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内毒素血症治疗的研究进展
一、内霉素"细菌内毒素"的概念早于1890年在研究发热物质的过程中被提出;1933年Boivin先由小鼠伤寒杆菌中将内毒素提取出来,进行化学免疫学方面的研究;1940年,Morgan使用志贺痢疾菌阐明了细菌内毒素是由多糖脂质及蛋白质三部分所组成的复合体;20世纪50年代以来,随着生物学、物理化学、免疫学以及遗传学等学科的发展,细菌内毒素的研究,尤其是其化学结构组成及各种生物活性间的关系也更加深入.
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表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的减毒鼠伤寒杆菌口服疫苗的制备
目的制备表达幽门螺杆菌 (H. pylori) 尿素酶B亚单位(UreB)的减毒鼠伤寒杆菌活菌重组疫苗,并观测Balb/c小鼠口服该重组疫苗后的免疫效果. 方法构建表达UreB的重组减毒鼠伤寒杆菌的疫苗株,SL3261/pTC01-UreB ,并用Western-blot检测UreB的表达.将SL3261/pTC01-UreB口服免疫Balb/c小鼠,12周后检测肠液和血清中的特异性抗体反应及脾细胞培养液上清中的IFN-γ和IL-10含量.结果 Western-blot显示减毒鼠伤寒杆菌株SL3261/ pTC01-UreB能表达约 61KD的蛋白,与H. pylori UreB亚单位蛋白分子量相符,具有抗原性.口服免疫小鼠后,疫苗组小鼠的肠液和血清中可分别检测到针对UreB的特异性IgA和IgG抗体,小鼠脾细胞培养上清中的IFN-γ和IL-10的含量亦明显升高.病理学检查显示疫苗组小鼠与对照组小鼠胃粘膜炎症指数无差异.结论表达H. pylori UreB的减毒鼠伤寒杆菌SL3261/pTC01-UreB可用作抗H. pylori感染的口服疫苗.
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儿童腹泻病的治疗进展
腹泻病是我国儿童时期常见的疾病之一,多由病毒感染(肠道病毒、轮状病毒等)、细菌感染(致腹泻大肠杆菌、鼠伤寒杆菌等)所引起。腹泻可引起儿童脱水、营养不良、发育迟缓、免疫功能低下、消化吸收障碍等多方面问题,是全球范围内导致5岁以下儿童死亡的第2大原因,WHO已经对该病的防控作为全球性战略看待[1]。由于腹泻是由多病原、多因素所引起,临床表现多样化,因此治疗方案上也各有不同,本文主要介绍近年来儿童腹泻病治疗方面的现状及有关进展,现综述如下。
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1例慢性乙型肝炎合并猪霍乱沙门氏菌感染病人的护理
沙门氏菌共有2 000种血清型,我国已发现61个血清型,仅少数几种对人致病.其中鼠伤寒杆菌、肠炎杆菌及猪霍乱沙门氏菌为常见.猪霍乱沙门氏菌感染在临床上比较少见,该病经粪口途径传播,细菌通过粪便污染饮水、食物、餐具以及蛋制品等,人进食后造成感染.人食入这种含有大量活菌的食物后引起中毒,主要表现为发热和急性胃肠炎症状.我院于2008年2月收治1例慢性乙型肝炎合并猪霍乱沙门氏菌感染的病人,临床症状不典型,经过对症治疗和护理,临床治愈出院.现报告如下.
