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二乙基己烯雌酚诱发成年仓鼠睾丸生精异常及对生精细胞表达bcl-2、P53和cadherin的影响
目的探讨在二乙基己烯雌酚(DES)诱发成年动物生精异常过程中,原癌基因bcl-2、p53及黏附分子cadherin在生精细胞中表达的变化,旨在阐明DES诱发生精异常的作用机理. 方法成年雄性仓鼠皮下注射DES连续7 d后,取其睾丸,进行光镜及电镜的观察和原癌基因bcl-2、p53及黏附分子cadherin的免疫组织化学染色.结果DES处理组的成年仓鼠睾丸生精细胞发育异常,bcl-2和p53表达量均比对照组有显著增加,并以精母细胞和圆形精子细胞较为明显.生精上皮中cadherin的表达比对照组有明显减少.结论DES增加精母细胞和圆形精子细胞表达bcl-2和P53;同时抑制cadherin表达,是诱发成年仓鼠生精异常的原因之一.
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成人毛囊干细胞分选及β-连环蛋白表达的研究
目的寻找一种快速简便的分离毛囊干细胞的方法,探讨β-连环蛋白(β-catenin)信号分子在毛囊干细胞增殖分化中的调节作用.方法利用毛囊干细胞黏附性强的特点,通过将毛囊细胞悬液黏附于包被有人胶原的平板而使富集毛囊干细胞分离.利用毛囊干细胞标志物Keratin 19(K19)及体外集落形成能力进行鉴定.采用免疫细胞化学及原位杂交技术检测分选后的毛囊干细胞β-catenin的表达情况.结果毛囊干细胞悬液黏附于人胶原20 min后,K19的表达增加1.6倍,集落形成能力增加3.5倍.β-catenin在细胞核中的蛋白表达增加. 结论快速黏附法可以使富集毛囊干细胞分离,β-eatenin参与了毛囊干细胞的增殖及分化调控.
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人循环纤维细胞的分离和鉴定
目的 建立分离、培养人循环纤维细胞的方法,并探讨其细胞生物学特征.方法 取成人外周血白细胞,经淋巴细胞分离液分离,接种于含20%胎牛血清的DMEM培养液中进行培养.对贴壁生长的成纤维样细胞进行免疫组织化学鉴定,流式细胞仪分析和电镜观察,并通过测定培养液中羟脯氨酸含量,研究其胶原合成能力.结果 细胞培养9d后CD34、CD45、Ⅰ型胶原分子阳性,其中Ⅰ型胶原分子阳性细胞含量为83.5%;电镜下观察具有典型的成纤维细胞特征;培养液中羟脯氨酸含量为11.17mg/L,明显高于空白对照组8.07mg/L (P＜0.01),表明培养细胞具有胶原合成能力.结论 成人外周血中存在成纤维细胞的前体细胞,经体外分离、培养可分化为循环纤维细胞.
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幽门螺旋杆菌对慢性胃炎患者粘膜内D细胞及生长抑素mRNA表达的影响
目的了解幽门螺旋杆菌(Hp)感染与慢性胃炎患者胃窦粘膜内D细胞及生长抑素mRNA+细胞(D mRNA+细胞)减少的关系. 方法免疫细胞化学和原位杂交技术. 结果正常组D细胞与Hp-胃炎组无差别(P>0.05),但Hp+胃炎组D细胞显著减少,与Hp-胃炎组相比有显著性差异(P<0.01).D mRNA+细胞,Hp+胃炎组也低于其他2组且有显著性差异(P<0.01). 结论 Hp+胃炎组内D细胞及D mRNA+细胞减少与Hp感染有密切关系.它能减少D细胞分泌的生长抑素对G细胞分泌的影响,但是生长抑素基因的转录和蛋白的合成依然运行.
