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长臂光敏生物素和光敏地高辛核酸探针检测医学真菌灵敏度的比较研究
建立应用长臂光敏生物素核酸探针和光敏地高辛核酸探针杂交.检测真菌的方法, 并比较二者检测临床常见医学真菌的敏感性.设计并合成医学真菌通用引物, 用PCR扩增白色念珠菌标准株的核糖体RNA基因, 用长臂光敏生物素或光敏地高辛标记其纯化的扩增产物制备成相应的核酸探针, 然后用上述两种探针对标本中的PCR扩增产物进行Southern杂交, 检测医学真菌.通过用白色念珠菌感染大鼠, 建立念珠菌病的实验动物模型, 验证血培养法、PCR法和PCR扩增结合Southern杂交, 检测真菌的敏感性.结果表明,这两种核酸探针可分别与白色念珠菌、热带念珠菌、新型隐球菌、黄曲霉菌、烟曲霉菌等9种真菌杂交呈阳性结果; 与临床常见的细菌、病毒和哺乳动物组织细胞DNA杂交结果为阴性.利用实验动物模型比较了血培养法、PCR法和PCR扩增结合长臂光敏生物素核酸探针Southern杂交法检测真菌血症的灵敏度, 实验证明后者的敏感性高.总之, 应用长臂光敏生物素核酸探针和光敏地高辛核酸探针与标本PCR扩增物杂交, 检测上述真菌既特异和敏感, 又不需放射性同位素.光敏地高辛核酸探针检测医学真菌的灵敏度略高于长臂光敏生物素核酸探针.
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白念珠菌HDAC家族RPD3/HDA1介导组蛋白乙酰化修饰作用方式的初步研究
念珠菌是真菌感染性疾病重要的致病菌之一,念珠菌病主要包括黏膜病变、皮肤病变、系统性感染等,近年来有研究开始尝试从表观遗传学角度来探讨疾病的发病机制和治疗途径,但在医学真菌包括念珠菌方面的研究很少。组蛋白的乙酰化程度由两类酶决定,即组蛋白乙酰基转移酶( histone acetyltransferases , HAT)和组蛋白去乙酰化酶( histone deacetylases ,HDAC)。现已知编码白念珠菌 HDAC 的基因主要包括:HDA1、RPD3、HOS1、HOS2、HOS3和SIR2,主要分为3类,Ⅰ类以RPD3为代表,Ⅱ类以HDA1为代表,Ⅲ类以SIR2为代表。
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应用PCR-反向斑点杂交法快速检测和鉴定常见医学真菌
近年来,机会性真菌感染呈不断上升趋势,这主要归因于器官移植、骨髓移植的广泛开展;艾滋病患者的大量增多及皮质类固醇激素、免疫抑制剂和广谱抗生素的应用等;另外不同真菌菌种对抗真菌药物具有不同的天然耐药性,这就不仅要求实验室快速检出感染的病原菌,而且还应准确鉴定到种,才能使临床采取有效措施控制感染.目前,真菌的分离培养鉴定仍是主要诊断方法,但存在耗时长且不敏感等问题.为建立快速、敏感、特异的检测与鉴定方法,我们用真菌通用引物扩增广范围医学真菌的细胞色素P450羊毛固醇-14α-去甲基化酶(L1A1)基因的1个片段(约350bp).通用引物以生物素标记,结合种特异性探针进行反向斑点杂交,可鉴定临床常见的8种真菌,其中包括近年来新发现的都柏林念珠菌.
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医学真菌实验室常规检查方法
真菌感染的日益增多已成为广大临床医师的共识,这一现状对微生物实验室真菌检查技术也提出了更高的要求.规范的标本取材、保存、处理以及正确的真菌镜检和培养方式可以提高阳性率检出,对临床诊断和治疗提供有价值的帮助.笔者就标本取材、真菌镜检和真菌培养的操作规范以及致病真菌鉴定原则进行简要的介绍.