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结核病DNA疫苗吸附于阳离子PLG微粒能提高其免疫保护效力\接种重组田鼠分枝杆菌疫苗能增强抗结核病的保护作用\活菌感染巨噬细胞疫苗的抗结核杆菌和鼠伤寒杆菌的效力
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009 芳香族生物合成(aro)及沙门菌致病性岛-2(SPI-2)基因缺失的伤寒及鼠伤寒杆菌衍生株可作为疫苗和载体
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031 用抗幽门螺杆菌的重组鼠伤寒杆菌芳香烃缺陷株活疫苗接种小鼠:与预防及治疗性疫苗效力相关的参数
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070 活鼠伤寒杆菌疫苗载体株分泌和裸DNA表达的ESAT-6抗原对结核病的预防效力
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010 鼠伤寒杆菌surA突变株可作为有效的口服活疫苗
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11种抗菌药物对鼠伤寒沙门氏菌体外抗菌作用的研究
鼠伤寒杆菌是近年来沙门氏菌属感染中常见的致病菌.1982年国内北京、上海、福建等地曾有鼠伤寒沙门氏菌感染流行,据各地报告有2,000余例,培养阳性者485例.患者大多为新生儿和婴幼儿,病原菌对许多常用抗生素耐药,并有多例死亡[1].为寻找有效的治疗方案,我们收集了上海地区1982年流行中所分离的鼠伤寒杆菌61株,进行11种国产抗菌药物对该菌体外抗菌作用的研究,现将结果报道如下.
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抗生素的合理应用与细菌耐药性国际会议传达
随着抗生素在临床上的普遍使用,对于减少许多感染性疾病的发病率和病死率,以及许多传染病的控制都发挥了十分重要的作用;同时细菌耐药性也日益成为突出的问题.由于耐药菌的产生,使许多抗生素失效,造成治疗失败;由耐药菌引起感染的爆发流行,特别如近年来肠道耐药性细菌引起感染的爆发流行,在发达国家和发展中国家都有发生,我国近几年来由多种耐药性鼠伤寒杆菌在婴幼儿中引起感染流行便是例子.此外,由于肠道中耐药的机会致病菌可侵犯血流、尿路、外科伤口或其他组织而引起医院内感染,患者多数为体质本已衰弱的住院患者,因此预后常较凶险.
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表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的减毒鼠伤寒杆菌口服疫苗的制备
目的制备抗幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)减毒鼠伤寒杆菌活菌疫苗,观察其免疫效果.方法构建表达UreB的原核表达载体PTc 01-UreB并转化减毒鼠伤寒杆菌SL3261,得到重组菌SL3261/PTc 01-UreB.应用抗Hp菌体蛋白兔血清行Western-blot检测UreB在SL3261中的表达.将SL3261/PTc 01-UreB口服免疫Balb/c小鼠,12周后应用ELISA检测肠液和血清中的特异性抗体反应.SL3261/PTc 01-UreB在Luria-Bertani培养液中连续传代60代以确定其稳定性.结果成功构建PTc 01-UreB原核表达载体.Western-blot显示,其转化减毒鼠伤寒杆菌SL3261后能表达相对分子质量约61×103的蛋白,与Hp UreB亚单位相符,具有抗原性.口服免疫小鼠后,在肠液和血清中可分别检测到针对UreB的特异性IgA和IgG抗体.体外连续培养60代未见PTc 01-UreB质粒丢失及对宿主细胞毒性.结论表达Hp UreB的减毒鼠伤寒杆菌SL3261/PTc 01-UreB可用作抗Hp感染口服疫苗.
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迷走神经切断对胃肠道给予大鼠伤寒杆菌诱发的下丘脑室旁核和视上核FOS表达的影响
为研究迷走神经在自然感染状态下向脑传递免疫信息的作用,应用免疫组织化学方法,观察了切断膈下迷走神经对大鼠消化道内给予鼠伤寒杆菌刺激诱发的下丘脑室旁核和视上核的Fos表达变化的影响.结果发现,接受细菌刺激的动物与仅给予生理盐水的动物相比,回肠和肠系膜淋巴结有明显炎症存在,室旁核外侧部和视上核背侧部的Fos阳性细胞数增加;膈下迷走神经切断后,手术+细菌组与假手术+细菌组相比,室旁核的外侧部和视上核背部Fos表达减少.因此迷走神经途径在自然感染性免疫应答过程中,特别是在其早期阶段可能是传递腹腔免疫信息的重要途径之一.
