首页 > 文献资料
-
COX-2选择性抑制剂治疗疼痛的研究进展
传统非甾体类抗炎药(non-steroid anti-inflammatory drugs,NSAIDs)被广泛用于疼痛和炎症治疗,但这类药物的胃肠道副作用限制其使用.环氧化酶-2 (cyclooxygenase,COX-2)选择性抑制药既有一定的消炎镇痛作用,也能减少胃肠道不良反应,广泛应用于类风湿性关节炎、骨性关节炎和围手术期疼痛.然而,一些研究证实COX-2选择抑制剂会增加心血管疾病的发生率,其临床应用应该结合患者的个体情况进行仔细评估和分析药物的风险.本文将对COX分类、COX-2选择性抑制剂的机制、临床应用及安全性进行综述.
关键词： 环氧合酶 COX-2选择性抑制剂 非甾体抗炎药 疼痛 药物不良反应 -
在急性炎症临床模型,对乙氨基酚可选择性抑制外周前列腺素E2的释放以及促进COX-2基因的表达
非类固醇类消炎药的止痛能力决定于对环氧合酶(COX)的抑制作用,COX酶存在两种异构体,COX-1是生理性酶,调节生理过程.而COX-2是诱导酶,诱导产生促炎症反应的PG,以参与各种生理应激如感染和炎症反应.
-
环氧合酶-2表达与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病
目的:探讨环氧合酶-2(COX-2)表达与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)相关性胃十二指肠疾病的关系,并通过抗菌治疗评价根除Hpylori感染对胃窦黏膜中COX-2表达的影响.方法:用免疫组化方法半定量检测264例经胃镜和组织病理学检查患有十二指肠球部溃疡、胃溃疡、复合性溃疡、胃癌、单纯性慢性胃炎及胃黏膜正常者的胃窦黏膜COX-2蛋白的表达,比较Hpylon感染与非感染者之间的差异.对检出的35例Hp+的单纯慢性胃炎进行Hpylori抗菌根除治疗,比较根除前后胃窦黏膜COX-2蛋白的表达变化.根据2000-05全国慢性胃炎研讨会共识意见(江西.井冈山)对胃黏膜炎症、活动性、异型增生、肠化生和Hpylori密度进行半定量测定.结果:胃黏膜表面上皮、腺上皮细胞和固有层间质细胞的胞质中可见COX-2蛋白表达,但阳性染色细胞多集中在表层上皮.253例患者中,143例Hp+者(56.5%)COX-2平均阳性细胞率显著高于110例Hp-者(43.5%,P=0),各疾病组Hp+患者的COX-2平均阳性细胞率均显著高于Hp-者(P=0),各疾病组Hp-患者COX-2平均阳性细胞率也均显著高于正常对照组(P＜0.05).27例Hpylori根除后的胃黏膜COX-2平均阳性细胞率明显下降(P=0),但仍明显高于正常对照组(P=0).不同程度胃炎间、以及活动性胃炎与非活动性胃炎之间胃窦黏膜COX-2平均阳性细胞率均有显著差异(P=0),与正常对照组比较,慢性胃炎仅伴有活动性75例,异型增生5例,肠化生13例的胃窦黏膜COX-2阳性细胞率明显增加,并以异型增生组高.COX-2表达与Hpylori感染密度和慢性炎症程度密切相关,分别为(rs=0.780,P＜0.01;rs=0.686,P＜0.05).结论:Hpylori感染导致胃黏膜COX-2表达升高,且与Hpylori感染密度、炎症程度密切相关.根除Hpylori后COX-2明显下降,但仍明显高于正常对照组,Hp-的各种胃十二指肠疾病的胃黏膜COX-2表达也较正常对照组高;肠化生和异型增生的COX-2表达均明显升高,推测COX-2表达升高与良恶性胃十二指肠病的发生发展有密切关系.