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胰岛素样生长因子-1对骨骼肌源性干细胞的促增殖效应
目的 观察胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对骨骼肌源性干细胞(MDSCs)生长的影响.方法 采用连续预贴壁法从新生小鼠后肢肌分离培养MDSCs;用含2%胎牛血清的DMEM培养基促进其向骨骼肌细胞分化.免疫细胞化学SP法检测于细胞标志Sca-1和骨骼肌细胞标志肌节(α-sarcomeric)肌动蛋白的表达情况;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测IGF-1对MDSCs增殖的影响,并分析IGF-1效应与培养时间以及与IGF-1浓度之间的关系.结果 从新生小鼠后肢肌成功分离培养MDSCs,90%以上的MDSCs呈Sca-1阳性;在分化培养中MDSCs能够产生α-sarcomeric 肌动蛋白阳性的肌管;IGF-1对MDSCs促增殖作用随细胞培养时间的延长逐渐明显;随IGF-1浓度的增加而增加,并逐渐趋于饱和.结论 IGF-1对体外培养的MDSCs有促进增殖的作用.
关键词： 干细胞 骨骼肌 胰岛素样生长因子-1 免疫细胞化学 小鼠 -
5种肽激素在黄鳝消化道内分泌细胞中的分布特点
目的探索黄鳝消化道黏膜中5种内分泌细胞的定位及分布. 方法采用免疫细胞化学技术中的链霉亲合素-生物素过氧化物酶复合物(SABC)法. 结果在黄鳝消化道黏膜中至少分布着5种免疫活性内分泌细胞,它们是:胃泌素(Gastrin,Gas)、生长抑素(Somatostatin,Som)\,五羟色胺(5-Hydroxytryptamine,5-HT)、胰岛素(Insulin,Ins)和神经丝蛋白-免疫活性内分泌细胞(Neurofilament-immunoreactive cell,NF).其中Gas和Som细胞分布在食道复层扁平上皮与杯状细胞之间:贲门处有少量Gas细胞分布,胃底上皮和胃腺中有大量的Som细胞分布,而Ins、NF和5-HT细胞则分别分布在幽门上皮和幽门腺管上.黄鳝的肠中则未见到上述任何一种免疫活性阳性反应.另外,胰高血糖素在黄鳝消化道任何部位均未见到免疫活性阳性反应.以上各免疫活性内分泌细胞均为深褐色,形状不规则,胞突较短而粗,胞核呈空泡状,常夹于食道和胃上皮之间或分布于腺上皮之间,将胞突伸向胃腔或腺腔. 结论作为低等脊椎动物,黄鳝的消化道具有复杂的内分泌功能.
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培养的大鼠胃平滑肌细胞GnRH受体的免疫组织化学及原位杂交研究
目的观察培养的大鼠胃平滑肌细胞中是否能表达GnRH受体,为进一步研究GnRH对胃平滑肌细胞的功能提供形态学依据.方法采用免疫组织化学SABC和原位杂交方法.结果培养的大鼠胃平滑肌细胞呈GnRH受体免疫反应阳性,阳性物质分布于细胞浆和细胞膜上,细胞核呈阴性反应.培养的胃平滑肌细胞同样含有GnRH受体mRNA杂交信号,信号物质亦分布于细胞浆内,细胞核呈阴性反应.结论胃平滑肌细胞能自身表达GnRH受体,它可能也是GnRH的靶细胞.
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人参皂甙Rg1、肉桂酸与丹参酮ⅡA组合对体外人成骨肉瘤MG-63细胞形态结构和终末分化指标的影响
目的 研究中药有效成分人参皂甙Rg1、肉桂酸和丹参酮ⅡA组合(RCT)对人成骨肉瘤MG-63细胞的形态与超微结构改变和终末分化的影响,鉴定其对人成骨肉瘤细胞终末分化的诱导作用. 方法 以中药有效成分组合(33mg/L人参皂甙Rg1+2mmol/L肉桂酸+0.3mg/L丹参酮ⅡA)处理MG-63细胞7d,对照组与处理组样本各3次重复,免疫细胞化学检测及光镜与电镜观察系统研究RCT组合对MG-63细胞的细胞生物学效应.环六亚甲基双乙酰胺(HMBA)处理MG-63细胞作为分化诱导效果的阳性对照. 结果 免疫细胞化学检测显示,成骨肉瘤细胞终末分化指标Ⅰ型胶原、骨黏素、骨钙蛋白的表达呈强阳性,并观察到钙化糖原颗粒增多与典型骨结节的形成;光镜与电镜观察结果显示,处理后的MG-63细胞产生了细胞形态规则,大小一致,细胞铺展体积增大,核质比例减小,核内核仁数目减少,细胞器丰富发达等趋向正常细胞特征的显著改变. 结论 RCT组合能显著改变MG-63细胞形态与超微结构恶性特征,并促进终末分化标志物的表达,从而对人成骨肉瘤MG-63细胞的终末分化具有显著诱导作用.