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鼻腔接种伤寒杆菌Fe-SOD的抗体应答及对鼠伤寒杆菌攻击的免疫保护作用
目的探讨鼻腔接种伤寒杆菌Fe-SOD后血液和粘膜系统的抗体应答及免疫保护作用.方法用IL-1作为佐剂,将伤寒杆菌Fe-SOD经鼻腔接种小鼠,检测小鼠血液及肠液中的抗体应答,并用鼠伤寒杆菌攻击小鼠,观察小鼠的存活情况,以确定免疫保护作用.结果当用IL-1作为佐剂时,经鼻腔接种伤寒杆菌Fe-SOD的小鼠血液和肠液中可产生高水平特异性IgG和IgA;而腹腔注射仅在血液中产生高水平特异性IgG.另外发现经鼻腔接种伤寒杆菌Fe-SOD的小鼠在2LD50鼠伤寒杆菌攻击后,3d和7d的存活率均明显高于对照组(P<0.05),且以5LD50鼠伤寒杆菌攻击时,小鼠7d的存活率明显高于对照组(P<0.01).结论结果说明伤寒杆菌Fe-SOD经鼻腔接种后可引起小鼠粘膜系统和血液中的抗体应答;对鼠伤寒杆菌的攻击可产生一定的免疫保护作用,也进一步说明了Fe-SOD是沙门菌的共同保护性抗原.
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幽门螺杆菌尿素酶减毒鼠伤寒杆菌疫苗诱导小鼠粘膜免疫应答的研究
目的:观察口服减毒鼠伤寒杆菌活菌重组疫苗后小鼠的粘膜免疫应答状况.方法:将已构建成功的表达幽门螺杆菌(H.pylori)尿素酶B亚单位(UreB)的重组减毒鼠伤寒杆菌SL3261/pTC01-UreB口服免疫Balb/c小鼠,12周后检测肠液和血清中的特异性抗体反应.结果:疫苗组小鼠的肠液和血清中可分别检测到针对UreB的特异性抗体IgA和IgG,病理学检查显示疫苗组小鼠较对照组小鼠胃粘膜炎症程度差异无统计学意义.结论:表达H.pylori UreB的减毒鼠伤寒杆菌SL3261/pTC01-UreB能够诱导小鼠产生抗H.pylori的粘膜免疫,可用作抗H.pylori感染的口服疫苗.
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灌洗法检测减毒鼠伤寒杆菌疫苗对幽门螺杆菌的免疫应答
目的应用高渗灌洗液法(灌洗法)检测表达幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)的减毒鼠伤寒杆菌活菌重组疫苗口服免疫小鼠后的免疫应答状况.方法将能表达UreB的重组减毒鼠伤寒杆菌SL 326l/pTC01-UreB口服免疫Balb/c小鼠,12周后应用灌洗法或将小鼠处死直接获取小鼠肠液,检测小鼠的肠液和血清中针对UreB的特异性IgA和IgG抗体反应.结果疫苗组小鼠的肠液和血清中可分别检测到针对UreB的特异性IgA和IgG抗体,与对照组存在显著性差异(P<0.01).灌洗法获取的小鼠肠液中的IgA抗体含量较将小鼠处死后直接获取的肠液中的IgA抗体含量明显为高(P<0.01).病理学检查显示疫苗组小鼠胃粘膜炎症指数无改变.结论高渗灌洗液法是获取肠道抗体的理想方法;表达HpUreB的减毒鼠伤寒杆菌SL 326l/pTC01-UreB可用作抗Hp感染的口服疫苗.
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原发性肝癌的非特异性主动免疫治疗
非特异性主动免疫治疗系采用非特异性的免疫制剂,以增强网状内皮细胞活性,使外周淋巴样组织中的免疫活性细胞增殖,提高机体的非特异性免疫能力,以发挥抗肿瘤的效应.这类制剂包括:①微生物及其制剂:如卡介苗(BCG)、短小棒状杆菌、溶血性链球菌(OK432)、混合细胞疫苗(MBC)、白喉杆菌、鼠伤寒杆菌等.②化学制剂:左旋咪唑、阿杀咪松等.③某些中草药:如人参、黄芪、刺五加、灵芝、党参、大蒜、黄芩、黄连、鱼腥草、蒲公英等.
