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非编码RNA在动脉粥样硬化性心脏病中的研究进展
哺乳动物基因组存在有大量不编码蛋白质的RNA序列,称为非编码RNA(ncRNA),起初被认为基因组学的暗物质,但近年来研究提示,非编码RNA可从多个生物学层面实现对基因表达的调控,并与多种疾病密切相关.小分子RNA(microRNA)和长链非编码RNA(IncRNA)是隶属于ncRNAs的主要组成部分并成为研究热点,可从炎性反应、细胞增殖等多方面调控动脉粥样硬化性疾病的病理生理进程;二者均可稳定表达于外周血并具有组织表达特异性,是可靠的生物学标志物,可作为疾病诊断、治疗及判断预后的靶点.此外,ncRNAs或可从基因水平揭示中医证型的物质基础,为中医证型的鉴别和诊断提供客观的证据支持.本文从ncRNAs的来源、分类、作用机制、在动脉粥样硬化性心脏病中的研究进展及其作为生物学标志物的临床应用进行综述,以阐释ncRNAs在心血管疾病中潜在的生物学机制和应用前景.
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地中海贫血的分子机制及其相关microRNA表达调控的研究进展
地中海贫血是一种典型的常见的单基因遗传病,在地中海区域、东南亚及我国南方地区高发,目前国内外治疗方法有限.MicroRNA是一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,在转录和转录后水平调控靶基因的表达,广泛参与了动物体内包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等.近年来,miRNA在地中海贫血等疾病过程中的表达隋况和发挥的作用也逐渐揭示,本文就地中海贫血的分子机制及其相关microRNA表达调控的研究进展进行综述.
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非编码小RNA分子BSR1350在羊布鲁菌适应环境压力和毒力中的作用
[目的]探寻非编码小RNA分子BSR1350在羊布鲁菌适应环境压力和毒力中的作用.[方法]通过RT-PCR检测BSR1350在酸、营养缺乏、氧化应激等模拟巨噬细胞内环境的不同压力条件下的转录情况;采用融合PCR的方法构建BSR 1350的缺失突变株,同时构建其回复株;比较布鲁菌野生株16M、BSR1350缺失突变株和过表达株在模拟巨噬细胞内环境条件下以及小鼠体内的生存能力.[结果]BSR1350位于羊布鲁菌16M Ⅰ号染色体的反义链上,在模拟巨噬细胞内环境的应激条件下表达明显增加.BSR1350缺失后,布鲁菌抵抗高渗、氧化压力、热应激及酸性环境的能力明显下降,小鼠脾脏内的细菌载量显著下降,表明BSR1350与布鲁菌的胞内生存能力和毒力相关.[结论]非编码小RNA BSR1350在羊布鲁菌适应环境压力和毒力中起着重要作用.
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MicroRNAs与肿瘤
microRNA(miRNA)是一类对基因具有调控功能的内源性非编码小分子RNA,通过与靶mRNA完全或不完全互补配对,引起mRNA降解或翻译抑制,从而对基因转录后水平进行调控.目前认为miRNA在多种生物学过程中起着至关重要的作用,包括细胞增殖、分化、凋亡等.研究显示miRNA的表达异常能导致疾病甚至肿瘤的发生,有类似于抑癌基因或癌基因的功能.本文就miRNA在肿瘤发生和诊断方面的研究进展作一综述.
关键词： MicroRNA(miRNA) 非编码小RNA 肿瘤 -
MicroRNA与肿瘤
microRNA是一类对基因具有调控功能的内源性非编码小分子RNA,它通过与靶mRNA完全或不完全的互补配对,促进目标mRNA降解或抑制蛋白翻译,在细胞增殖、分化、凋亡、基因调控及疾病的发生中发挥重要的作用,而miRNA突变、缺失或表达水平的异常与人类肿瘤密切相关,具有与癌基因或抑癌基因相似的作用,从而促进或抑制肿瘤的发生、发展.
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神经胶质瘤中microRNA的研究进展
近年来神经胶质瘤的治疗正寻找新的途径,研究发现非编码小RNA(microRNA,miRNA)参与了与肿瘤相关的所有过程,包括增殖、凋亡、转移、血管生成、免疫应答等,通过抑制信号网络中特定分子表达,发挥促癌或抑癌作用;某些miRNA可以分泌至外周血血清参与循环,这些为神经胶质瘤分子靶向治疗及诊断预后提供基础.本文就近几年来神经胶质瘤中新发现的、且报道较多的miRNA进行综述.
