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全人源肝癌噬菌体单链抗体库的鉴定及筛选
目的:对全人源肝癌噬菌体单链抗体库进行鉴定,筛选肝癌抗体,同时对抗体的活性进行鉴定.方法:PCR鉴定阳性重组菌TG1中人肝癌ScFv的插入率.先以人成纤维细胞黏附后再以肝癌细胞SMMC-7721为抗原对所建抗体库进行3轮"黏附-洗脱-扩增"的亲和筛选.将筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定;通过ELISA法鉴定其与人肝癌细胞的结合活性.结果:ScFv基因插入率为70%.在亲和筛选过程中,肝癌噬菌体单链抗体得到富集,收获率逐轮得到提高,第3轮为第1轮的214倍.筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定后,均可检测到目的基因.得到3株特异性肝癌单链抗体.结论:利用噬菌体抗体库技术结合减数筛选得到了肝癌噬菌体单链抗体及其基因,且筛选后的抗体片段与人肝癌细胞有特异性的结合活性.
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猪带绦虫双歧杆菌表达系统pGEX-TSOL18/B.longum的构建及鉴定
通过全基因合成猪带绦虫TSOL18基因,将该基因定向克隆至大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1 λT中,构建重组质粒pGEX-TSOL 18,电穿孔法将该质粒导入长双歧杆菌(Bifidob ac te rium longum),构建猪带绦虫双歧杆菌表达系统pGEX-TSOL18/B.longum,并通过酶切、PCR和测序鉴定.全基因合成了393 bp的TSOL18基因片段.酶切、PCR和测序鉴定结果证明猪带绦虫双歧杆菌表达系统pGEX-TSOL18/B.longum构建成功.
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弓形虫致密颗粒蛋白GRA8的原核表达分析
构建弓形虫GRA8的原核重组表达质粒,分析其表达状况.采用PCR技术扩增GRA8及其截短型片段的基因序列,经克隆后,亚克隆至原核表达载体中,构建GRA8及其截短型片段的重组表达质粒,分析GRA8的表达;将各重组菌进行诱导,从其裂解上清中纯化目的蛋白.GRA8基因被正确插入原核表达质粒中;原核重组表达质粒在大肠杆菌中表达GRA8的水平低,几乎无完整GRA8的表达;纯化的截短型GRA8能被弓形虫感染兔血清识别.GRA8的原核重组表达质粒表达GRA8的水平低,纯化的截短型GRA8具有良好的免疫活性.
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重组工业红色糖多孢菌优化红霉素发酵液组分
本文对代谢工程改造红色糖多孢菌ZL1004进行了摇瓶发酵试验,摇瓶发酵结束时重组菌红霉素生物效价与工业生产菌HL3168相比提高20%.红霉素A组分比例由84%提高到94%,红霉素A浓度3.98mg/ml,相比出发菌3.25mg/ml提高22%,重组菌中红霉素B、C与出发菌相比分别减少了51%和58%,实现了红霉素组分的优化.对重组菌摇瓶发酵过程生理代谢进行了初步的研究,表明重组菌生理代谢特性与原出发菌没有明显差异.对重组菌发酵过程中红霉素组分的变化规律进行分析,发现红霉素A、B、C组分的变化规律与eryK和eryG基因转录水平能较好地对应.
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沙眼衣原体重组口服活疫苗的体液免疫学特性
目的 检测所构建的沙眼衣原体(Ct)重组疫苗株口服免疫小鼠后,产生的体液免疫应答. 方法 将所构建的重组菌以 5×108菌落形成单位(CFU)/只的剂量,口服免疫雌性BALB/c小鼠,随机分为7组,每组3只. 于免疫后第2,7,14, 21,28,35和42 d各取1组,采集血清、小肠肠腔冲洗液和阴道冲洗液标本. 分别以D型Ct和 鼠伤寒杆菌临床分离株为抗原,检测各组血清、小肠冲洗液和阴道冲洗液标本中特异性IgG,IgA和IgM. 取抗D型Ct血清IgG阳性标本和阴道冲洗液IgA阳性标本,分别用于检测与C型Ct的交叉反应. 结果 在血清标本中,有抗D型Ct和抗鼠伤寒杆菌特异性IgG和IgM,在小肠冲洗液和阴道冲洗液标本中有抗上述两种抗原特异性IgG和IgA. 抗D型Ct IgG阳性血清标本和IgA阳性阴道冲洗液标本与C型Ct均有交叉反应. 结论 所构建的疫苗株免疫小鼠后,能够诱导Ct特异性IgG及IgA产生.(潘伯荣)