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羊膜移植治疗深层角膜溃疡12例临床观察
自从Kim和Tseng(1995)首次报道保存人羊膜移植重建眼表获得成功以来,羊膜被广泛应用于眼表疾病的治疗,临床与基础研究证实羊膜具有抗原性低,促进眼表上皮化,减轻炎症反应,抑制纤维组织增生和新生血管形成等作用.
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羊膜移植治疗深层角膜溃疡的临床护理分析
1995年Kim等[1]首次报道保存人羊膜移植重建眼表获得成功以来,羊膜被广泛应用于眼部疾病的治疗,经研究证实羊膜具有抗原性低、促进眼表上皮化、减轻炎症反应、控制纤维组织增生和新生血管形成等作用.我院于2000年6月至2002年10月采用多层羊膜或单层羊膜联合板层角膜移植治疗大面积深层角膜溃疡及角膜溃疡穿孔,取得了效好的临床效果,现将护理体会报告如下.
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DNA疫苗研究进展
疫苗在人和家畜疾病防治方面具有巨大的作用,传统的疫苗主要有三类:①活疫苗.它用无毒或充分减毒,但仍保留抗原性的活的病原微生物制成,有的称为减毒活疫苗.这类疫苗免疫力强、作用时间长,但安全是一个问题,具有潜在的致病危险(有可能在人体内恢复毒力;对免疫缺陷的人十分危险).
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Bx亚型1例报告
Bx亚型是正常ABO抗原以外的抗原性较弱的亚型或变异型,主要是由于糖基转移酶基因第7外显子的点突变,降低或改变了酶的活性,导致B抗原的弱表达,为血型鉴定造成困难[1].临床上常表现为正、反定型试验典型不一致,易导致血型错判及配血不合或错配.现报告笔者在工作中发现的Bx亚型1例.
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日本血吸虫Calpain蛋白免疫原性研究
目的探讨日本血吸虫疫苗候选分子Calpain蛋白的抗原性及其所诱导的免疫应答类型. 方法用Genetyx-MAC9.0分析Calpain肽链的亲水性,在亲水性区域以9个氨基酸为肽链单位的固相重叠肽链库(每相邻两个肽链之间仅有一个氨基酸不同)被Auto-spot Robot制备,用Dot-ELISA在合成的肽链库上筛选B细胞表位,含有B细胞表位的肽链免疫BALB/c小鼠,ELISA鉴别特异性IgG抗体亚类的产生. 结果由758个氨基酸组成的日本血吸虫Calpain蛋白含有两个主要的亲水区,其存在区域分别在氨基酸229~375和555~613;测定合成的肽链文库,在亲水区内筛选出4个B细胞的表位,分别是氨基酸234~251(YAHLSGGT);290~297(CLMGCSIH);338~346(PWGDSHEW);358~364(AWCDGA PQ);与对照组比较,免疫组鼠血清中IgGl、IgG2a和lgG2b特异性抗体有显著性意义的上升. 结论日本血吸虫Calpain是一个具有免疫原性的蛋白,能够激发宿主产生高水平的免疫球蛋白,提示Calpain可以发展成为日本血吸虫病的诊断抗原和日本血吸虫疫苗候选分子.
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弓形虫分泌蛋白ROP5的全基因原核重组表达与抗原性鉴定
目的 在大肠杆菌工程菌中重组表达刚地弓形虫RH株棒状体蛋白5(ROP5)的融合蛋白GST-6×His-ROP5,并初步评价重组蛋白的抗原性.方法 体外细胞培养弓形虫速殖子,提取总RNA,反转录获得cDNA,PCR扩增ROP5基因全长,与pET-41 Ek/LIC载体通过基因重组直接连接,在大肠杆菌RosettaTM (DE3) pLysS工程菌中诱导表达重组融合蛋白,后通过Western blotting鉴定重组蛋白rROP5的抗原性.结果 构建了弓形虫ROP5全基因重组表达质粒,诱导表达了GST-6×His-ROP5融合蛋白,分子量为96 kDa,与预测结果相符,重组蛋白与人源抗血清有显著免疫印迹反应.结论 本研究获得了弓形虫ROP5全长重组蛋白,为进一步改进弓形虫诊断抗原,研究蛋白结构以及分泌蛋白与宿主细胞的相互作用奠定了基础.