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精子非编码小RNA介导获得性状跨代遗传的研究进展
人类精子RNA的存在已被证实,其在改变早期胚胎事件中发挥着重要作用.近年来的研究表明,父代饮食结构、应激状态等环境暴露因素可以改变非编码小RNA表达水平,从而作为父代遗传信息传递的携带者及表观遗传的标记物,改变早期胚胎发育和子代生长状况,介导获得性状的跨代遗传,这从非编码小RNA的角度,为精子表观遗传学研究提供了新的靶点.在众多研究中,精子piRNA、microRNA、tRNA的研究成果尤为显著,其广泛存在于雄性生殖细胞中,可通过相应的调控机制,介导获得性状的跨代遗传.本文将着重阐述上述3种非编码小RNA在精子表观遗传学研究中所取得的进展,为男性生殖医学研究提供新的视野.
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非编码小RNA T64对伤寒沙门菌基因表达的影响
目的:对由转录组测序获得的伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar Typhi,S.Typhi)非编码小RNA(small non-coding RNA,snRNA) T64的表达进行验证,并对其功能进行初步探讨.方法:选取特异性引物采用反转录PCR(RT-PCR)和普通PCR确认T64在S.Typhi中的表达;将含有T64 snRNA序列的重组质粒导入S.Typhi野生株构建T64高表达株;结合应用S.Typhi全基因组芯片分析技术,比较S.Typhi T64高表达株和空载体对照株在对数期基因表达谱差异,并对部分基因芯片结果进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证.结果:RT-PCR结果显示,snRNA T64在S.Typhi确有表达;基因芯片分析结果显示,与空载体对照株比,snRNA T64高表达株在对数期有20个基因表达上调,7个下调;4个被选基因表达的qRT-PCR结果与芯片分析结果相符.结论:snRNA T64在S.Typhi中表达,可能在基因的表达调节中发挥重要作用.
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布鲁氏菌非编码小RNA BSR1526突变株与过表达株的构建及毒力研究
目的 为探讨非编码小RNA BSR1526在布鲁氏菌胞内生存中的作用,构建BSR1526突变株与过表达株并分析它们在模拟胞内环境和小鼠体内的存活能力.方法 首先采用Northern blot和RT-PCR验证布鲁氏菌16M在体外刺激条件中BSR1526的转录;然后采用融合PCR构建BSR1526缺失株;将BSR1526插入到质粒pBBR1-MCS4中,电转入16M中构建过表达株16M-BSR1526;后分析BSR1526缺失株和过表达株在模拟胞内环境以及小鼠体内的存活力.结果 BSR1526在布鲁氏菌16M中存在转录,且在不同刺激条件下转录水平不同.BSR1526缺失或过表达影响了布鲁氏菌16M在体外的生长能力,缺失后在热应激、氧化压力及酸性环境下的生存能力下降,在小鼠脾脏内的细菌数量显著下降,表明BSR1526影响了布鲁氏菌的毒力.结论 非编码小RNA BSR1526影响着布鲁氏菌16M在胞内生存能力,缺失BSR1526后布鲁氏菌16M抵抗外界不良环境的能力下降,同时在小鼠体内的毒力下降.
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非编码小RNA与黑色素瘤
非编码小RNA主要包括微小RNA、小干扰RNA及与PIWI蛋白相作用的RNA.研究表明,非编码小RNA在表观遗传学的调控中扮演了越来越重要的角色.非编码小RNA在基因转录、基因转录后、mRNA翻译等多种水平参与了基因表达的调控,与人类多种疾病,特别是与黑色素瘤的诊断、治疗和预后评估密切相关.
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下调miR-214对鼻咽癌CNE2细胞凋亡的影响
目的:研究miR-214对鼻咽癌细胞CNE2凋亡的影响及机制.方法:RT-PCR检测鼻咽癌细胞CNE2和正常鼻咽上皮细胞NP69细胞中miR-214的表达;通过miR-214 inhibitor转染鼻咽癌细胞CNE2,流式细胞仪(FCM)检测鼻咽癌细胞凋亡变化;并用Western印迹法检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白的表达变化.结果:正常鼻咽上皮细胞明低表达miR-214,而鼻咽癌CNE2细胞中明显高表达miR-214(P＜0.05),miR-214 inhibitor可浓度依赖性的抑制miR-214的表达(P＜0.05).40μmol/L和5μmol/L的miR-214 inhibitor组细胞凋亡率分别为:(45.3±9.1)％和(12.3±3.8)％,而NC inhibitor组细胞的凋亡率为(5.1±0.4)％.miR-214 inhibitor可下调Bcl-2的表达(P＜0.05),对Bax的表达无明显影响.结论:miR-214可能通过下调Bcl-2的表达从而诱导CNE2细胞凋亡,这可能为鼻咽癌的治疗提供新靶点.
