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婴幼儿应用青霉素诌议
青霉素作为一种古老而廉价的抗生素,多年来一直为临床医生所青睐,尤其在儿科应用更为广泛.由于它具有半抗原性,可引起机体发生严重过敏反应.因此,使用前能否准确地判断其皮试结果,是避免发生过敏反应的关键.
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胰岛素非注射途径给药的研究进展
糖尿病是危害人体健康的常见疾病之一,它是以高血糖为主要特征的代谢内分泌性疾病,系因胰岛素绝对或相对不足所致.胰岛素是由胰岛β细胞分泌的分子量约为5.7kD的酸性蛋白,由A、B两条肽链经两个二硫键联结而成.药用胰岛素一般从猪、牛胰腺中提取,经纯化后供患者使用.因是异体蛋白,故存在抗原性,能引起人体的过敏反应.目前已有了DMA技术生产的重组人胰岛素,解决了抗原性问题,极大方便了患者的用药.
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尿激酶治疗急性脑梗塞近期疗效观察
尿激酶是从人新鲜尿中分离出来的,可直接催化纤溶酶原变成纤溶酶,使已形成的纤维蛋白水解而呈现溶栓作用.该药物对人类无抗原性,故不发生或少发生过敏反应.禁用于严重高血压.
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抗精子抗体与男性免疫性不育
现代免疫学研究已证实,人类的全部生殖过程均存在着复杂的免疫学现象。精子对自身机体而言具有抗原性,但由于生殖免疫屏障的存在使机体不会对自身精子产生免疫反应,而在病理状态下,尤其是血睾屏障的破坏,就会造成精子或其可溶性抗原成分的逸出,诱发机体产生抗精子抗体(ASAb),造成生殖障碍。男性不育中有8%~10%与免疫因……
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人巨细胞病毒截短被膜磷蛋白pp65的原核表达及抗原性分析
目的 利用大肠杆菌表达系统表达截短人巨细胞病毒(HCMV) pp65蛋白,并对其抗原性进行初步鉴定.方法 采用PCR扩增HCMV pp65基因961~1 686 bp(321aa-562aa)片段,并将其插入表达载体pET30a(+),转化BL21(DE3)菌株,十二烷基硫酸钠—聚丙稀酰胺凝胶(SDS-PAGE)分析蛋白表达,常规镍柱法纯化目的蛋白,以ELISA法初步检测其抗原性.结果 获得相对分子质量约为30 kD的融合蛋白,pp65抗原和全病毒抗原的P/N值分别为2.737、2.535.结论 本研究成功表达截短HCMV pp65抗原,并证实其蛋白抗原性优于全病毒抗原;此为HCMV检测试剂盒的研制和疫苗的研究提供了依据.
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卵巢癌肿瘤标志物
1 肿瘤胚胎抗原性标志物主要指甲胎蛋白(AFP)、卵黄囊瘤(内胚窦瘤)患者血清AFP含量极高.卵巢恶性生殖细胞肿瘤常为混合型,未成熟畸胎瘤、胚胎癌及混合性无性细胞瘤因含有卵黄囊成分故可产生AFP.
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利用生物信息学分析幽门螺杆菌Lpp20蛋的化学和免疫学分子特征
目的分析幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)郑州分离株MEL-HP27 Lpp20蛋白的主要化学和免疫学分子特征,为Hp基因工程疫苗和诊断抗原的研究奠定基础.方法根据本研究室克隆的Hp MEL-HP27 lpp20基因的核苷酸序列推导出该基因表达产物(Lpp20)的氨基酸序列,应用生物信息学软件Omiga2.0、Anthepro 4.5和GenBank数据库对Lpp20分子的主要化学特征和抗原活性进行分析.结果MEL-HP27 Lpp20蛋白的氨基酸序列长度为175aa,Lpp20蛋白的分子量为19.122kDa,等电点为9.950,pH7.0时带电荷为9.035,280nm摩尔消光系数为12210,280nm吸光度为0.639,具有2个有抗原活性的结构域.结论MEL-HP27 Lpp20蛋白分子具有典型抗原分子的结构特征,有希望成为新的Hp疫苗候选抗原.