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A型肉毒杆菌毒素在斜视中的应用
肉毒杆菌毒素是由厌氧梭状芽胞杆菌属中的肉毒杆菌产生的外毒素,是一种神经毒素,在动物体内能与肌肉迅速而牢固地结合,并固定在神经末梢,以某种方式拮抗钙离子的作用,干扰乙酰胆碱从神经末梢的释放,使肌纤维不能发生收缩,致运动障碍称之为化学去神经作用。根据肉毒杆菌毒素血清抗原性不同,可分为A、B、C、D、E、F、和G等7个型别,其中以A型毒素对人体肌肉的麻痹作用弱,眼科多选用A型肉毒杆菌毒素。因此,A型肉毒杆菌毒素作为斜视及其它非手术方法的一种补充,在斜视治疗中具有一定的适应证,效果可靠。现把2眼麻痹性斜视应用A型肉毒杆菌治疗情况报告如下。
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乙型肝炎表面抗原主要亲水区Ⅱ的抗原性
目的 研究HBsAg主要亲水区Ⅱ的4个氨基酸变异对HBsAg抗原性的影响.方法 定点突变HBsAg主要亲水区Ⅱ的4个氨基酸对应的s基因(P120T、C121S、K122I和T123N),构建4个真核表达重组质粒.用重组质粒和表达G145R HBsAg质粒体外瞬时转染HepG2细胞.4种抗体和7种国产HBsAg ELISA诊断试剂盒检测转染细胞上清液和细胞裂解液中变异HBsAg的免疫反应性;免疫荧光检测单克隆抗体与转染细胞内变异HBsAg的免疫反应性.结果 成功构建了表达HBsAg主要亲水区Ⅱ的4个氨基酸变异的重组质粒,P120T、C121S、K122I和T123N变异HBsAg的免疫反应性比野生HBsAg低,T123N变异导致HBsAg存在分泌障碍.结论 HBsAg主要亲水区Ⅱ的4个氨基酸对维持HBsAg的空间构象和抗原性具有重要作用.
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特异性抗肝癌噬菌体单链抗体库的构建及鉴定
噬菌体单链抗体(ScFv)弥补了传统McAb制备繁琐、抗原性强、穿透力弱等不足,为HCC临床和基础研究提供新的手段。我们用基因工程技术和噬菌体表面呈现技术构建和筛选特异性抗HCC噬菌体ScFv库。 1. 材料与方法:(1)抗HCC噬菌体ScFv库的构建:应用HCC细胞常规免疫BALB/C小鼠,从其脾脏提取tRNA并纯化mRNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增抗体轻链和重链可变区,应用linker-(Gly4Ser)3装配ScFv基因,在其5′端和3′端分别引入内切酶SfiⅠ和NotⅠ酶切位点,连接到噬菌体载体pCANTAB 5E,转化大肠杆菌TG1细胞,铺SOBAG平板,记数菌落。
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聚乙二醇修饰蛋白药物研究进展
迄今,利用生物技术已开发成功了70多种重要治疗药物,年销售额已超过300亿美元,生物技术药物中大多为蛋白质类药物.在临床上,蛋白质类药物既有作用位点专一、疗效明确的优点,也有多项缺点,如在胃肠道内极易被蛋白酶水解,一般仅限注射给药;血浆半衰期较短,需反复多次注射,抗原性较强,易引起过敏等不良反应[1].
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血小板Ⅱb/Ⅲa受体拮抗药盐酸替罗非班临床研究现状
盐酸替罗非班(Tirofiban hydrochloride)是第一个非肽类血小板Ⅱb/Ⅲa受体拮抗药.分子式为C22H36N2O5S·HCL·H2O,分子量为495.08.其对血小板Ⅱb/Ⅲa受体具有高度的选择性和特异性,可逆性抑制血小板聚集且半衰期短,无抗原性,不良反应少.自上市以来,已广泛用于临床众多领域,特别是在不稳定型心绞痛或非Q波心肌梗死患者及经皮冠状动脉介入治疗(PCI)中预防心脏缺血事件的发生发挥着极其重要的作用.现在临床应用的是输液,起效迅速,方便急救和调整剂量.
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基因工程疫苗简述
疫苗(vaccine)是通过诱发机体产生特异免疫反应以预防或治疗疾病,或达到某一医学目的的一类生物制剂.其主要组分是能够刺激机体产生特异免疫反应的抗原,这些抗原可以是完整的病原微生物,如:细菌、病毒或完整的机体细胞,也可以是它们的某些成分或与这些成分的抗原性相似的其他抗原.
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肺炎链球菌蛋白PotD的表达纯化及免疫活性分析
目的 研究PotD蛋白免疫保护活性,探讨其作为疫苗候选蛋白的可能性.方法 构建、表达、纯化PotD蛋白,通过免疫BALB/c小鼠以制备多克隆抗体,评估其免疫原性,并进一步分析其对儿童的免疫保护效应;采用PCR技术扩增8株不同血清型S.pn中PotD基因后进行测序鉴定分析基因序列的保守性;再通过western blot技术分析8株菌中PotD蛋白的表达水平,以评估PotD蛋白保守性;采用粘附抑制实验分析PotD蛋白的免疫保护活性.结果 成功获得纯度大于95%的PotD目的蛋白,将其免疫小鼠后获得高效价抗体;在10岁以下儿童S.pn感染者及健康带菌者血清中均有抗PotD存在;对8株不同血清型S.pn PotD基因进行PCR扩增和测序发现8株细菌中该基因具有高度保守性;Westernblot技术分析证实,8株不同血清型S.pn均表达该蛋白;粘附抑制实验证实,重组PotD蛋白及其抗体均能够显著抑制S.pn对A549细胞的粘附作用.结论 PotD蛋白制备方便,在我国流行,S.pn血清型中有良好的保守性和免疫原性,能够显著抑制S.pn对宿主细胞的粘附,可能成为良好的蛋白疫苗靶点.