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寄生原虫microRNA研究进展
miRNA是一类非常重要的非编码小分子,作为RNA干扰(RNAi)中的一个重要元件能够在生物体中通过对mRNA表达的控制在转录后水平上对调节众多基因起到负调控作用.在研究多个物种microRNA的功能时,人们发现miRNA的表达具有时序性和组织特异性,提示其在特定功能基因的表达方面可能发挥着重要的调控作用.本文就miRNA的研究进展作一综述.
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环境胁迫下细菌非编码小RNA对基因表达的调控
细菌非编码小RNA(sRNA)是长度约为50~500个核苷酸的RNA分子,其编码基因位于基因间区域,在细菌基因组中可被转录但不被翻译为蛋白质.随着生物信息学和RNA测序技术的发展,sRNA功能受到广泛关注.在不断变化的环境中,细菌遇到各种各样的生存压力,sRNA通过感应环境变化调节相应基因的表达,在细菌适应环境的过程中发挥了重要作用.本文对环境胁迫下细菌sRNA的表达变化和其对基因的表达调控进行综述,揭示sRNA对细菌基因转录后调控、生物适应性进化等生命过程的重要意义.
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piRNA在生殖系统中的功能研究进展
piRNA(Piwi-interacting RNA)是2006年发现的一种新的小RNA,长度约24到30个核苷酸,其作用与Dicer酶无关,与Piwi蛋白家族成员相结合才能发挥作用.目前研究piRNA的功能都基本限定在生殖细胞中,近来研究表明piRNA对于生殖细胞功能的很多环节有巨大的影响,而且对生殖支持细胞的影响的研究也有了进展.本文就piRNA在生殖系统中的功能的研究进展作一综述.
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生物素标记探针-液相杂交-非变性PAGE检测非编码小RNA方法的建立和优化
目的 建立生物素标记探针-液相杂交-非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测非编码小RNA(sRNA)的方法.方法 将生物素标记的sRNA U6寡核苷酸探针经非变性PAGE电泳后转印至尼龙膜上,然后用辣根过氧化物酶(HRP)耦联链霉亲和素进行检测.从细胞中提取总RNA,用已标记U6探针优化液相杂交退火条件及杂交缓冲液;用建立的方法 检测并计算BEAS-2B、A549细胞中sRNA U6与miRNA145的含量.结果 将Biotin-11-dUTP成功标记至寡核苷酸上,随着寡核苷酸浓度增加,检测信号强度越强,10 μmol/L时达到强.采用水浴反应条件与采用聚合酶链反应(PCR)仪梯次降温反应条件下得到的杂化链无明显差异;以磷酸盐缓冲液作为杂交缓冲液优于Tris-HCl、DEPC水;BEAS-2B、A549细胞5 μg RNA中U6含量接近;BEAS-2B细胞中miRNA145绝对含量高于A549细胞.结论 成功建立并优化了sRNA检测新方法,为简单、易行、可靠地检测sRNA提供了可能.
关键词： 非编码小RNA 生物素化探针 液相杂交 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 -
双功能基因APE1调控人骨肉瘤HOS细胞miRNAs的初步研究
目的 比较APE1-konckdown骨肉瘤HOS细胞miRNAs表达谱的差异,初步探讨APE1可能调控的miRNAs及其涉及的功能通路.方法 利用Ad5/F35-APE1 siRNA腺病毒敲低骨肉瘤HOS细胞中APE1的表达,采用miRNA芯片检测敲低组和对照组miRNAs表达谱的改变,qRT-PCR验证,并利用生物信息学分析差异miRNAs涉及的功能.结果 miRNAs芯片结果显示,APE1敲低组中有32个miRNAs表达显著改变;qRT-PCR验证有13个miRNAs的改变与芯片结果趋势一致,其中7个上调,6个下调;基因聚类分析发现,13个显著变化的miRNAs涉及的靶基因的功能主要定位在细胞内,与蛋白、DNA结合以及转录功能有关,参与调控发育和细胞代谢等生物过程;Pathway分析显示其靶基因主要涉及粘附连接、轴突导向、ECM-受体相互作用、肿瘤通路,以及TGF-β、MAPK、ErbB、Wnt、mTOR及p53等关键的细胞信号通路.结论 APE1能直接影响骨肉瘤细胞miRNAs的表达;生物信息学分析表明APE1通过调控miRNAs可能影响下游靶基因的表达,参与肿瘤发生、细胞生存、增殖、粘附等生物学过程和多个信号通路,与骨肉瘤的发生、发展、侵袭转移密切相关.