-
选择性环氧合酶-2抑制剂PC407对TNBS诱导的大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用
目的:观察新型选择性环氧合酶-2抑制剂PC407对2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid,TNBS)诱导的大鼠溃疡性结肠炎的疗效并探讨其机制.方法:应用TNBS/乙醇灌肠复制大鼠溃疡性结肠炎模型,实验设正常对照组、模型对照组、塞来昔布阳性对照组(18 mg/kg)和PC407治疗组(9,18 mg/kg),ig给药,每天1次,共6 d,观察稀便出现情况.实验第7天,麻醉大鼠,分离大鼠结肠、脾脏、胸腺,观察各组实验动物体质量变化及结肠组织病理学改变,选用稀便率、结肠指数、溃疡比、胸腺指数和脾脏指数作为衡量治疗效果的指标,采用免疫组织化学方法检测结肠黏膜环氧合酶-2(COX-2)和肿瘤坏死因子a(tumor necrosis factor-alpha,TNF-a)的变化.结果:与模型组相比,18 mg/kg PC407治疗可明显阻止结肠炎大鼠的体质量下降(258.9 gvs 223.6 g,P＜0.05),降低稀便发生率(30% vs80%.P＜0.01),改善大鼠结肠组织损伤及病理学改变,包括降低结肠指数(5.03±1.26 mg/gvs 7.60±2.07 mg/g.P＜0.01)及溃疡比(24.69%±2.83% vs 36.13%±9.64%,P＜0.01);同时,PC407治疗可对抗结肠炎症引起的胸腺萎缩(1.964-0.48 mg/g vs 1.08±0.32 mg/g,P＜0.01)和脾脏肿大(2.85±0.33 mg/g vs 3.87±0.96mg/g,P＜0.01),显著降低结肠炎大鼠结肠黏膜COX-2和TNF-a的阳性表达率(30.6%±7.0%vs 67.4%±1.2%,19.5%±3.0% vs 52%±4.7%,P＜0.01).9 mg/kg PC407也可以改善以上指数,只是作用没有18 mg/kg明显.结论:PC407对TNBS/醇诱导的大鼠溃疡性结肠炎治疗作用良好,其机制可能通过下调COx-2及TNF-a的表达,从而缓解结肠炎症.
-
莪术对SGC7901胃癌细胞COX-1,COX-2,VEGF和PGE2表达的影响
目的:观察莪术对人胃癌SGC7901细胞COX-1,COX-2,VEGF和PGE2的影响.方法:MTT法观察莪术对胃癌细胞的抑制作用,绘制其抑制率曲线,选取抑制率为25%时的药物浓度作为加药浓度,用RT-PCR以及Western blot方法检测加药后人胃癌细胞COX-1,COX-2基因及其蛋白表达的变化.用ELISA方法检测加药后培养基中VEGF和PGE2的表达情况.结果:莪术对胃癌细胞有一定的抑制作用,且随着浓度的增加,其抑制作用加强;将RT-PCR产物经电泳分析,证实胃癌细胞中有COX-1、COX-2基因的表达,对各条带进行灰度分析发现:中西药对COX-1和COX-2均有抑制作用,莪术对COX-2的抑制作用大于塞来昔布;Western blot曝光结果可见,COX-1各组在70 kDa处可见特异性的蛋白条带,COX-2各组在80 kDa处可见特异性的蛋白条带.对各条带进行灰度分析发现:各组中西药对COX-2均有明显的抑制作用,而对COX-1则无抑制作用,其中,莪术对COX-2的抑制作用要强于celecoxib;西药celecoxib及莪术组可明显降低人胃癌细胞VEGF的表达,与细胞组相比,其差别有统计学意义(91.0±18.2,127.8±12.1 ng/L vs 162.0±15.1 ng/L,P＜0.01);西药celecoxib组PGE2表达低于细胞组,但其差别无统计学意义,莪术可明显降低人胃癌细胞PGE2的表达,与细胞组相比,其差别有统计学意义(67.5±6.9 ng/L vs 78.7±5.6 ng/L,P＜0.01).结论:莪术可能是通过抑制COX-2及其下游PGE2表达,使VEGF表达下调而抑制肿瘤.