关键词: 肺炎链球菌 谷氨酰胺tRNA合成酶 保守性 抗原性 -
含uPA裂解位点的人sTrail融合基因的构建及其原核蛋白表达与纯化
目的构建含尿激酶纤溶酶原激活剂(urokinase plasminogen activator,uPA)裂解位点的人可溶性凋亡诱导配体(soluble related apoptosis inducing ligand,sTrail)基因的原核载体,表达并纯化其融合蛋白sTrail-uPA.方法 RT-PCR法克隆sTrail基因后,经引物延伸法构建his-uPA-sTrail融合基因并亚克隆至原核表达载体pET-32a中,诱导其表达蛋白并将其纯化,肠肽酶(enterokinase,EK)切与再次纯化回收该蛋白,Western blot检测其抗原性.结果表达载体经诱导成功获约38×103含载体表达标签(Trx)的融合蛋白,EK酶切该蛋白获约19.5 ×103的目的蛋白uPA-sTrail.检测表明,该目的蛋白具人Trail抗原性.结论成功克隆uPA-sTrail融合基因并构建至原核表达载体,并获约19.5×103的融合蛋白,且该蛋白具人Trail抗原性.
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小鼠IFIT1多克隆抗体的制备
目的 获取小鼠IFIT1(Interferon-induced protein with tetratricopetide repeats 1 )特异性多克隆抗体.方法 扩增培养高效表达IFIT1的重组子pMAL-C2X-IFIT1,超声破碎后的细胞上清过Amylose Pre-packed column亲和层析柱,将所得纯化的融合蛋白MBP-IFIT1作为抗原,添加福氏佐机剂后免疫兔,收集抗血清,用Western blot和ELISA方法测定抗血清特异性反应和效价.结果 纯化的MBP-IFIT1可诱导兔产生特异性免疫应答,所得抗体能够特异性识别融合蛋白中的IFIT1,ELISA结果显示其效价为1∶12 800.结论 MBP-IFIT1具有良好的抗原性,以该融合蛋白为抗原免疫兔成功制备出IFIT1特异性多克隆抗体.
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天然真皮支架抗原性研究进展
为大面积创伤寻找理想的永久创面覆盖物一直是外科研究的热点.天然真皮支架作为一种生物创面覆盖物及自体真皮修复的模板,其复杂的三维胶原结构的完整保留使之具有其它人工创面覆盖物所不可比拟的优点[1].然而排斥反应是限制其使用的主要障碍.现就其研究进展综述如下.
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小儿急性腹泻粪便中A群轮状病毒检测结果分析
人类轮状病毒(HRV)是引起婴幼儿急性胃肠炎的主要病原体.轮状病毒属呼肠病毒科,轮状病毒属.根据病毒基因结构和抗原性将RV分为A~G 7个群,其中A群RV主要引起婴幼儿腹泻,也为常见.A群轮状病毒引起的小儿急性腹泻同各种致病性肠道菌引起的腹泻病状相似,给临床确诊带来一定困难.通过酶法(ELISA)或胶体金法体外检测粪便中A群轮状病毒208例,检出轮状病毒抗原阳性69例(69/208)阳性率达33.2%,现总结如下.
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幽门螺杆菌外膜蛋白编码基因的克隆、表达、抗原性研究及其临床应用
幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)是人类常见的致病菌,我国普通人群的感染率为50%~80%,每年新增感染人数近千万.Hp感染不但与B型胃炎、消化性溃疡、MALT淋巴瘤、胃癌的发生有密切关系,而且与胃肠外疾病的发生也有重要关系,故已被世界卫生组织国际癌症研究机构列入第1类致癌原,并已在动物模型中得到了证实.
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白蛋白毫微粒的制备工艺及质量评价方法进展
毫微粒为固态胶体颗粒,大小在10~1000 nm之间,由大分子物质构成并可作为药物载体.其中白蛋白毫微粒不仅可生物降解,无毒性和抗原性,而且对亲水性药物有较高的负载能力,很适合用作药物载体,口服或静脉注射时,通过控制白蛋白毫微粒的粒径不仅可实现药物的靶向性,还可达到缓解的效果.近年来,国内外关于白蛋白毫微粒的研究很多,在制备方法和质量评价方法等方面都有了新的进展.
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静脉滴注抑肽酶致一过性意识障碍1例
抑肽酶系从牛肺中提取的一种碱性多肽,具有抑制激肽的产生,保护血小板的聚集和黏附功能,阻断内源性凝血系统的激活和抗纤溶作用,为广谱蛋白酶抑制剂[1,2].临床用于急性出血性、坏死性、水肿性胰腺炎及各种纤维蛋白溶解引起的出血和预防手术出血[3].由于其为异种蛋白,具有一定的抗原性,可能引起过敏反应.现将我科静脉滴注抑肽酶致一过性意识障碍1例报道如下.