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医学真菌学教学体会
真菌感染逐渐成为院内感染之一,应引起临床各科医师的重视.由于医学生对真菌的认识往往是从皮肤性病学的教学过程中获得,因此应高度重视医学真菌学的教学.本文对医学真菌学教学中应注意的问题进行了分析和总结.
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用核糖体RNA ITS区序列寡核苷酸探针鉴定临床常见真菌
目的:建立一种快速鉴定临床常见真菌菌种的方法.方法:选取真菌核糖体RNA的ITS区为靶基因,设计通用引物和种特异性探针,将3个属的6种临床常见真菌(白色念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、新型隐球菌、烟曲霉和黄曲霉)的种特异性探针加尾后固定于硝酸纤维素膜上;用标记生物素的真菌通用引物扩增11种医学真菌DNA,产物与固定在膜上的探针杂交.结果:通用引物可以扩增所试11种医学重要真菌的DNA,扩增片段长度约为560 bp.6种真菌扩增产物只与其对应的探针杂交.结论:此方法快速、简便、特异,适合常规实验室开展.
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医学重要真菌的实验室诊断进展之二--分子生物学鉴定技术的研究进展
医学真菌的实验室常规鉴定方法尽管有了很大发展,但仍存在耗时长、敏感性低的问题.近年来,研究者做了大量工作,试图应用分子生物学方法鉴定医学重要真菌弥补传统方法的不足.本文根据近年来的文献报道,概括总结了以念珠菌为主的分子生物学检测方法的进展情况.
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体外抗真菌药敏试验的新研究
近年来,随着肿瘤化疗、器官移植、广谱抗生素的广泛应用及HIV的感染的增多,真菌感染的发病率和病死率在不断上升.虽然多种抗真菌药物的相继问世,给真菌病的治疗带来了新的转机,但目前关于耐药现象的报道也逐渐增多,因此,建立与临床治疗密切相关的药敏实验和正确合理地联合应用抗真菌药物十分重要.美国国家临床实验标准委员会(NCCLS)于1997年推出了药敏试验方案M27-A(全称“酵母菌的液体培养基稀释法抗真菌药物敏感试验标准方案”)[1],表明医学真菌的药敏试验趋于标准化.现就NCCLS方案药敏实验在临床治疗、抗真菌药物的相互作用和新的抗真菌药物开发等方面的研究做一综述.
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廖万清:转化医学是医学真菌学研究“后坐力”
世界和中国因为医学真菌研究而记住了一个名字——中国工程院院士廖万清。他带领团队新发现了9种新的致病真菌,刷新国际或国内纪录,有助于准确诊断相关疾病。他一手创建了中国首个隐球菌专业实验室,填补了中国医学真菌学研究的空白;他历经30年潜心研究发现的“格特隐球菌ITS C型(S8012)”,被美国、比利时及荷兰等国永久保藏收录于菌种保藏中心。
4年前,在中国菌物学会第五届会员代表大会暨2011年学术年会上,第二军医大学上海长征医院皮肤病与真菌研究所所长廖万清重申:他和团队拥有的具有独立知识产权的“S8012”菌株,将免费提供给国内各相关单位(除商业用途之外)研究使用,而该菌株在国外的菌种保藏库卖到295美元/株。 -
义诊、教学双管齐下——"医学真菌流动教室"足迹将踏遍全国
2002年10月8日,由中华医学会皮肤病学分会举办、西安杨森制药有限公司协办的.医学真菌流动教室"在北京国际饭店举行了正式启动仪式,全国人大常委会副委员长吴阶平院士及比利时杨森制药公司的创始人保罗·杨森(Paul Janssen)博士出席了启动仪式.
