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前列腺腺癌的内分泌治疗进展
Huggins发现前列腺癌是依赖激素的癌,用双侧睾丸切除治疗晚期前列腺癌,71%(15/21)主客观均有明显改善(1941),自此,这种关系深入研究,内分泌治疗被广泛应用,药品推陈出新,副作用小,疗效好的药不断发现,有的学者称"内分泌治疗可使前列腺癌病变和症状明显缓解,但它对患者生存情况却无明显影响"的说法与事实显然不符.病理结果证明内分泌治疗可使癌细胞退变,可使原发,局部复发以及转移癌临床上消失,其中包括做过根治性前列腺切除和放疗的病人.任何一种治疗对任何癌的疗效是按多少年存活率评估,而无绝对根治.内分泌治疗能使病人存活延长,有些病人并非死于前列腺癌,内分泌治疗早期用或晚期用意见也不一致.
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形态学定量分析在胸腔积液诊断中的应用价值
胸腔积液是胸膜疾病常见的症状,能否在胸腔积液中找到脱落的癌细胞是诊断的依据.但在结核性胸腔积液中间皮细胞较丰富,由于炎症刺激和细胞退变,可有明显异型性,容易误诊为癌细胞.本文利用图像分析技术对胸腔积液中的脱落细胞进行形态学定量分析,以期发现良恶性胸腔积液的数字化差异,探讨其对良恶性胸腔积液诊断的应用价值.
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TGF－β／BMP信号通路在骨关节炎软骨细胞退变中的作用机制
骨关节炎（osteoarthritis， OA）是老年人群的常见病和多发病。根据流行病学调查，65岁以上的人群中的 OA发病率男性为60％，女性为70％［1，2］。但OA的发病机制目前尚不完全清楚，软骨细胞退变是OA发病机制中的重要环节，在这一过程中转化生长因子－β（ transforming growth factor－β， TGF－β）和骨形成蛋白（ bone morphogenetic protein， BMP）信号通路的异常改变起到了关键作用［3］，致软骨细胞的分化表型丢失，出现类似于生长板发育过程中终末肥大样软骨细胞的细胞行为［4］，终促进并加剧了OA的进程。目前，认为软骨细胞肥大分化的标志物为基质金属蛋白酶13（ matrix metalloproteinase 13， MMP13）［5］， MMP13则被公认为是导致OA关节软骨基质降解的重要水解酶之一，Fukui等［6］研究发现其在OA关节软骨内的MMP13表达是正常软骨细胞的40倍之多。当软骨受损后，软骨细胞MMP13的表达量出现上升，导致了细胞外基质（ extracellular matrix， ECM）的产生与降解之间的平衡被打破，ECM被大量降解，软骨细胞的胶原网络和内环境遭到了破坏，从而导致了OA的发生。
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人退变椎间盘组织中核因子κB信号通路的变化
目的 探讨核因子κB (NF-κB)信号通路在人退变椎间盘中表达的变化及其意义.方法 2014年10月至2016年3月收集枣庄矿业集团公司枣庄医院骨科和上海交通大学附属第一人民医院骨科行腰椎手术治疗55例患者的椎间盘组织作为研究对象.将收集的髓核组织分为对照组(未退变椎间盘组织25例)和实验组(退变椎间盘组织30例).光镜下观察实验组、对照组原代髓核细胞生长的状态;荧光显微镜下观察实验组和对照组NF-κB p65在髓核细胞中的定位情况;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测目的基因白细胞介素6(IL-6)、基质金属蛋白酶(MMP)、聚集蛋白聚糖酶(ADAMTS)、聚集蛋白多糖(Agg)及Ⅱ型胶原(ColⅡ)的相对定量结果;采用免疫印迹检测核蛋白p65的表达变化;观察抑制NF-κB p65的活性,对ADAMTS-4、MMP-13、Agg及COLⅡ蛋白表达的影响.结果 光镜下对照组髓核细胞较实验组髓核细胞细胞体积比较大,胞质丰富,生长速度快.免疫荧光显微镜下实验组髓核细胞p65蛋白主要集中在细胞核中,对照组髓核细胞p65蛋白定位于细胞质.RT-PCR结果显示实验组MMP-1、MMP-3、MMP-13、ADAMTS-4、ADAMTS-5和IL-6的mRNA表达明显高于对照组,而Agg及COLⅡ的mRNA的表达明显低于对照组.免疫印迹检测结果显示核蛋白p65的相对表达量随着髓核组织退变等级的增高逐渐增高;使用BAY11-7082阻断NF-κB信号通路的活性,可以显著的下调ADAMTS-4、MMP-13蛋白的表达,显著上调Agg、COLⅡ蛋白的表达,且随着BAY11-7082浓度的增加,调节作用逐渐加强.结论 随着椎间盘退变程度的增加,NF-κB信号通路的活性逐渐升高,可调控基质降解酶过度表达,且在细胞外基质的降解过程起到重要的作用.