-
利用组织芯片技术研究COX-2在胃癌中的表达及其与血管生成的关系
目的:研究COX-2在胃癌中的表达及其与血管生成的关系,探讨其在胃癌转移中的作用及与胃癌病理生物学行为的关系.方法:采用EnVision方法检测胃癌组织芯片中COX-2的表达,用CD34进行微血管内皮细胞染色,计算微血管密度(MVD),分析其相关性.结果:COX-2在胃癌中的表达明显高于正常胃黏膜(P=0.001).COX-2的高表达与胃癌的转移(P=0.019)和胃壁浸润深度(0.031)呈正相关,与胃癌的组织病理分型无关(P=0.495),与Borrmann分型无关(P=0.109)组织MVD(65.49±20.64)明显高于正常胃黏膜组织(36.21±18.47,P=0.001).MVD值与胃癌的组织病理分型(P=0.003)和转移有关(P=0.043),与胃癌胃壁浸润深度(P=0.627)和Borrmann分型(P=0.634)无明显相关性.COX-2表达阳性组的MVD指数明显高于COX-2表达阴性组(68.59±19.8vs 25.82±7.76,P＜0.05),COX-2表达与MVD呈正相关(P=0.001).结论:组织芯片技术对于快速检测胃癌及其他肿瘤的分子病理学改变是一个强有力的工具.COX-2表达可能通过促进血管形成对胃癌的发生、发展起重要作用,其可作为判断预后和指导治疗的有效指标.
-
环氧合酶-2反义核酸对人胆管癌细胞增生的影响
目的:用反义环氧合酶-2(COX-2)重组载体转染COX-2高表达人胆管癌细胞QBC939,观察其对QBC939细胞的生长抑制作用,并探讨其作用机制.方法:通过脂质体介导将COX-2反义核酸质粒转入QBC939细胞,经G418筛选获得稳定表达COX-2反义核酸的胆管癌转染细胞模型.采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测转染前后QBC939细胞COX-2 mRNA表达的变化,应用免疫细胞化学链霉亲合素-生物素复合物(SABC)技术检测转染前后QBC939细胞COX-2蛋白表达水平的变化,应用四唑氮蓝(MTT)比色法检测COX-2反义核酸对QBC939细胞增生的影响,应用流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡.结果:反义COX-2基因转染后胆管癌细胞中COX-2 mRNA表达水平明显下调,COX-2蛋白表达减弱.转染反义COX-2重组载体的QBC939细胞生长速率明显下降(P＜0.01),细胞周期分析转染后细胞比转染前细胞增生指数显著下降(P＜0.01),S期细胞比例为9.27±1.91%,比转染前(16.35±2.87%)明显降低(P＜0.05),G0/G1期细胞比例为75.16±4.13%,比转染前(57.31±10.16%)明显上升(P＜0.05),细胞被抑制在G0/G1期;COX-2反义核酸转染对QBC939细胞凋亡率无明显影响(P＞0.05).结论:COX-2反义核酸导入可抑制QBC939细胞增生.
-
环氧合酶-2与Barrett食管及其相关腺癌的关系
Barrett食管与食管癌发生有关,尤其是与食管腺癌密切相关,而环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的过表达与Barrett食管及其相关腺癌的发生、发展有关,通过干预治疗有可能阻断其进一步向恶性肿瘤发展.非甾体类消炎药抗肿瘤细胞增生和诱导肿瘤细胞凋亡的作用已引起广泛关注,其抗肿瘤作用机制可能与抑癌基因失活、改变某些与增生及凋亡有关基因表达、影响免疫、促进肿瘤血管生成有关.本文就COX-2与Barrett食管及其相关腺癌的研究进展进行综述.