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抗伤寒杆菌Fe-SOD血清对鼠伤寒杆菌攻击小鼠的免疫保护作用
目的:制备兔抗伤寒杆菌Fe-SOD血清,并研究其对鼠伤寒杆菌攻击小鼠的免疫保护作用,探讨SOD与沙门氏菌致病性的关系.方法:用纯化的伤寒杆菌Fe-SOD免疫家兔,制备兔抗SOD血清,并用ELISA法检测抗血清效价;免疫电泳、双向琼脂扩散试验和抗血清对酶活性抑制试验检测抗血清的特异性.将所制备的抗血清与鼠伤寒杆菌混合,放37℃30 min,经腹腔注入小鼠体内,并观察3 d和7 d小鼠的存活情况,以确定抗血清的免疫保护作用.结果:抗血清的ELISA效价为1:10240,免疫电泳结果显示抗血清与纯化的伤寒杆菌Fe-SOD及无细胞溶解物在相同位置各只形成一条沉淀线;双向琼脂扩散试验结果显示抗血清不与牛红细胞SOD形成沉淀线,但抗血清对酶活性抑制试验结果显示抗血清可抑制24.92%的红细胞SOD活性,说明伤寒杆菌Fe-SOD与牛红细胞SOD有低度交叉反应.抗血清可抑制42.58%~73.38%的沙门氏菌无细胞溶解物中SOD活性.经抗血清处理过的5LD50鼠伤寒杆菌攻击的小鼠3 d和7 d的存活率分别为90%和60%,均明显高于对照组(P<0.01或P<0.05).结论:抗伤寒杆菌Fe-SOD血清对受鼠伤寒杆菌攻击的小鼠具有交叉免疫保护作用,SOD可能是沙门氏菌共同的保护性抗原.提示SOD与沙门氏菌的致病性有关.
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幽门螺杆菌尿素酶B亚单位基因在减毒鼠伤寒杆菌中的表达
目的制备能表达幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)的减毒鼠伤寒杆菌,初步确定其是否可用作抗Hp的口服疫苗.方法应用PCR扩增HpUreB基因片段,测序后克隆入原核表达载体PTc01,转化LB5000修饰后再转化SL3261,得到重组的减毒鼠伤寒杆菌SL3261/PTc01-UreB.应用抗Hp菌体蛋白兔血清行Western-blot检测UreB在SL3261中的表达.SL3261/PTc01-UreB在LB培养基上连续传代60代以确定其稳定性.结果从Hp基因组PCR扩增出1700bp片段,测序为UreB基因序列.酶切及PCR鉴定提示PTc01-UreB原核表达载体的构建以及转化减毒鼠伤寒杆菌SL3261是成功的.Western-blot显示SL3261/PTc01-UreB表达约61KD的蛋白,与HpUreB亚单位相符.体外连续培养60代未见PTc01-UreB质粒丢失及其对宿主菌的毒性.结论减毒鼠伤寒杆菌SL3261/PTc01-UreB表达的UreB蛋白具有免疫原性,有望用作抗Hp感染的口服疫苗.
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沙眼衣原体重组口服活疫苗的体液免疫学特性
目的 检测所构建的沙眼衣原体(Ct)重组疫苗株口服免疫小鼠后,产生的体液免疫应答. 方法 将所构建的重组菌以 5×108菌落形成单位(CFU)/只的剂量,口服免疫雌性BALB/c小鼠,随机分为7组,每组3只. 于免疫后第2,7,14, 21,28,35和42 d各取1组,采集血清、小肠肠腔冲洗液和阴道冲洗液标本. 分别以D型Ct和 鼠伤寒杆菌临床分离株为抗原,检测各组血清、小肠冲洗液和阴道冲洗液标本中特异性IgG,IgA和IgM. 取抗D型Ct血清IgG阳性标本和阴道冲洗液IgA阳性标本,分别用于检测与C型Ct的交叉反应. 结果 在血清标本中,有抗D型Ct和抗鼠伤寒杆菌特异性IgG和IgM,在小肠冲洗液和阴道冲洗液标本中有抗上述两种抗原特异性IgG和IgA. 抗D型Ct IgG阳性血清标本和IgA阳性阴道冲洗液标本与C型Ct均有交叉反应. 结论 所构建的疫苗株免疫小鼠后,能够诱导Ct特异性IgG及IgA产生.(潘伯荣)