首页 > 文献资料
-
表达乙型肝炎表面抗原及前 S2蛋白120~146片段重组酵母菌的构建及全菌体免疫效应评价
目的:构建表达 HBsAg 及前 S2蛋白120~146片段(PreS2120-146)-HBsAg 的重组酵母菌,并评价其全菌体免疫效应。方法根据酵母密码子偏爱性优化 PreS2120-146区及 HBsAg 基因序列,串联后克隆到毕赤酵母 pPIC3.5K 表达载体,构建 pPIC3.5K/PreS2120-146-HBsAg 质粒,重组质粒经 BgkⅡ酶切线性化后,电转化至 GS115菌株中,筛选 PreS2120-146-HBsAg 重组毕赤酵母,通过 SDS-PAGE、Western 印迹、ELISA 分析目的蛋白的表达;以表达目的蛋白的灭活酵母全菌体免疫 BALB/c 小鼠,采用 ELISA 检测其产生的 HBsAg 特异性抗体;以 HBsAg CTL 表位肽刺激免疫小鼠脾细胞,通过实时PCR 检测γ干扰素表达,分析其诱导的 CTL 反应。采用独立样本 t 检验。结果PCR、酶切和测序分析表明成功构建了 pPIC3.5K/PreS2120-146-HBsAg 重组质粒。重组毕赤酵母甲醇诱导后,SDS-PAGE、Werstern 印迹和 ELISA 证实 PreS2120-146-HBsAg 目的蛋白表达。与 HBsAg 纯抗原免疫比较,灭活重组酵母菌免疫小鼠产生抗 HBsAg 特异性 IgG 抗体水平相当(t=0.946,P =0.381)。CTL 反应检测显示, HBsAg CTL 表位肽刺激灭活重组酵母菌免疫组小鼠的脾细胞产生更高水平的γ干扰素(t=2.305,P =0.044)。结论利用整合型重组毕赤酵母表达系统成功表达了 PreS2120-146-HBsAg 目的蛋白,全菌体免疫小鼠后能诱导产生特异的体液免疫和细胞免疫反应。
-
160例慢性乙型肝炎患者preS1、preS2蛋白的检测结果
我们对临床诊断的160例慢性乙型肝炎患者进行了preS1、preS2蛋白和HBV DNA的检测,报告如下.
-
血清PreS1、PreS2抗原在乙肝诊断中的价值
乙型肝炎是一种严重危害人类健康的传染性疾病,可引起肝硬化及肝癌.我国是乙肝大国.平均感染率高达10%以上,以往通常用乙型肝炎病毒标志物(HBV-M)及HBV-DNA的检测结果来明确诊断及指导治疗.近年来研究发现[1]>,HBV外膜蛋白抗原PreS1与PreS2的抗原性较强,对乙肝诊断具有一定的临床意义.本组对389例不同HBV标志物模式的标本进行了PreS1及PreS2抗原检测,并将结果进行比较和分析,旨在评价血清PreS1、PreS2抗原在乙肝临床诊断中的价值.
-
血清乙肝病毒PreS1、PreS2抗原检测在乙肝诊断中的价值
乙型肝炎是一种对人类健康具有严重危害的传染病,可导致肝硬化甚至肝癌.研究表明[1],我国乙型肝炎病毒(HBV)平均感染率已超过10%.临床上乙肝常用的诊断指标为HBV免疫学标志物(HBV M)和HBV-DNA.近年来,人们逐渐将注意力转移到具有较强抗原性的HBV PreS1、PreS2抗原检测上.为探讨血清PreS1、PreS2抗原在乙型肝炎诊断中的应用价值,该研究对200例乙肝患者和120例体检健康者血清PreS1、PreS2抗原进行检测,并与乙肝血清HBV M结果比较,报道如下.
-
HBV preS2S-rhGM-CSF融合基因表达质粒的构建和表达
目的: 研究GM-CSF和preS2对乙肝DNA疫苗的免疫增强作用. 方法: 采用PCR方法, 扩增HBV preS2+S基因约846 bp的片段和rhGM-CSF(包括甘氨酸接头)基因450 bp的片段.通过T-A克隆技术和基因定向克隆, 构建融合基因的真核表达质粒pcDNA3.1-S2S-rhGM-CSF, 并在HepG2细胞中表达.结果: 经酶切、 PCR及DNA测序鉴定, 融合基因表达质粒HBVpreS2S-rhGM-CSF成功地构建.将其转染HepG2细胞后, 目的基因的转录通过RT-PCR得到证实, 而且表达的融合蛋白能与抗-HBs、抗-preS2和抗-GM-CSF单克隆抗体(mAb)均产生特异性反应. 结论: 融合基因表达载体pcDNA3.1-S2S-rhGM-CSF的成功构建并表达, 为进一步研究乙肝DNA疫苗奠定了实验基础.