-
BFGF,BFGFR和COX-2与大肠癌的关系
碱性成纤维细胞生长因子(BFGF),BFGF受体(BFGFR)和环氧合酶-2(COX-2)在大肠癌中的表达增加,他们与大肠癌的相关性越来越受到人们的关注.但其确切机制仍然不清楚.现就BFGF,BFGFR及COX-2的结构与功能,及其在大肠癌的表达及促癌机制等方面进行综述.
-
肝细胞癌的病因及化学预防
肝细胞癌是世界上常见的恶性肿瘤之一.即使是在外科切除这样的根治疗法之后,其复发率还极高.肝炎病毒,黄曲霉毒素,酒精,饮水污染和遗传因素是其主要病因.能通过化学预防限制这种趋势吗?癌的化学预防,可定义为用特定的天然或合成的化学制剂去倒转、抑制阻止侵袭性的癌的发生,作为一种癌控制的新方法而获得显著成效.现综述维甲酸类、干扰素、奥替普拉、环氧合酶2抑制剂、硒、姜黄素及叶绿酸在肝细胞癌化学预防中的作用.化学预防是肿瘤学中出现的一个新领域,在这个领域基础和临床的研究者都面临极大的挑战.
-
COX-2及其抑制剂在Barrett食管及食管腺癌发生发展中的作用
大约有10-30%Barrett食管发展成食管腺癌,其危险性与Barrett食管上皮不典型增生程度相关.大量研究表明环氧合酶-2(COX-2)的过度表达与胃肠道肿瘤发生发展密切相关.Barrett食管发展成食管腺癌的COX-2免疫活性较未发展成食管腺癌的高.试验指出选择性的COX-2抑制剂可降低Barrett食管上皮的增生,减低COX-2的活性,减少食管腺癌的发生率.本文就COX-2在Barrett食管及食管腺癌发生发展中的作用及选择性的COX-2抑制剂在降低二者发生率的机制做一综述.
-
环氧合酶抑制剂在肝癌预防和治疗中的研究进展
研究显示在许多肿瘤中, 环氧合酶(COX)2及其产物过度表达. 非甾体类抗炎药可以抑制环氧合酶的活性, 从不同途径达到抑制肿瘤细胞的生长、诱导凋亡, 抑制血管形成、降低肿瘤的侵袭力和转移性. 肝癌是世界常见的恶性肿瘤之一, 预后较差, 形成机制尚未清楚, 其预防和治疗水平有限. 因此找到一种新的抗癌药物并研究其抗肝癌的作用机制,在肝癌的预防和治疗中有重要意义. 本文对COX抑制剂与肝癌形成和肝癌的预防和治疗中进展作一综述.
-
COX-2与胃癌关系的研究进展
环氧合酶2是诱导性酶,在胃癌组织中高表达.主要参与胃癌的血管形成、诱导基因突变、抑制肿瘤免疫、抑制凋亡、改变黏附因子活性,促使肿瘤转移等,对胃癌的发生、发展、预后均起重要的作用.选择性环氧合酶抑制剂具有抑癌作用,有望成为胃癌治疗的基础药物之一.
-
非酒精性脂肪肝病中环氧合酶-2和基质金属蛋白酶的作用
由于人们饮食结构的改变以及预防保健措施的相对滞后,非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的发病率逐年上升.NAFLD的发病过程及其相关因素的研究越来越受到重视.研究表明NAFLD的发生、发展伴随着物质代谢紊乱及肝细胞坏死、炎变和纤维化的形成.大量实验证实环氧合酶-2(COX-2)和基质金属蛋白酶(MMPs)参与了这一过程.
