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噬菌体表面展示技术筛选HCBP6人源单链可变区抗体
目的:制备丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的肝细胞结合蛋白6(HCBP6)的特异性人源化单链可变区抗体(scFv).方法:采用噬菌体表面展示技术,将生物合成的应用酵母双杂交技术筛选得到的HCV核心蛋白的肝细胞结合蛋白6(HCBP6)16肽固相包被于Nunc板,从噬菌体单链可变区抗体库中经过5轮"黏附-洗脱-扩增"筛选过程,随机挑选出48个克隆,利用酶联免疫黏附法(ELISA)、交叉反应和竞争抑制实验,对其进行免疫学检测,获得与HCBP6结合活性较强的单链可变区抗体片段的阳性克隆,并对HCBP6特异性scFv的编码序列进行序列测定分析.结果:对噬菌体单链可变区抗体库经过5轮"黏附-洗脱-扩增"的筛选后,结合到包被平皿的噬菌体与第一轮相比,富集了162倍.用酶联免疫黏附法测定第5轮筛选后上清液中含有的噬菌体抗体与HCBP6结合活性.其中有30株克隆ELISA的吸光度(A450 nm)值较高(P8 nm 0.77,P240.714,P26 0.728,P29 0.723,P38 0.803,P39 0.762,P43 0.747等).对这些噬菌体抗体进行与牛血清白蛋白(BSA)的交叉反应后,确定其中有7株交叉反应较弱(P80.145,P24 0.119,P26 0.17,P29 0.186,P38 0.118,P39 0.138,P43 0.178),结合2次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果,后确定1株(P24)阳性克隆.提取质粒,SfiI/NotI双酶切后,将片段亚克隆到pCANTAB5E载体,进行DNA序列测定,DNA大小为771 bp,符合人源化单链可变区抗体典型的骨架区(FR)及互补决定区(CDR)的序列结构.结论:用噬菌体抗体库技术能够成功地获得HCBP6的scFv.
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丙型肝炎病毒包膜蛋白E2抗独特型人源单链可变区抗体的筛选与鉴定
目的:制备抗丙型肝炎病毒(HCV)包膜蛋白E2(E2)的抗独特型单链可变区抗体scFv(抗-Id scFv),为研制HCV E2的抗-Id scFv疫苗奠定基础.方法:采用噬菌体表面展示技术,将抗HCV E2单克隆抗体固相包被于Nunc板,从噬菌体单链可变区抗体库中经过5轮"黏附-洗脱-扩增"筛选过程,随机挑选出53个克隆,利用酶联免疫黏附法、交叉反应和竞争抑制实验,对其进行免疫学检测,获得与HCV E2单克隆抗体结合活性较强的抗独特型抗体单链可变区片段(抗-IdscFv)的阳性克隆,并对HCV E2特异性抗-Id scFv的编码序列进行序列测定分析.结果:对噬菌体单链可变区抗体库经过5轮"黏附-洗脱-扩增"的筛选后,结合到包被平皿的噬菌体与第一轮相比,富集了12倍.用酶联免疫黏附实验(ELISA)方法测定第五轮筛选后上清液中含有的抗-Id scFv与HCV E2单克隆抗体结合活性.其中有18株克隆ELISA的吸光度(A450 nm)值较高(E11 A450 nm 0.928,E14 A450 nm 1.152,E17 A450 nm 1.136,E28 A450 nm 1.163,E53 A450 nm0.965).对这些噬菌体抗体进行与牛血清白蛋白(BSA)的交叉反应后,确定其中有5株交叉反应较弱(E11 A450nm 0.044,E14 A450 nm 0.062,E17 A450 nm 0.166,E28 A450nm 0.012,E53 A450 nm 0.069),结合2次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果,后确定1株(E28)阳性克隆提取质粒,进行DNA序列测定,DNA大小为768bp.结论:用噬菌体抗体库技术能够成功地获得单抗HCV E2的抗-Id scFv,本实验结果为开展用抗-Id scFv防治丙型肝炎的研究创造了条件.
