段,以铂类为基础的联合化疗明显改善了晚期卵巢癌患者的治疗效果,但耐药性的产生严重影响其化疗效果.本研究采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、免疫细胞化学链霉菌抗生物素-过氧化物酶连接(SP)法和流式细胞术等方法,分析了脱氧氟尿苷(FUDR)作用后卵巢癌细胞株CAOV3对顺铂敏感性的变化,并初步探讨其机理,为临床制定有效的联合化疗方案提供理论依据.
-
p16/微小染色体维持蛋白2和p16/Ki-67双重染色对高危型人乳头瘤病毒呈阳性妇女的宫颈病变筛查
目的 探讨p16/微小染色体维持蛋白(MCM)2和p16/Ki-67免疫组织化学双重染色,对高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)呈阳性妇女宫颈病变的筛查效果.方法 选择2015年4月至10月,于四川省成都市双流区招募的符合本研究纳入、排除标准,并且于四川大学华西第二医院进行HPV DNA检测,诊断为HR-HPV呈阳性的62例妇女为研究对象.采集这62例HR-HPV呈阳性受试者的宫颈脱落细胞学标本,均采取新柏薄层液基细胞学检查(TCT)及p16/MCM2、p16/Ki-67免疫细胞化学双重染色.对于HPV-16、-18呈阳性,或其他12种HR-HPV(HPV-31、-33、-35、-39、-45、-51、-52、-56、-58、-59、-66、-68)呈阳性,并且TCT结果为≥未明确意义的非典型鳞状细胞(≥ASCUS)的受试者,均进行阴道镜检查,若阴道镜检查结果异常,再进行宫颈活组织检查.统计学比较p16/MCM2、p16/Ki-67双重染色与TCT,对HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变筛查的敏感度、特异度、受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC),评估p16/MCM2和p16/Ki-67双重染色对HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变筛查的有效性.本研究经过四川大学医学伦理委员会批准(批准编号:K2014018).所有受试者均同意参加宫颈癌筛查,并签署临床研究知情同意书.结果 ①纳入本研究的62例HR-HPV呈阳性受试者中,p16/Ki-67、p16/MCM2阳性率,均随宫颈病变程度增高而呈上升趋势(χ2=21.947,P<0.001;χ2=5.268,P=0.022).TCT阳性率与宫颈病变程度无显著相关性(χ2=1.850,P=0.174).②HPV-16、-18呈阳性受试者的p16/Ki-67阳性率为69.2%(9/13),显著高于其他12种HR-HPV呈阳性受试者的36.7%(18/49),并且差异有统计学意义(χ2=4.413,P=0.036).HPV-16、-18呈阳性受试者与其他12种HR-HPV呈阳性受试者的p16/MCM2阳性率相比较,差异无统计学意义(χ2=2.510,P=0.113).③TCT及p16/Ki-67、p16/MCM2双重染色,对纳入本研究的62例HR-HPV呈阳性受试者的宫颈病变筛查的敏感度分别为47.1%(8/17)、94.1%(16/17)、88.2%(15/17),特异度分别为68.9%(31/45)、75.6%(34/45)、42.2%(19/45).p16/Ki-67双重染色对HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变筛查的ROC-AUC为0.848,显著大于TCT的0.580,二者比较,差异有统计学意义(Z=2.736,P=0.006).p16/MCM2双重染色和TCT对HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变筛查的ROC-AUC相比较,差异无统计学意义(Z=0.651,P=0.515).结论 p16/Ki-67双重染色对HR-HPV呈阳性妇女宫颈病变筛查的敏感度和特异度,均高于TCT.该方法操作简单,结果容易判读,有望成为医疗资源严重短缺地区的HR-HPV呈阳性妇女阴道镜转诊分流的有效方法.p16/MCM2双重染色对HR-HPV呈阳性妇女宫颈病变的筛查效果,有待进一步研究、证实.