-
环氧合酶-2对酒精性肝损伤大鼠氧化/抗氧化的作用
目的:探讨环氧合酶(COX)-2抑制剂对酒精诱导的肝损伤大鼠氧化/抗氧化系统的作用.方法:应用酒精灌胃法制作酒精性肝损伤大鼠模型,对照组(n=10)玉米油+葡萄糖;损伤组(n=24)酒精+玉米油;处理组(n=24)在损伤组基础上予选择性COX-2抑制剂塞莱昔布(celecoxib).23 d后处死大鼠,测定血浆和肝组织匀浆谷胱甘肽-S转移酶(GST)活性、超氧化歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,血清门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,Western blot法检测各组大鼠肝组织中COX-2蛋白的表达.结果:与对照组相比,损伤组中血清AST、ALT、血浆GST活性和肝组织MDA水平明显升高(196.00±29.52 vs139.78±26.27,59.43±6.00 vs 46.67±10.09,17.56±1.26vs 13.29±4.31,0.562±0.054 vs 0.465±0.062,P＜0.01或P＜0.05),血浆及肝组织SOD活性、肝组织GST活性明显下降(43.969±8.863 vs 57.788±7.587,2.083±0.394 vs2.943±0.321,1.63±0.64 vs 3.54±0.33,P＜0.01).与对损伤相比,处理组血清AST明显下降、血浆及肝组织SOD活性、肝组织GST活性均明显升高(144.00±18.45 vs196.00±29.52,55.547±5.937 vs 43.969±8.863,2.833±0.176 vs 2.083±0.394,3.77±0.32 vs 1.63±0.64,P＜0.01).Western blot显示,肝组织中COX-2表达损伤组较对照组明显升高(0.5 239±0.1 399 vs 0.2 255±0.0 916,P＜0.01),处理组较损伤组降低,而较对照组升高(0.3 769±0.1 798vs 0.5 239±0.1 399,0.3 769±0.1 798 vs 0.2 255±0.0 916,P＜0.05).结论:COX-2的表达与酒精性肝损伤大鼠肝组织抗氧化酶系呈负相关而与脂质过氧化(lipid peroxides,LPO)产物正相关,其抑制剂则可以使酒精性肝损伤大鼠肝组织抗氧化酶系活性升高和LPO减轻,从而对大鼠酒精诱导的肝损伤起保护作用.
-
NSAIDs相关性大鼠小肠黏膜PGE2、COX的表达及药物保护机制
目的:双氯芬酸灌胃建立非甾体类抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drug,NSAID)相关性大鼠小肠黏膜损伤模型,研究大鼠小肠黏膜前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)、环氧合酶-1 (cyclooxygenase l,COX-l)和环氧合酶-2(COX-2)的表达及药物的作用机制.方法:32只♂ Wistar大鼠随机分为空白组、实验对照组、药物干预组(荆花胃康胶丸组、埃索美拉唑组).实验对照组和药物干预组给予双氯芬酸,药物干预组提前ld分别给予荆花胃康胶丸和埃索美拉唑.空白组给予生理盐水.处死大鼠后显微镜下观察大鼠小肠损伤情况,取小肠组织ELISA法检测小肠组织PGE2含量,Western blot法检测小肠组织COX-1、COX-2蛋白表达.结果:与空白对照组相比,实验对照组大鼠小肠大体评分(4.63±0.52 vs 0.00±0.00)明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05)；与实验对照组相比,荆花胃康组、埃索美拉唑组大鼠小肠大体评分(1.88±0.99,2.75±1.28)明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与空白组相比,实验对照组大鼠小肠黏膜PGE2(19.32ng/L±8.22 ng/L vs 36.64 ng/L±3.27 ng/L)明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05)；与实验对照组相比,荆花胃康组、埃索美拉唑组大鼠小肠PGE2(29.51 ng/L±7.61 ng/L; 29.20ng/L±7.51 ng/L)明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).与空白组相比,实验对照组大鼠小肠黏膜COX-1(0.47±0.32 vs 0.78±0.39)明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05)；与实验对照组相比,荆花胃康组、埃索美拉唑组大鼠小肠COX-1(1.29±0.63,1.53±1.00)明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).与空白组相比,实验对照组大鼠小肠黏膜COX-2(1.00±0.72 vs 0.00±0.00)明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05)；与实验对照组相比,荆花胃康组大鼠小肠黏膜COX-2(6.86±9.81)明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05)；与实验对照组相比,埃索美拉唑组大鼠小肠黏膜COX-2(2.59±2.87)增加,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:双氯芬酸可以引起典型的NSAIDs相关性小肠损伤.NSAIDs相关性小肠损伤与PGE2含量降低有关.荆花胃康和埃索美拉唑通过提高小肠黏膜PGE2含量,预防NSAIDs小肠损伤.荆花胃康引起小肠黏膜PGE2含量的升高,可能与其增加小肠COX-1和COX-2含量有关.埃索美拉唑引起小肠黏膜PGE2含量的升高,可能与其增加小肠COX-1含量有关.