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医学真菌分类与鉴定中的新热点:rRNA基因
真菌是自然界中一个大的生物类群,就医学真菌而言,如何确定其分类地位以及属、种等问题很多,传统分类法从形态表型出发,存在着一定的片面性。随着分子生物学技术的应用和发展,医学真菌方面已逐渐形成了以基因分析为基础的分类与鉴定系统;真核生物的rRNA基因结构的独特性使其在医学真菌的分类与鉴定中应用广泛,结合聚合酶链反应、随机扩增片段多态性、限制性酶切片段多态性及核苷酸序列分析等技术,rRNA基因适合于各分类水平(种系发生、种内分型及种间鉴别)的研究。
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走近医学真菌
真菌学科所研究的真菌至少包括50 000种,其中多数在自然界有机物循环中起重要作用.在医学真菌中,真菌的次级代谢产物如抗生素以及免疫抑制药物如环孢素,均已被用于医疗.此外,酵母已作为一种模式生物进行基因组学、蛋白质组学、代谢组学的研究对象,例如目前研究蛋白质-蛋白质相互作用中,酵母双杂交体系对推动生命科学卓有贡献.与人类疾病密切相关的真菌种类仅为几十种.某些浅部真菌感染可引起过敏.引起哮喘病人的过敏原已在部分真菌中被确认并已由实验证明可诱生Th1/Th2类的免疫应答.随着人类免疫缺陷病毒(HIV)感染及艾滋病感染者的增多,器官移植、骨髓移植等医疗技术的更多采用,以及广谱抗生素、皮质类固醇激素和免疫抑制剂的应用,使深部真菌感染及侵袭性曲霉感染等日益呈上升趋势.进一步认识这些真菌及其引起的感染,及早作出诊断,进行有效治疗,是本世纪微生物与感染的一个重点课题.
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深圳地区五年皮肤真菌病及致病真菌种类的分布
深圳是新兴的移民城市,1997年才开始医学真菌的研究工作.为了掌握深圳地区病原真菌菌种的分布情况,并与国内其他地区报道相比较,我们总结我科真菌实验室1997-2001年真菌培养资料,将结果报道如下.
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重视新现和疑难真菌病的诊疗
随着社会的发展、医学的进步和人类生活方式的改变,免疫抑制剂、广谱抗生素、器官移植技术和各种导管技术等医疗手段的普遍应用,以及恶性肿瘤、艾滋病和糖尿病等疾病患病率的增加,临床上真菌感染的病例不仅日益增加,致病真菌的种类也不断变化,且部分原有的真菌病出现了新的临床表现,即新现和疑难真菌病日渐增多,如认识不足、处理不当可导致病情延误、治疗失败,甚至危及生命。同时,随着医学科学的发展,对医学真菌的研究也不断深入。现就我国近年来新现和疑难真菌病的诊疗状况及面临的挑战做一评介。
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应用PCR-反向斑点杂交法快速检测和鉴定医学重要真菌
目的建立一种以PCR为基础的的检测和鉴定医学重要真菌的方法.方法将白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌、都柏林念珠菌和新型隐球菌的种特异性探针加尾后固定于硝酸纤维素膜上;用标记生物素的真菌通用引物扩增经提取的各真菌DNA,与固定在膜上的探针杂交.结果所用的真菌通用引物可扩增12种临床常见的真菌DNA,扩增片段长度在350bp左右.8种特异性探针分别与上述真菌PCR扩增产物杂交,结果表明8种探针具有高度的特异性.通过39例临床标本和25例临床分离菌株的检测,PCR-反向杂交法与真菌培养法的结果基本一致,且鉴定时间也由传统培养鉴定方法约需1周的时间缩短至2天.结论该方法可快速、正确地将8种临床常见真菌鉴定到种水平,如经大量临床标本的检测验证,可望在临床微生物实验室开展.
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283株院内真菌感染及耐药性调查分析
近年来,由于一些激素、广谱抗菌素、皮质类固醇、肿瘤的放射,介入治疗、器官移植等治疗手段的增加使免疫抑制剂药物在临床广泛应用,念珠菌感染的发病率呈不断上升趋势,在免疫抑制患者中念珠菌的发病率列居第一位,白色念珠菌为主要致病菌,已引起国内外医学真菌学界的重视.