-
p27kip1的过表达对肾癌细胞增殖及凋亡的影响
目的:研究外源性p27kip1基因对肾癌细胞周期、细胞凋亡及增殖的影响.方法:将含p27cDNA的质粒在脂质体介导下在体外转染肾癌GRC-1细胞,Western Blot、FCM及MTT检测分析外源性p27kip1蛋白在细胞内的表达,观察其对细胞周期、凋亡及细胞增殖的影响.结果:体外转染GRC-1细胞48 h后,p27蛋白在p27kip1转染后的GRC-1细胞中高表达.FCM检测表明,细胞停滞于G1期,实验组G1期细胞占66.9%,并出现亚G1凋亡峰;而空白对照组和转染空载体组G1期细胞分别为32.2%和33.8%.MTT法检测表明,转染p27cDNA后,实验组细胞增殖明显受抑.结论:p27kip1基因在体外转染GRC-1细胞并过表达p27kip1蛋白,抑制细胞由G1期向S期过渡,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡.
关键词： 肾肿瘤/病理学 细胞周期 细胞周期抑制蛋白类/生物合成 免疫细胞化学 转染 -
胃癌组织中H-ras和VEGF的表达与血管生成的关系及其临床意义
目的:探讨胃癌组织H-ras表达与血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达和血管生成的关系.方法:应用免疫组织化学ABC法对60例胃癌组织进行H-ras、VEGF表达和微血管密度(microvascular density,MVD)检测.结果:MVD与胃癌病灶的大小、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期密切相关,t值分别为-2.18、-3.46、-4.52和-3.85,P值分别为0.040、0.001、0.001和0.004;VEGF亦与胃癌病灶的大小、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期密切相关,x2值分别为12.80、11.49、10.43和11.52,P值分别为0.002、0.001、0.005和0.003.H-ras的表达与胃癌分化和Lauren分型相关,x2值分别为11.85和8.87,P值分别为0.001和0.003;并与VEGF的表达相关,x2=10.79,P=0.001.生存分析显示,MVD和VEGF的表达均影响胃癌的预后,但仅MVD是影响预后的独立因素;H-ras的表达对胃癌的预后影响较小.结论:激活的H-ras可上调VEGF的表达,参与胃癌血管生成的调节,并影响胃癌组织的分化.
-
重组pEGFP-Mfn2真核表达载体的构建及转染人乳腺癌细胞系MCF-7
目的:构建Mfn2基因真核表达载体,将此载体转染入人乳腺癌细胞系MCF-7,并观察高表达Mfn2对MCF-7增殖的影响.方法:1)设计pEGFP-Mfn2质粒,并将其用脂质体转染入人乳腺癌细胞系MCF-7； 2)DNA测序、RT-PCR法、流式细胞术及免疫细胞化学法鉴定以上述载体是否转染成功；3)MTT法检测转染后Mfn2对MCF-7细胞增殖的影响.结果:1)重组后的pEGFP-N1质粒已成功载入小鼠Mfn2的全长编码基因,DNA序列测定的结果与预期设计基本一致.普通PCR琼脂糖凝胶电泳显示转染后MCF-7细胞中存在外源性Mfn2的表达.2)琼脂糖凝胶电泳检测显示实验组中Mfn2较对照组明显升高,转染Mfn2后MTT法检测转染pEGFP-Mfn2组的MCF-7细胞数明显低于空白对照组与转染pEGFP-N1组,P＜0.05.3)细胞免疫化学显示转染Mfn2后MCF-7细胞数目减少,癌细胞出现核碎裂现象.结论:成功构建了Mfn2基因真核表达载体,并成功转染MCF-7细胞.转染Mfn2后,MCF-7细胞的增殖受到明显抑制.
-
乳腺良恶性肿瘤及乳腺癌细胞系中SSEA-3和SSEA-4的表达
目的:探讨阶段特异性胚胎抗原SSEA-3及阶段特异性胚胎抗原SSEA-4在乳腺良恶性肿瘤及乳腺癌细胞系MDA-MB-468中的表达情况,及其与乳腺癌发生的关系.方法:通过免疫组织化学和免疫细胞化学方法检测50例乳腺癌(浸润性导管癌)病变、50例乳腺良性病变(纤维腺瘤,乳腺腺病)及乳腺癌细胞系MDA-M13-468中SSEA-3和SSEA-4的表达.结果:SSEA-3在乳腺癌中的表达阳性率为34%(17/50),且SSEA-3在乳腺癌中的表达与ER表达呈正相关(P＜0.05),而在乳腺良性病变中的表达阳性率为16%(8/50);SSEA-4在乳腺癌中的表达阳性率为58%(29/50),在乳腺良性病变组织中表达阳性率为36%(18/50);SSEA.3和SSEA-4在乳腺癌中的表达均高于其在良性病变中的表达(P＜0.05);且两者在MDA-MB468细胞系中均有阳性表达.结论:SSEA-3和SSEA-4在乳腺癌良恶性病变中的表达有区别,而且在乳腺癌细胞系MDA-MB-468中表达阳性率较高,提示SSEA-3和SSEA-4的表达可能与乳腺癌的发生有关.