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调控转录因子NF-κB信号通路对体外自然退变终板软骨细胞的影响
目的 探讨终板软骨细胞体外自然退变模型中转录因子(NF)-κB信号通路表达变化及意义.方法 分离获取大鼠终板软骨细胞,体外培养建立终板软骨细胞自然退变模型.根据细胞传代次数分P2代细胞(空白对照组),P5代细胞(体外自然退变组)及NF-κB信号通路抑制组(细胞传代中加入Bay11-7082的P5代细胞).观察细胞形态学变化,甲苯胺蓝染色鉴定细胞表型,阿新蓝染色观察细胞外基质变化.实时聚合酶链反应检测各组细胞中SOX-9基因,Ⅱ型胶原,蛋白聚糖,人基质金属蛋白酶(MMP) 13的表达情况,核质分离及免疫印迹检测胞核与胞质中NF-κB信号通路相关蛋白P65、p-P65、IκBα、p-IκBα表达变化.结果 随着体外传代的进行终板软骨细胞表型逐渐丢失,阿新蓝染色可见细胞外基质减少,P5代细胞(体外自然退变组)较P2代细胞(空白对照组)SOX-9(P5/P2=0.488,P＜0.01)、蛋白聚糖(P5/P2=0.287,P＜0.01)、Ⅱ型胶原(P5/P2=0.182,P＜0.01)表达明显降低,NF-κB信号通路相关基因P65入核增加,胞质中p-IκBα增高,NF-κB信号通路相关基因MMP13 (P5/P2=1.324,P＜0.05)表达明显上升,NF-κB信号通路抑制组较P5代细胞(体外自然传代组)核内p-P65减少,胞内p-IκBα降低,NF-κB信号通路相关基因MMP13(Bay11-7082/P5=0.611,P＜0.05)表达降低,信号通路抑制组中Ⅱ型胶原(Bay11-7082/P5 =4.173,P＜0.01)、蛋白多糖(Bay11-7082/P5=2.732,P＜0.05)、SOX-9(Bay11-7082/P5=1.567,P＜0.05)等基因表达明显回升.结论 NF-κB信号通路在终板软骨细胞体外退变中发挥重要的调节作用,调控NF-κB信号通路可能会改善椎间盘退变.
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关注老年性精神障碍
老年性精神障碍指起病于老年期(通常65岁以上)的慢性进行性智力减退,又称老年性痴呆,它主要包括阿尔茨海默病和脑血管性痴呆.其病理改变主要为大脑萎缩和神经细胞退变;病因未明,故又称为原发退变性痴呆.在正常情况下,30岁以上的人随着年龄的增长,脑的重量会有所减轻,到70岁左右可减轻约5％.进入老年以后,健康人的躯体和心理功能都会出现一系列相应的改变,如须发斑白、皮肤皱缩和色素沉着、老视、近记忆减退、行动迟缓,以及某些性格改变等.