-
幽门螺杆菌相关性胃炎中核因子-κB与IL-8,COX-2表达的意义
目的:探讨幽门螺杆菌(Hpylori)感染时胃黏膜组织中核因子-κB(NF-kB)p65蛋白、IL-8及环氧合酶-2(COX-2)mRNA和蛋白的表达间的关系.方法:采集Hpylori阴性慢性胃炎18例和Hpylori阳性慢性胃炎38例患者的胃黏膜活检标本,采用免疫组化法和原位杂交法检测胃黏膜中NF-kB p65蛋白、IL-8及COX-2mRNA和蛋白的表达情况.结果:NF-kBp65,IL-8和COX-2主要表达于胃黏膜上皮细胞,固有层炎性细胞也有不同程度的表达.Hpylori阳性胃黏膜中p65蛋白,IL-8及COX-2 mRNA和蛋白的表达较Hpylori阴性组显著增强(5.6±3.3vs 3.0±2.5,3.7±2.6vs1.1±1.3,3.9±2.9 vs 1.9±1.6,3.0±2.4vs 1.5±1.1,2.8±2.3vs 1.0±0.7,P＜0.01),三者的表达均与胃黏膜炎症程度之间具有显著相关性(P＜0.01);胃黏膜NF-kB p65蛋白表达与IL-8及COX-2 mRNA和蛋白的表达均呈正相关关系(rs分别为0.690,0.709,0.448,0.480,P＜0.01).结论:Hpylori感染导致胃黏膜NF-kB p65,IL-8及COX-2表达增加,NF-kB可能通过调控IL-8和COX-2的表达,参与了Hpylori相关性胃炎的病理生理过程.
-
塞莱昔布对结肠癌细胞生长及肝转移瘤血管生长因子表达的影响
目的:探讨塞莱昔布对体外培养的结肠癌细胞生长及肝转移瘤模型血管生长因子(VEGF)表达的影响.方法:以人结肠癌细胞株HT-29,HCT-116为对象,体外药物敏感实验(MTT)法检测塞莱昔布对肿瘤细胞的增殖抑制效应,流式细胞术检测肿瘤细胞各细胞周期分布变化情况,肿瘤细胞接种裸鼠,观察肝转移瘤VEGF表达情况.结果:塞莱昔布对人结肠癌细胞株生长的抑制作用呈时间、剂量依赖性效应,且对HT-29细胞作用强于HCT-116细胞(P＜0.01);塞莱昔布可改变结肠癌细胞株细胞周期的分布,明显降低增殖指数(P＜0.05).塞莱昔布具有明显的抑制肝转移瘤VEGF表达的作用(P=0.00).结论:塞莱昔布可通过抑制COX-2酶活性而抑制肿瘤细胞的分裂和增殖,诱导其凋亡,并抑制肿瘤血管生成,干预结肠癌的转移与复发.