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ALK融合蛋白在肺癌转移灶细针穿刺涂片标本中的研究
目的 探讨基于免疫细胞化学技术检测肺癌细针穿刺细胞学传统涂片标本中ALK融合蛋白表达的可行性.方法 收集61例肺癌患者的转移淋巴结细针穿刺传统涂片标本,应用免疫细胞化学(ICC)方法,用罗氏Ventana全自动免疫组化仪检测ALK融合蛋白的表达情况,并与相应的荧光原位杂交(FISH)检测结果进行比较.结果 61例细针穿刺传统涂片中,ICC检测ALK融合蛋白阳性表达率为9.9％ (6/61),肺腺癌ALK融合蛋白阳性表达率为10.9％ (6/55),其他鳞状细胞癌等均阴性(0/6),与相应FISH检测结果比较,符合率为93.8％(15/16)(Kappa=0.871),敏感性为85.7％(6/7),特异性为100％(9/9).结论 对于无法手术或者活检的晚期肺癌患者,细胞学细针穿刺传统涂片标本的ICC检测可以作为肺癌EML4-ALK融合基因FISH检测前的常规筛查手段.
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浆膜腔积液中转移性腺癌与间皮细胞的病理学研究
目的探讨浆膜腔积液中转移性腺癌与反应性间皮细胞增生的鉴别.方法选取胸、腹水转移癌48例及反应性间皮细胞增生30例,采用常规涂片HE染色观察两者形态学特点,并应用免疫细胞化学SP法检测HBME-1、calretinin、E-cadherin、MOC-31和BerEP4的表达.结果腺癌和间皮细胞两者形态各有特点,但是分化好的腺癌和明显增生的间皮细胞仅从常规涂片难以鉴别;免疫细胞化学显示反应性间皮细胞HBME-1和calretinin阳性率为86.7%和76.7%;而腺癌细胞只有少量表达,特异性高达95.8%和100%.MOC-31、E-cadherin和BerEP4对转移性腺癌细胞阳性率为70.8%、77.1%和88.4%,间皮细胞表达很少,特异性分别为90%、93.3%、93%.两者对5种抗体的表现差异显著.结论应用常规涂片和免疫细胞化学相结合的方法对鉴别转移性腺癌和间皮细胞增生有很大的帮助,好应用一组抗体综合分析判断,HBME-1、Calretinin、E-cadherin、MOC-31及BerEP4是目前非常有效的组合.
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肺癌胸水多种制片法与免疫细胞化学的联合应用
目的 探讨多种制片方法联合免疫细胞化学(ICC)在肺癌胸水细胞学诊断中的意义和应用策略.方法 胸水细胞学标本2523例,其中可疑肿瘤细胞标本例199例,分别采用细胞蜡块(92例)、传统细胞涂片(35例)和薄层液基细胞(TCT)(72例)制片方法与ICC相结合进行辅助诊断.结果 ICC与传统细胞涂片和TCT联合应用的诊断率比细胞蜡块的诊断率高,从91.5％提高到99.1％ (P ＜0.05);ICC联合3种制片方法的诊断率分别为95.75、82.9％、97.2％ (P ＜0.05);132例肺腺癌中TTF-1、NapsinA阳性病例分别为132和92例,灵敏度分别为100％和69.7％,特异度分别为95.5％和97％,差异显著(P＜0.05);小细胞癌3例,CgA、Syn、CD56阳性病例分别为1、3、3例,灵敏度分别为33.3％、100％、100％,特异度分别为100％、97.4％、95.4％,差异不显著(P＞0.05);1例间皮瘤及51例反应性间皮增生病例,Calretinin阳性48例,MC阳性43例,二者灵敏度分别为92.3％、82.7％,特异度分别为98.6％、98％,差异不显著(P＞0.05).结论 细胞蜡块、传统细胞涂片、TCT制片方法与ICC联合应用是提高肺癌胸水细胞学诊断率的有效手段,改进标本预处理措施、优化抗体套餐、一片多用对于标本有限的晚期患者尤其具有重要意义.