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2007~2008年流感监测季北京地区H3N2亚型流感病毒抗原性与HA1基因特性分析
目的:了解2007~2008年流感监测季北京地区分离的H3N2亚型流感病毒抗原性及血凝素基因变异情况.方法:选取2007~2008年流感监测季中分离的首株H3N2亚型毒株及其后不同时间、不同地点共9株毒株,通过单向血凝抑制试验进行抗原性分析;测定血凝素基因的HA1区核苷酸序列并推导出其氨基酸序列,进行基因进化特性分析.结果:与我国代表株A/江西/东湖/312/2006本身的血凝抑制效价相比,9株病毒中3株有4倍及以上差异.HA1区核苷酸序列和氨基酸序列分析表明,有部分毒株的氨基酸发生下述替换:3L→F、53 D→N、57 Q→H、157 L→S、158 K→R、171 N→K、173 K→N、182 V→I、194P→L、261 R→Q、272 A→V、291 N→D、299 K→R;其中53、157、158、171、173、194位氨基酸位于抗原决定簇.结论:北京地区2007→2008年流感监测季分离的H3N2亚型流感病毒有部分毒株已发生抗原性及基因特性的改变.
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肾综合征出血热疫苗后备筛选毒株在Vero细胞上的适应传代及其抗原性研究
[目的]将肾综合征出血热疫苗后备毒株适应于Vero细胞,观察病变情况,并对其抗原性和繁殖特性进行研究.[方法]将新分离的汉坦病毒ZJ2、ZJ4、ZJ7株和汉城病毒ZJ5株在Vero细胞上进行连续传代,采用间接免疫荧光法(IFA)、反向被动血凝试验(RPHA),研究传代后毒株的病毒滴度、抗原量以及细胞的病变情况,同时将传代后的病毒接种敏感动物,观察动物的发病情况和毒株的繁殖特性.[结果]经过5次连续传代,四株病毒在Vero细胞上均显示出良好的适应性,从第二代开始病毒滴度稳定在6.00Lg TCID50/ml以上,第五代时高达7.50Lg TCID50/ml,第三代毒株抗原量均已达到1:128,ZJ7株抗原量高时达1:768,四株毒株感染Vero细胞,连续观察12d不见细胞产生病变,第五代细胞病毒液接种敏感动物,9d后动物发病甚至死亡.[结论]四株病毒已适应于Vero细胞,且具有病毒滴度高、毒力强和抗原性良好的特性,是Vero细胞肾综合征出血热灭活疫苗良好的后备筛选毒株.
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柯萨奇病毒A6外壳蛋白VP1基因重组表达及活性鉴定
目的 表达柯萨奇病毒A6(CVA6)外壳蛋白VP1,鉴定重组蛋白免疫活性,为CVA6血清学检测试剂和疫苗研究提供依据.方法 利用PCR技术从HN421/HN/CHN/2011河南分离株基因组扩增VP1基因,经酶切连接到表达载体pET30a中,转化大肠杆菌(BL21DE3);用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因表达,并对重组蛋白进行纯化,SDS-PAGE和Western blot方法对重组蛋白分析鉴定其免疫活性.结果 PCR方法扩增的VP1基因长度为980 bp;经PCR扩增和测序鉴定插入到表达载体的基因片段与预期目的片段相一致;SDS-PAGE结果显示表达产物分子量为34 kDa;经大肠杆菌高效表达和纯化获得了重组蛋白CVA6-VP1,通过Western blot分析,该重组蛋白与手足口病患者血清反应产生特异杂交带.结论 本研究成功克隆并构建了CVA6 VP1基因高效原核表达系统,初步结果显示重组蛋白具有较好的抗原性,为EV71诊断试剂的研究奠定了基础.