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常见医学真菌 DNA 条形码 BLAST 数据库的建立
目的::构建我国重要医学真菌DNA条形码BLAST数据库。方法:对28种医学真菌的ITS-rDNA序列( DNA条形码)进行测定和汇总,并使用NCBI提供的数据库工具将汇总的序列构建成DNA条形码数据库。结果:构建的医学真菌 DNA条形码数据库包括28种中国常见医学真菌的DNA条形码序列,利用数据库对待测真菌标本的DNA条形码序列进行检索,能进一步确定真菌类型。结论:本实验构建的医学真菌DNA条形码数据库可以用于医学真菌的分子鉴别。
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泰山北斗止于至善--记著名皮肤性病专家吴绍熙教授
吴绍熙教授1929年出生于江苏无锡,自幼谙熟儒学经典,1951年毕业于上海医学院临床医学本科,在上海华山医院皮肤科工作,1955年攻读研究生,师从杨国亮教授,1958年毕业后在中国医学科学院皮肤病研究所工作至今.在医科院皮研所创建了全国真菌保藏中心,历任皮肤病研究室副主任、真菌病研究室主任、中西医结合科主任、国家科委中国微生物菌种保藏管理委员会委员兼医学真菌中心主任等,先后任主任医师、研究员、中国协和医科大学教授、博士生导师,并于1992年获国务院特殊津贴,曾任国家自然科学基金会评审委员、卫生部新药评审委员、中国微生物学会理事、<真菌病学>和<现代真菌病诊断治疗学>等7本专业书的主编、<临床皮肤病学>副主编、<中华皮肤科杂志>副总编、<中国医学百科全书·皮肤病性病学分册>编委,现仍担任中国微生物学会真菌专业委员会副主任委员、中国中西医结合学会皮肤科学会常委、东南亚人畜共患真菌病委员会委员、<临床皮肤科杂志>和<中国麻风皮肤病杂志>等期刊编委或特邀编委.
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不容忽视的肺真菌感染
何为真菌及真菌感染真菌也叫霉菌,是微生物的一种,广泛分布于自然界,也可以寄生于人体的某些部位,如口腔、上呼吸道、胃肠道或阴道等处.许多真菌是对人类生活有利的,如用于酿酒、制酱等,有些真菌则可感染人体引发疾病.医学真菌按其侵犯部位的不同分为两大类.一类为浅部真菌,主要侵及表皮角质层、毛发和甲板,引发浅部真菌感染如体癣、甲癣和股癣,90%以上的真菌属于此类.深部真菌主要侵犯皮肤、黏膜深处、内脏器官、骨骼及神经系统等,引发深部真菌病.
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应用长臂光敏生物素核酸探针检测医学真菌的研究
[目的]建立PCR结合长臂光敏生物素核酸探针杂交检测医学真菌的方法.[方法]首先合成医学真菌通用引物,用PCR扩增白色念珠菌18S rRNA基因,用长臂光敏生物素标记纯化的扩增产物作为核酸探针,然后用此探针对PCR后的基因扩增产物进行Southem杂交检测医学真菌.通过用白色念珠菌感染人鼠,建立念珠菌病的实验动物模型,验证血培养法、PCR法和PCR扩增及Southern杂交检测医学重要真菌的敏感性.[结果]通用引物可以扩增白色念珠菌、热带念珠菌、新型隐球菌、黄曲霉菌、烟曲霉菌等9种医学常见真菌的18S rRNA基因,扩增片段长度为621~687bp.此引物只扩增真菌DNA,不扩增临床常见的细菌、病毒和哺乳动物组织细胞DNA.利用实验动物模型比较了血培养法、PCR法和PCR扩增及长臂光敏生物素核酸探针Southem杂交法检测真菌血症的灵敏度,实验证明后者的敏感性高.[结论]本方法快速、敏感、不需放射性同位素,有较好的临床应用前景.