-
环氧合酶-2在急性肝损害中的作用机制
目的:观察COX-2在急性肝损伤中的表达,探讨COX-2与急性肝损伤的关系.方法:将50只♂Wistar大鼠随机分为正常组10只,对照组10只腹腔注射CCL4原液1mL·kg-1、实验组30只分3组腹腔注射CCL4原液1mL·kg1,2h后每组分别给予20mg·kg-1、40mg·kg-1和80mg·kg1塞来昔布灌胃.结果:血清学检测结果显示CCL4组和CCl4+Celecoxib组大鼠血清ALT,AST和LPS均较正常大鼠组明显增高(ALT:1392±16 vs 624±5,AST:1803±18 vs 748±6,LPS:124±61 vs60±50 P<0.05),CCL4组与CCL4+CeleCoXib组大鼠血清ALT、AST和LPS水平存在显著差异(ALT:1790±13,3301±20,4500±32 vs 1392±16,AST:2183±21,3946±30,4903±23vs1803±18,LPS:143±37,186±77,232±35vs 124±61.P<0.05).HE染色光镜下示CCL4组和CCL4+Gelecoxib组大鼠大量肝细胞肿胀、空泡变性和脂肪变性,部分肝细胞坏死.免疫组织化学检测结果显示NF-kBP65在部分正常肝组织弱阳性表达,CCL4组与CCL4+Celecoxib组大鼠均有NF-kBP65的阳性表达,且两组NF-kBp65的表达存在显著差异(0.175±0.045,0.196±0.024,0.217±0.029vs0.217±0.029 P<0.05);COX-2在正常肝组织无表达,CCL4+Celecoxib组大鼠较CCL4组大鼠COX-2表达明显增高(O.148±0.025,0.158±0.030,0.169±0.017vs 0.146±0.024 P<0.05).结论:急性肝损伤后诱导COX-2表达,可能是机体对抗损伤的一种保护性机制.使用COX-2抑制剂肝损伤加重,NF kBp65的表达增高,随着NF-kBP65表达增高,COX-2表达存在相应增高的趋势.
-
人环氧合酶-2(hCOX-2)编码基因的克隆及其反义核酸转染胃癌细胞的初步研究
目的环氧合酶-2与肿瘤发生的关系已成为肿瘤研究的新热点之一.本研究旨在获得hCOX-2编码基因序列,构建其正、反义真核表达载体,并用反义重组载体转染COX-2高表达的胃癌细胞,以进一步研究其生物学作用及其在肿瘤发生中的作用机制.方法按文献报道的hCOX-2核苷酸序列设计合成PCR引物,利用总RNA抽取试剂盒从COX-2高表达的培养的人胃癌细胞系SGC7901中提取细胞总RNA,反转录合成cDNA,再用PCR方法扩增目的基因序列.PCR产物经DNA序列测定证实后,利用引物5端引入的EcoRⅠ,XbaⅠ酶切位点,通过粘端连接,将所获目的基因分别按正、反两个方向定向克隆入真核表达载体pcDNA3.1中.对两种重组质粒分别进行相应的酶切鉴定.采用脂质体介导的方法用COX-2反义核酸转染SGC7901细胞,经G418筛选后,随机挑选细胞克隆.通过RT-PCR检测COX-2 mRNA水平的变化.结果应用RT-PCR反应扩增获得大小约1.9kb的特异性片段.经DNA序列分析,证实与文献报道的hCOX-2编码区序列一致.重组正义表达载体pcDNA3.1/hCOX2(+)用EcoRⅠ,XbaⅠ双酶切后,产生大小约5.4kb,1.9kb的片段;重组反义表达载体pcDNA3.1/hCOX2(-)通过Pst Ⅰ酶切,产生大小约4.5kb,1.5kb与1.3kb的片段,与预期结果相符.转染细胞经筛选后,随机挑选、扩增了3个细胞克隆,其中1个克隆稳定表达COX-2反义核酸,RT-PCR提示其COX-2 mRNA水平显著下降.结论成功克隆了hCOX-2编码基因序列,并构建了其正、反义真核表达载体.反转录PCR是克隆基因的简便、有效方法.为扩增高GC含量的cDNA模板,可在PCR反应体系中加入适量的DMSO,并采用较高退火温度.在PCR引物中加入限制性内切酶位点,可以方便地实现基因的定向克隆.COX-2反义核酸在胃癌细胞系SGC7901中得到稳定转染,转染细胞COX-2mRNA表达显著受抑制.