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Wnt-5a基因在椎间盘退变器官模型中的表达及意义
背景:椎间盘终板软骨在一定的循环压力作用下会发生形态学的退变,重要的细胞外基质降低,而同时Wnt-5a基因的表达随着加力时间的延长逐渐降低,Wnt-5a基因与椎间盘退变存在某种重要的内在联系.目的:检测循环压力诱导下Wnt-5a基因在兔椎间盘退变器官模型中的表达变化,探讨其与椎间盘退变之间的关系.方法:选取6月龄新西兰大白兔,取出腰椎间盘制备椎间盘退变器官模型,随机分为加力组和对照组,对照组不加力.利用苏木精-伊红染色及番红O固绿染色观察2组大体组织变化;运用Real time PCR法检测各组软骨中Wnt-5a、Ⅱ型胶原以及蛋白多糖基因的表达,Western-blotting检测Wnt-5a蛋白在各组中表达量的变化.结果与结论:①对照组及加力组椎间盘器官培养至第7天,其组织形态学在一定程度上发生改变,大体结构完整,Wnt-5a、Ⅱ型胶原以及蛋白多糖等基因的表达与0 d对照组相比呈现出差异化,14 d加力组以及对照组较0 d组在组织形态学上差异更加明显;②7 d加力组、14 d加力组及对照组中的Wnt-5a、Ⅱ型胶原以及蛋白多糖等基因表达下降,Wnt-5a 蛋白的表达变化趋势与基因水平检测结果一致,但加力组较未加力各组基因表达降低更加显著,加力组中随加压时间的延长各组基因表达进行性降低;③结果提示,通过调节Wnt-5a基因的表达,可能会影响终板软骨细胞的退变进程,进而为椎间盘退变的防治提供新思路.
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独活寄生汤对胶原性关节炎大鼠膝关节软骨细胞退变的干预作用
目的:观察独活寄生汤对胶原性关节炎(CIA)大鼠膝关节软骨细胞的影响.方法:用牛Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型,分为模型组、独活寄生汤组和布洛芬组3组,另设正常组.分别予独活寄生汤、布洛芬及生理盐水灌胃,持续30 d后取材.关节软骨组织切片采用番红-快绿染色,进行关节软骨组织学评分;透射电镜观察软骨细胞微结构变化.结果:独活寄生汤组软骨组织学评分提示软骨退变减轻,与模型组、布洛芬组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).独活寄生汤组透射电镜下软骨细胞线粒体和高尔基体数目均较模型组增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:独活寄生汤可缓解胶原性关节炎大鼠软骨细胞退变.
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淫羊藿素通过抑制Hedgehog信号通路保护终板软骨细胞退变
目的:探讨淫羊藿素药物在体外力学诱导终板软骨细胞退变中的作用机制.方法:应用FX-5000T flexcell细胞应力加载系统体外建立大鼠终板软骨细胞退变模型,实验分正常对照组(NC组)、力学刺激组(ICMT组)、力学刺激+药物处理组(ICT+ICMT组).甲苯胺蓝及鬼笔环肽染色观察力学刺激后细胞形态变化,CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖与凋亡,Western blot及RT-qPCR分别检测软骨细胞相关基因及蛋白水平变化.结果:大鼠终板软骨细胞力学刺激后出现退变,细胞形态由多边形被拉成长梭形,ICMT组、ICT+ ICMT组细胞增殖率均高于NC组,但ICMT组与ICT+ ICMT组间细胞增殖率比较无统计学差异,ICT+ICMT组细胞凋亡率较ICMT组明显改善,加入淫羊藿素药物处理后终板软骨细胞因力学刺激导致的退变程度有所缓解,Hedgehog信号通路被抑制.结论:淫羊藿素药物可通过抑制Hedgehog信号通路活性起到保护因力学诱导而引起的终板软骨细胞退变作用.
关键词： 淫羊藿素 终板软骨细胞 细胞退变 Hedgehog信号通路 -
细胞移植治疗椎间盘退变研究进展
椎间盘退变性疾病(Disc Degeneration Disease,DDD)是中老年人的常见病和多发病,随着人们劳动方式和生活方式的改变,椎问盘退变的发病率正逐年上升,且有年轻化趋势.目前这类疾病的治疗主要是非手术及手术两种方法,但均不能从组织学上根本逆转椎间盘细胞退变.近年来利用自体椎间盘细胞、软骨细胞或干细胞移植到椎间盘,即细胞移植技术的出现为实现椎间盘细胞再生带来了新的希望.本文从椎间盘细胞退变的病因,移植细胞的选择,移植细胞的方法,存在的问题及展望等方面对目前相关研究文献进行综述.