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p16INK4a和Ki-67免疫细胞化学染色在宫颈液基细胞学中的应用价值
目的 探讨液基细胞学检测(LCT)剩余细胞学标本中p16INK4a、Ki-67的免疫细胞化学染色筛查宫颈鳞状细胞癌和宫颈癌前病变的价值.方法 采用免疫细胞化学和免疫组化法对194例细胞学标本和91例组织活检标本进行p16INK4a、Ki-67检测.结果 p16INK4a、Ki-67表达阳性率随着宫颈病变程度的加重而升高,与病变级别呈正相关.Ki-67的标记指数(LI)在HSIL组高,与其他各组间均数的差异显著(P＜0.05).LSIL及其以上病变细胞学p16INK4a和Ki-67与组织学诊断符合率分别为87.3％和80.95%.宫颈脱落细胞学Ki-67、p16INK4a的免疫细胞化学染色检出高级别病变及鳞癌病变的敏感度、特异度分别为83.6％、86.7％和87.1％、100％. 结论 利用LCT液基细胞学涂片中p16INK4a、Ki-67的免疫细胞化学染色作为辅助诊断指标应用于宫颈癌高危人群筛查,具有重要意义.
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免疫细胞化学在胸腹水细胞学鉴别诊断中的应用
目的探讨免疫细胞化学技术在胸腹水细胞学诊断中的意义.方法在217例胸腹水细胞涂片中应用免疫细胞化学SP法检测癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白(cytokeratin,CK)、波形蛋白(vimentin)及钙结合素(calretinin)的表达,并与HE染色比较.结果腺癌中CEA、CK均为(+);鳞癌中CK(+)、CEA部分(+),而vimentin和calretinin(-);间皮瘤、增生间皮细胞中CK、vimentin和calretinin为(+),CEA为(-).结论免疫细胞化学技术可应用于胸腹水细胞学涂片,选择特异的抗体(CEA、CK、vimentin、calretinin)可以在癌细胞、恶性间皮瘤及增生性间皮细胞的鉴别中起重要作用.
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淋巴结转移性鼻咽癌针吸检查中细胞块样本的应用
目的 探讨细针吸取(FNA)涂片联合细胞块(CB)切片、免疫组化标记(IHC)和EBER原位杂交在淋巴结转移性鼻咽癌中的应用.方法 采用友谊式细针穿刺器和21G注射针对31例鼻咽癌头颈部淋巴结转移病灶获取样本制片,观察其细胞形态学及CB组织形态学特征、IHC和EBER原位杂交表达.比较分析单纯细胞涂片、细胞涂片联合CB切片、细胞涂片联合CB切片及IHC和EBER原位杂交3种不同方式对鼻咽癌头颈部淋巴结转移病灶的诊断准确率.结果 ①所有病例的细胞涂片及CB切片均显示为非角化性癌的形态学特征.②CB切片IHC和EBER原位杂交显示:肿瘤细胞CK5/6、p63、Ki-47及EBER均为(+);LCA和CK7均呈(-).③3种不同方式对鼻咽癌头颈部淋巴结转移病灶的诊断准确率比较显示:单纯细胞涂片诊断的敏感度(90.3％,28/31)及确诊率(74.2％,23/31)低;细胞涂片联合CB切片诊断的敏感度(93.5％,29/31)及确诊率(77.4％,24/31)居中;细胞涂片联合CB切片及IHC和EBER原位杂交诊断的敏感度(96.8％,30/31)及确诊率(96.8％,30/31)高.结论 FNA细胞涂片联合CB切片、IHC及EBER原位杂交的方式,对头颈部淋巴结转移性鼻咽癌的早期诊断、寻找原发灶、治疗以及预后判断具有重要意义.