-
B72.3和Ber-EP4及calretinin在浆膜腔积液鉴别诊断中的应用
目的评价B72.3、Ber-EP4和calretinin对浆膜腔积液中癌细胞和增生间皮细胞的鉴别诊断价值,并探讨ThinPrep薄片(TP)作为免疫细胞化学(ICC )制片方法的可行性.方法选择158例浆膜腔积液标本做石蜡包埋细胞块(CB)切片ICC(CB-ICC),评价B72.3、Ber-EP4和calretinin的诊断效果.对其中49例同时做TP的ICC(TP-ICC),并与CB-ICC的结果进行比较分析.结果 B72.3和Ber-EP4诊断癌细胞的敏感性分别为76.9%和69.2%,两者结合的敏感性增至89.7%.calretinin对间皮细胞的敏感性为90.9%,特异性为87.2%.B72.3在CB-ICC和TP-ICC中诊断癌细胞的敏感性分别为78.9%和68.4%,差异无统计学意义;Ber-EP4的敏感性分别为78.9%和84.2%,差异也无统计学意义.结论 B72.3、Ber-EP4和calretinin组合能有效辅助细胞学鉴别诊断癌细胞与增生间皮细胞;在浆膜腔积液癌细胞与增生间皮细胞的鉴别诊断中,TP可以替代CB.
-
p16INK4a在宫颈液基细胞学辅助筛查中的标记意义
目的 评价p16INK4a在宫颈液基细胞学检查中的标记意义.方法 收集74例宫颈外口和颈管的脱落细胞标本,分别进行液基细胞学检测和p16INK4a免疫细胞化学染色,并应用杂交捕获二代法检测高危人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染.结果 74例标本中,细胞学诊断未见癌细胞或癌前病变细胞(阴性)10例,意义不明的不典型鳞状细胞(ASC-US)15例,鳞状上皮内低度病变(LSIL)28例,不除外上皮内高度病变的不典型鳞状细胞(ASC-H)5例,鳞状上皮内高度病变(HSIL)11例,鳞状细胞癌(SCC)5例.各级别病变中,HR-HPV阳性者分别为1、4、3、9、7和5例,p16INK4a免疫细胞化学染色阳性者分别为2、5、3、8、9和5例.随着宫颈病变级别的上升,HR-HPV和p16INK4a免疫细胞化学染色阳性率均增高.结论 p16INK4a免疫细胞化学染色增强了对不典型细胞的区分能力,可以提高宫颈癌筛查的准确性.
-
细胞角蛋白20免疫细胞化学染色辅助尿液基细胞学诊断尿路上皮癌的价值
目的 探讨细胞角蛋白20 (CK20)的表达在辅助尿液基细胞学(LBC)诊断尿路上皮癌(UC)中的价值.方法 采用前瞻性和回顾性研究两种方法.在前瞻性研究中,收集136例有泌尿系统症状患者和体检正常者尿液标本,进行尿LBC检查和CK20免疫细胞化学染色检测.在回顾性研究中,选取163例尿液细胞学档案中诊断为非典型尿路上皮细胞及更严重病变患者的液基薄片,脱色后进行CK20免疫细胞化学染色检测.以组织学诊断和临床随访结果作为金标准进行统计学分析.结果 前瞻性研究中,UC 89例,其他恶性肿瘤19例,良性病变12例,体检正常16例.CK20免疫细胞化学染色诊断UC的敏感性为75.3％,明显高于LBC(48.3％,P＜0.001)；特异性为91.5％,与LBC(91.5％)相同.CK20在G1、G2和G3级UC中的阳性表达率分别为64.7％ (22/34)、73.3％(22/30)和91.3％(21/23),在G1和G2级UC中,CK20免疫细胞化学染色与LBC诊断的敏感性差异有统计学意义(G1级:p=0.0003,G2级:P =0.009).回顾性研究中,UC 119例,其他恶性肿瘤17例,良性病变27例.CK20在UC中的阳性表达率为90.8％,在非UC(良性病变和其他恶性肿瘤)中的阳性表达率为15.9％,差异有统计学意义(P＜0.001).在119例UC中,LBC诊断癌62例(52.1％),可疑癌35例(29.4％),非典型尿路上皮细胞22例(18.5％)；CK20在LBC诊断为癌、可疑癌和非典型尿路上皮细胞中的阳性表达率分别为96.8％、97.1％和63.6％.在44例非UC中,LBC诊断癌6例(13.6％),可疑癌12例(27.3％),非典型尿路上皮细胞26例(59.1％)；CK20在LBC诊断为癌、可疑癌和非典型尿路上皮细胞中的阳性表达率分别为33.3％、33.3％和3.8％,与其在UC中的表达率差异均有统计学意义(均P ＜0.001).结论 尿脱落细胞CK20免疫细胞化学染色可以辅助LBC提高诊断UC的敏感性.