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人TGF融合疫苗诱导抗体在貂肺上皮细胞的活性检测
目的TGF-β1疫苗诱导Balb/c小鼠产生抗体及对TGF-β1体外中和活性.方法通过已构建成功的TGF-β1疫苗免疫小鼠,诱导产生高效价中和抗体,抗TGF-β1抗体及合成的抗原肽ELISA法检测免疫血清抗体滴度,经貂肺上皮细胞生长抑制法,检测抗体血清对TGF-β1体外中和活性.结果抗TGF-β1疫苗可以诱导高滴度的抗体产生,可与抗TGF抗体及抗原肽结合,可以阻断TGF-β1对貂肺上皮细胞的抑制活性.结论构建的抗TGF-β1疫苗可以诱导高滴度的中和抗体产生,在体外阻断TGF-β1活性,可以作为抗纤维化疫苗用于抗纤维化动物模型研究.
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人角膜缘干细胞体外培养后生物学特性的变化
目的探讨人角膜缘干细胞体外培养后细胞形态学、抗原性和增殖能力的变化.方法消化培养法体外培养人角膜缘干细胞,获得细胞单层并观察细胞形态学变化.利用间接免疫荧光组化检测人角膜缘组织HLA-DR抗原在培养前、后的变化,检测培养后细胞增殖核抗原和角膜上皮64KD角蛋白的表达.结果原代细胞在培养1周形成单层,细胞形态以圆柱状细胞为主.培养前角膜缘上皮下少量HLA-DR抗原分布,培养后单层细胞DR抗原表达阴性;单层细胞中多量、散在分布的增殖细胞核抗原阳性细胞,并且部分细胞表达64KD角蛋白.结论角膜缘干细胞体外培养后分化为角膜上皮,不表达HLA-DR抗原,但仍保持较强的分裂增殖能力,可能是临床移植治疗干细胞缺乏眼表疾病患者的一种有效手段.
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MHC-Ⅱ分子在视网膜不同时期表达特点的实验研究
各种视网膜变性性疾病是致盲的重要原因,目前尚无有效的治疗方法.视网膜移植是很有希望的潜在治疗方法之一,但免疫排斥反应是视网膜移植面临的主要问题之一.本研究通过对MHC-Ⅱ分子在不同时期C57BL/6小鼠视网膜的表达,阐明新生视网膜具有更低的抗原性.1 材料与方法1. 1实验材料 选用出生后1 d、3 d,1、4及10周的C57BL/6小鼠(中国医学科学院实验动物中心);抗小鼠MHC-Ⅱ(H-2Db)及其阴性对照(Caltag公司),抗小鼠MHC-Ⅱ(Pharmingen 公司),流式细胞仪(BD公司).
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发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒核蛋白的原核表达与鉴定
目的:构建发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒( SFTSV)核蛋白( NP)基因的原核表达载体,获得纯化并具有抗原性的重组表达蛋白。方法:提取病毒RNA,逆转录为cDNA后 PCR 扩增得到目的片段;通过连接pMD18-T构建克隆载体,测序正确后连接至原核表达载体pMAL-c2x中,转化大肠杆菌JM 109,IPTG诱导表达、纯化MBP-NP融合蛋白。采用SDS-PAGE、Western blot对融合蛋白进行分析;建立间接ELISA方法对SFTSV患者血清NP抗体进行检测。结果:成功构建了NP基因的原核表达载体pMAL-c2x-NP,通过优化表达条件获得了纯化的带MBP标签的融合蛋白,经免疫印迹杂交证实重组蛋白具有抗原性。用建立的ELISA方法检测96例SFTSV患者血清,阳性率为40.6%;实时荧光定量RT-PCR 方法阳性率为55.2%,两者符合率为77.1%( Kappa=0.550, P<0.001)。结论:成功构建了SFTSV NP基因的原核表达系统,诱导表达了具有抗原性的MBP-NP融合蛋白,为进一步研发SFTSV的ELISA诊断试剂盒奠定了基础。
关键词: 发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒 核蛋白 原核表达 抗原性 -
重组α2-HS糖蛋白的原核表达、纯化及免疫学活性分析
目的:原核表达并纯化具有生物学活性的重组α2-HS糖蛋白(AHSG).方法:提取人肝癌细胞株HepG2细胞总RNA,逆转录得cDNA,PCR扩增出目的基因,与pMD18-T载体连接后,转化至大肠杆菌DH5α中,大量扩增后提取克隆质粒,连接至原核表达载体pEP-30a(+)中,转化BL21(DE3),经IPTG诱导蛋白表达,通过镍离子亲和层析的方法纯化重组蛋白,采用SDS-PAGE电泳、免疫印迹杂交法对纯化产物进行分析鉴定.结果:成功构建了AHSG原核表达系统BL21(pET30a-AHSG),佳诱导条件为80 μmol/L IPTG诱导3 h;诱导表达的蛋白相对分子质量约54 600,主要以不溶性的包涵体形式存在,纯化后的重组蛋白质量浓度高达2.3 g/L,经免疫印迹杂交鉴定有抗原性.结论:成功构建了AHSG原核表达系统,该系统可高效表达重组AHSG蛋白,该蛋白具有良好的抗原性.