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细胞块辅助支气管刷检液基细胞学在肺癌分型诊断的应用
目的 探讨细胞块辅助支气管刷检液基细胞学在肺癌分型诊断中的应用.方法 收集支气管刷检液基细胞学制片后剩余标本制备细胞块,应用免疫细胞化学检测NapsinA、TTF-1、p40、CD56在肺癌中的表达.结果 43例肺癌中腺癌22例,鳞状细胞癌15例,小细胞癌6例.NapsinA诊断腺癌的敏感性和特异性分别为77.3％和100％;TTF-1诊断腺癌的敏感性和特异性分别为86.4％和75.0％;p40诊断鳞状细胞癌的敏感性和特异性分别为93.3％和100％;TTF-1诊断小细胞癌的敏感性和特异性分别为100％和48.6％;CD56诊断小细胞癌的敏感性和特异性分别为100％和91.9％.结论 利用支气管刷检液基细胞学剩余标本制备细胞块,选择敏感性及特异性高的抗体进行标记,可提高细胞学在肺癌分型诊断的准确性.
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利用细胞涂片机做ICC的几点体会
细针吸取细胞学(FNAC)技术的广泛应用,为病理细胞学诊断开辟了新的领域.但仅用HE染色,已不能满足鉴别诊断的要求.免疫细胞化学(ICC)的问世,为临床细胞诊断提供了更加可靠的依据.但因ICC的标本制作比较困难,其结果也往往不能令人满意.我室初步应用英国山顿公司生产的细胞涂片机涂片做ICC,获得良好效果,现介绍如下.
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琼脂石蜡双包埋和免疫细胞化学染色的细胞学应用
胸水和支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)是肺癌细胞学常见的诊断标本,病理科常规采用离心涂片法,但普遍存在检出率低的问题.主要原因是收集的细胞数量少、大量可疑细胞随残液被弃,而导致假阴性结果,因此充分保留有限的体液细胞成分成为提高细胞学诊断的新思路.
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冷冻切片及免疫细胞化学检测在细针吸取细胞学诊断中的应用
细针吸取细胞病理学(fine-needle aspiration cytology, FNAC)检测是目前判断肿瘤性质的常用方法,具有很高的敏感性和特异性,并具有方便、快速、安全、经济、微创等优点[1],但由于各医院的采集方法、穿刺技术、处理方法、制片质量等不同,导致目前FNAC诊断的阳性率及准确率参差不齐,我们发现应用冷冻切片(frozen section, FS)结合免疫细胞化学检测(immunocyto chemical assay, ICA)处理涂片后剩余针吸标本,可以提高FNAC诊断的阳性率和准确率.现将工作中获得的一些经验和体会总结如下.
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免疫细胞化学在辅助浆膜腔积液细胞病理学诊断中的应用
免疫细胞化学是辅助浆膜腔积液细胞病理学鉴别诊断良恶性细胞的主要手段.腺癌细胞敏感抗体有B72.3、Ber-EP4、MOC-31等;间皮细胞敏感抗体有calretinin、thrombomodulin、HBME-1等.理想的标本制备方法是石蜡包埋法.
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免疫细胞化学在胸腹水肿瘤细胞学诊断中的应用
新近研究显示,恶性肿瘤发病率逐年升高,近年来有年轻化趋势,而且中国为高发病国家[1].因肿瘤的病因和发病机制不明,早期发现、早期诊断和早期治疗就成为医学界的重点和难点.国内、外很多医疗机构和学者都在研究、探索有效的肿瘤诊断方法和诊断指标[2].由于很多患者是以胸腹水为主要症状就诊的,胸腹水标本细胞病理学检查成为病理科日常重要工作之一.