关键词： 脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶 非编码小RNA 生物信息学 骨肉瘤 -
微小RNA研究进展
微小RNA(miRNA)是参与基因转录后水平调控的非编码小分子RNA.人类基因中大约有3%编码miRNAs,而编码蛋白的基因中30%受到miRNAs的调控.miRNAs在多种生物进程中起到关键作用,包括调节发育、细胞增殖、分化和凋亡,相应的miRNAs的表达变化与包括肿瘤在内的多种疾病有关.本文综述miRNAs的生物学及其与肿瘤的联系,并讨论了miRNAs的研究方法.
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细菌非编码小RNA对细菌毒力的调控作用
在病原菌与宿主长期的交互作用过程中，病原菌可通过调节相关基因的表达响应宿主微环境的变化，以适应宿主内环境并在宿主体内生存。过去认为，细菌的基因表达调控主要发生在转录水平。近年发现，细菌非编码小RNA（sRNA）在调控细菌致病机制方面发挥着重要作用。细菌sRNA是一类长度在50~500个核苷酸之间的非编码RNA，病原菌可感受宿主微环境的变化，通过sRNA调控自身毒力相关基因的表达，促进致病菌在宿主内的生存能力，利于致病菌对宿主的侵袭及致病。相对于各种转录因子，sRNA介导的基因表达调控可使细菌更快速、灵敏地对外界环境变化作出应答。目前已发现多种与细菌毒力及致病性相关的sRNA，可在转录后水平精细调节细菌毒力及其致病机制。本文就sRNA调控细菌毒力的分子机制及其在常见病原菌致病过程中的作用进行综述。
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lncRNA调控miRNA的表达促肿瘤效应的研究进展
癌症是21世纪以来威胁人类的主要健康杀手,近年的统计数据表明,癌症新发病例和死亡病例不断增加,其中癌症死亡人数前3位依次为肺癌(160 000人)、肝癌(745 000人)和胃癌(723 000人)[11].长链非编码RNA(lncRNA)是一类转录长度超过200个核苷酸残基的非编码RNA,其本身不含有独特的开放阅读框,以RNA的形式在不同水平调节基因的表达程度.微小RNA (miRNA)是另一类特殊类型的非编码RNA,其作用主要在RNA的沉默中引导分子.针对大多数蛋白编码转录物,miRNA参与动物几乎所有的发育和病理过程,其失调与许多人类疾病,尤其是癌症有关[2].进一步研究发现,lncRNA可通过竞争性结合miRNA,抑制miRNA表达及其对下游靶基因的负向调控作用[3].干扰lncRNA的表达或诱导miRNA的过表达,能抑制肿瘤增殖、侵袭、迁移和促进肿瘤细胞凋亡,为肿瘤治疗提供新思路和方向.
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日本血吸虫非编码小RNA研究进展
非编码小RNA是一类通过调节基因的表达从而影响生命活动的小分子,主要包括微小RNA、内源性小干扰RNA、Piwi蛋白相互作用的RNA及竞争性内源RNA。研究发现日本血吸虫感染动物后,宿主和虫体的非编码小RNA的表达水平均发生了改变。宿主源的非编码小RNA主要为微小RNA,其中miR-454和miR-203与日本血吸虫病发生发展有关,miR-223和miR-451与日本血吸虫自身生长发育有关；日本血吸虫非编码小 RNA包括微小RNA、内源性小干扰RNA,这些非编码小RNA在日本血吸虫的生长、发育、性成熟及产卵中发挥着重要作用,如sja-let-7、sja-bantam,而且像sja-miR-3479和sja-miR-0001还可以诊断日本血吸虫病。就日本血吸虫非编码小RNA的研究进展进行综述,为日本血吸虫病的防治提供参考。