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幽门螺杆菌融合基因hspA-ureB重组质粒的构建及其编码蛋白抗原性预测
目的:构建幽门螺杆菌(H.pylori)郑州分离株MEL-HP27的hspA-ureB融合基因的克隆,并运用生物信息学软件预测融合蛋白HspA-UreB的空间结构和抗原性.方法:从重组质粒pNHA27和pNUB27分别纯化回收hspA和ureB基因片段,并以hspA-ureB的顺序插入温控表达载体pBV220中,用质粒酶切电泳和特异PCR方法鉴定重组质粒.利用生物信息学软件和Genbank数据库分析hspA-ureB表达蛋白的抗原性和空间结构.结果:质粒酶切电泳和特异PCR均可见2.06kb的融合基因片段.生物学软件分析显示:MEL-HP27融合蛋白HspA-UreB的长度为689个氨基酸,蛋白相对分子质量为76 500,等电点为5.79,具有5个抗原活性结构域.结论:成功构建了MEL-HP27融合蛋白HspA-UreB的重组表达质粒,编码融合蛋白具有典型抗原分子的结构特征,有望成为H.pylori疫苗候选抗原.
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热休克蛋白60与动脉粥样硬化关系的研究进展
热休克蛋白60(heat shock protein 60,HSP60)是生物体对外界刺激发生反应而产生的应激蛋白,进化上高度保守,具有抗原性,可被免疫系统视为外源分子,从而触发自身免疫反应.由于进化上高度保守,因而不同种属间可发生交叉免疫反应.新的研究发现HSP家族,特别是HSP60参与动脉粥样硬化及冠脉疾病的发生过程.
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湖北省平原地区2010年麻疹疫苗强化免疫效果分析
麻疹是一种严重危害儿童健康的急性呼吸道传染病,传染性极强,易引起暴发流行.麻疹病毒只有一个血清型,抗原性稳定,人感染后可产生持久的免疫力,人是唯一宿主,且有安全有效的疫苗加以预防,因此,消除麻疹在理论和技术上是可行的[1,2].
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血清乙肝病毒PreS1、PreS2抗原检测在乙肝诊断中的价值
乙型肝炎是一种对人类健康具有严重危害的传染病,可导致肝硬化甚至肝癌.研究表明[1],我国乙型肝炎病毒(HBV)平均感染率已超过10%.临床上乙肝常用的诊断指标为HBV免疫学标志物(HBV M)和HBV-DNA.近年来,人们逐渐将注意力转移到具有较强抗原性的HBV PreS1、PreS2抗原检测上.为探讨血清PreS1、PreS2抗原在乙型肝炎诊断中的应用价值,该研究对200例乙肝患者和120例体检健康者血清PreS1、PreS2抗原进行检测,并与乙肝血清HBV M结果比较,报道如下.
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酵母硒对小鼠肿瘤生长和机体非特异性免疫功能的影响
机体免疫机能状态的异常及肿瘤免疫逃逸是肿瘤发生的重要原因,同时肿瘤细胞及其产生的肿瘤性免疫抑制因子往往导致荷瘤机体免疫机能低下,由于肿瘤细胞抗原性较弱或抗原调变等因素导致肿瘤特异性免疫往往难以奏效[1],因此机体的免疫状态与肿瘤的发生发展密切相关.故非特异性免疫在机体抗肿瘤免疫方面发挥重要作用.