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真核表达人Wnt7b基因建立软骨细胞退变模型
目的：在真核细胞中表达人Wnt7b基因并且观察对大鼠原代软骨细胞的退变作用。方法取出生24 h SD大鼠关节处软骨，Ⅱ型胶原酶多次消化后获得原代软骨细胞，取P1代细胞进行实验。扩增人Wnt7b基因及克隆至PCDH-GFP上，转染PCDH-GFP和PCDH-Wnt7b至293ft细胞中，48 h后收集细胞上清及转染细胞，Western blot鉴定Wnt7b在293ft细胞中的表达。收集的上清分别稀释10倍和50倍培养大鼠软骨细胞，24 h后观察细胞形态并收集细胞蛋白和抽提RNA，Western blot和定量PCR检测软骨退变指标MMP13、MMP3、Ⅱ型胶原、A-can、ADAMTS5、ColⅩ和SOX9的表达。结果成功克隆人Wnt7b基因至PCDH-GFP载体上且在293ft细胞中得到有效表达。含Wnt7b培养基干预软骨细胞24 h后，软骨细胞形态由原来的多角形变成长梭形，Wnt7b处理组软骨细胞MMP13和MMP3表达显著上调，Ⅱ型胶原的表达下调。PCR结果表明A-can和Sox9表达下降，ColⅩ和ADAMTS5表达增强。结论有效在真核细胞中表达Wnt7b基因并且促进大鼠软骨细胞退变，建立软骨细胞退变的体外模型。
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1例转移癌胸腔积液的液基细胞学检测
胸腔积液采用液基细胞学检测，其优点在于标本的收集为含抗凝剂的专用标本收集瓶，能及时固定标本，防止细胞退变，在处理制片过程中利用过滤技术祛除杂质成分，不丢失细胞，不破坏细胞形态，上机制片时利用重力自然沉淀原理，优先捕获病变细胞，保持某些腺细胞团特有的三维立体结构［1‐5］。
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不同代次髓核细胞生物学特性的比较研究
目的 通过兔髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)自然传代培养退变模型,观察不同代次NPCs 生物学特性.方法 取 6～8 周龄新西兰大白兔(体质量 1.5～2.5 kg)胸腰椎节段髓核组织,采用酶消化法获取原代 NPCs,计为 P0 代;胰蛋白酶消化法传代获取第 1～3 代 NPCs,依次计为 P1、P2、P3 代.倒置相差显微镜观察各代 NPCs 形态特征;膜联蛋白 Ⅴ/碘化丙啶双染流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫细胞荧光染色法和Western blot 检测各代 NPCs 的缺氧诱导因子 1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)、聚集蛋白多糖(Aggrecan)、Ⅱ 型胶原、基质金属蛋白酶 2(matrix metalloproteinases 2,MMP-2)表达.结果 NPCs 形态从 P0 代的三角形、多角形、多边形逐渐向 P3 代的梭形变化,细胞体积变大,含特征性空泡细胞逐渐消失,细胞生长倍增时间延长.P0～P3 代兔 NPCs 细胞凋亡率分别为 5.47％±0.91％、13.77％±2.42％、33.46％±1.82％、38.76％±1.50％,随着培养代数增加,细胞凋亡率明显增加,比较差异均有统计学意义(P<0.05).免疫细胞荧光染色示,随着培养代数的增加,HIF-1α、Ⅱ 型胶原和 Aggrecan 荧光强度逐渐减小,MMP-2 荧光强度逐渐增加.Western blot 检测示, HIF-1α 蛋白相对表达量在 P0 代较高,P1 代有升高趋势,而后逐渐降低,各代次间比较差异均有统计学意义(P<0.05).Ⅱ 型胶原蛋白相对表达量从 P0～P3 代逐渐降低,各代次间比较差异均有统计学意义(P<0.05).Aggrecan 蛋白相对表达量从 P0～P2 代逐渐降低,两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);P2 代与 P3 代间比较差异无统计学意义(P>0.05).MMP-2 蛋白相对表达量在 P3 代有明显升高,除 P0 代与 P2 代间比较差异无统计意义(P>0.05)外,其余各代次间比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 自然传代培养法可成功构建 NPCs 退变模型,退变时细胞形态变化、凋亡增加,细胞合成代谢减慢,分解代谢加快.