-
细针吸取标本检测晚期乳腺癌人表皮生长因子受体2基因扩增和蛋白表达的价值
目的 探讨细针吸取(FNA)标本检测晚期乳腺癌人表皮生长因子受体2(HER-2)基因扩增和蛋白表达的可行性,为乳腺癌患者临床靶向用药提供依据.方法 选取49例乳腺癌FNA液基标本,采用免疫细胞化学(ICC)和荧光原位杂交(FISH)法检测HER-2蛋白表达和基因扩增.49例乳腺癌患者均为术后石蜡包埋切片免疫组织化学(IHC)检测HER-2蛋白表达++或+++,并且每例均有对应的组织标本HER-2 FISH检测结果.结果 49例FNA标本的FISH检测结果与组织学标本的FISH检测结果完全符合(kappa=1.0),33例组织学标本检测到HER-2基因扩增者,FNA标本也同样检测到HER-2基因扩增,扩增率均为67.3％.HER-2基因扩增的33例病例中,ICC检测HER-2蛋白表达+++者26例,占78.8％;IHC检测HER-2蛋白表达+++29例,占87.9％,ICC和IHC检测结果差异无统计学意义(P=0.322).16例细胞学与组织学两种标本均无基因扩增者中,除1例因细胞量少ICC检测不满意外,其余15例ICC检测HER-2蛋白表达均为0/+;IHC检测15例HER-2蛋白表达均为++,1例为+++.以FISH检测结果为金标准,ICC检测具有比较高的敏感性和特异性,分别为87.9％和100.0％.结论 FNA液基标本可以应用于临床检测乳腺癌患者HER-2基因扩增和蛋白表达,并且ICC检测有较高的敏感性和特异性.对于晚期乳腺癌及其复发和转移患者,可以使用FNA液基标本检测HER-2.当ICC检测HER-2蛋白表达+++时,提示HER-2基因扩增.
关键词： 乳腺肿瘤 细针吸取 免疫细胞化学 荧光原位杂交 人表皮生长因子受体2 -
人脑胶质瘤组织中分离与培养肿瘤干细胞
目的从胶质瘤组织中培养、分离肿瘤干细胞,并初步探讨其生物学特性.方法采集8例人脑胶质瘤手术标本,剪碎、胰酶消化,滤网过滤收集细胞.淋巴细胞分离液除去其中的红细胞,用含EGF、LIF和bFGF的无血清培养液培养,形成细胞球体后经免疫磁珠分离获取CD133+细胞,用有限稀释法继续在上述无血清培养基中培养得到肿瘤细胞球后连续传代培养.取第5代肿瘤干细胞,用含10%FBS培养液诱导分化.分化前后用Nestin、MAP2、GFAP免疫细胞化学染色检测肿瘤干细胞及其分化细胞的相应标志物.结果在1例间变性星形细胞、室管膜细胞混合瘤中克隆到了CD133+细胞,这些细胞在体外培养时,能稳定维持于球形生长状态(3个月,14代),在适合的环境中随时能自我更新和增殖,并分化成MAP2+的瘤性神经元和GFAP+的瘤性胶质细胞,而CD133-细胞则无此特性.结论在胶质瘤组织中有肿瘤干细胞存在,这些细胞在体外能长期培养和传代,可为进一步研究胶质瘤的细胞生物学和分子生物学特征开拓新途径.