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花粉交叉变应原
花粉变应原问的交叉反应是普遍存在并且重要的现象,研究花粉交叉变应原对临床花粉症的诊断与免疫治疗均具有重要的理论与实践指导价值.在过去的20年,该领域的研究在相关学科的理论和技术支持下有了长足的进展,目前的研究成果主要涉及针叶树、藜苋科杂草、荐草、桦树、豚草、蒿草及与之密切相关的植物花粉变应原间的交叉反应.
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日本柳杉花粉变应原致敏蛋白组分
日本柳杉花粉变应原致敏蛋白组分目前已分离纯化并鉴定的有Cry j 1、Cry j 2、Cry j 3、CJP-6、CJP-4、CJP-8及CPA9等,其中某些致敏蛋白组分还具有多种异构体,因此日本柳杉花粉变应原的成分构成十分复杂.Cry j 1和Cry j 2是目前公认的日本柳杉花粉的主要致敏蛋白组分,二者均为糖蛋白,分子结构中均包含B细胞表位和T细胞表位,也与柏科其他植物花粉致敏蛋白组分具有很高的交叉反应性.其中Cry j 1具有果胶裂解酶活性,Cry j 2则有聚甲基半乳糖醛酸酶活性.后续发现的日本柳杉致敏蛋白组分Cry j 3、CJP-6、CJP-4、CJP-8及CPA9等也均有与花粉症患者血清IgE有较高的结合能力,这些蛋白质特点各异,但都具有与其他植物来源变应原的交叉反应性.
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两种单克隆抗体2E12与8F1检测非小细胞肺癌患者ERCC 1蛋白的表达
肺癌中约80%~85%是非小细胞肺癌(NSCLC)[1]。多数 NSCLC患者确诊时已为中晚期,化疗为主要治疗方法之一,但治疗效果不佳[1]。近年来,依据耐药基因及药物敏感性选择化疗药物从而为肺癌患者选择合适的化疗方案成为一种国际趋势。核苷酸切除修复交叉互补基因1(excision repair cross complementation group 1,ERCC1)是核苷酸剪切修复家族中的重要成员,在核苷酸切除修复途径中起着关键作用[2]。许多研究表明,ERCC1是 NSCLC铂类药物化疗的一个重要预后指标,其高表达可能与铂类药物耐药相关,但研究结果并不一致[24]。以往多采用单克隆抗体8F1检测ERCC1的表达,但新的研究表明,8F1抗体与细胞核内的一个不相关的核膜蛋白 PCYT1 A 存在交叉反应,可能导致结果呈假阳性。新研制的2E12抗体能够避免这一非特异性交叉反应[5],但其相关研究还比较少。本研究中采用两种单克隆抗体2E12和8F1,应用全自动免疫组化法检测 NSCLC患者肿瘤组织中 ERCC1的表达,比较 ERCC1阳性率的差异,为2E12的推广应用提供更多的临床证据。
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第二代杂交捕获检测人乳头瘤病毒交叉反应对子宫颈筛查的影响
目的 研究第二代杂交捕获(hc2)检测人乳头瘤病毒(HPV)的交叉反应,分析其对子宫颈癌筛查的影响.方法 2006至2007年,中国山西襄垣、河南新密、新疆和田16 ~54岁的2625位妇女参加了子宫颈筛查,分别接受细胞学检查和高危型HPV hc2 (hc2-H)检测.601例hc2-H阳性或细胞学诊断≥ASC-US的患者,接受电子阴道镜活检.再从筛查结果阴性者中,随机抽取10%(202例).对这803例(包括202例阴性和601例阳性)患者采用低危型hc2试剂盒(hc2-L)检测,并且用LA(linear array)试剂盒对HPV分型.hc2对检测范围外的HPV型别的阳性结果被定义为交叉反应(CR),包括hc2-H交叉反应(HCR)和hc2-L交叉反应(LCR).结果 诊断结果为689例正常、82例轻度官颈上皮内瘤变(CIN1)和32例宫颈上皮内瘤变2级以上病变(CIN2+).经方差分析,组间的年龄差异无统计学意义(F=1.616,P=0.199).hc2阳性率高于LA.仅针对hc2的18种型别,hc2与LA检测一致率是75.0%,Kappa值0.569.HCR和LCR在全体筛查人群中分别是8.9%和10.3%,正常者中是10.2%和10.9%,CIN1中是5.3%和0.0%.CIN2+组未发现交叉反应情况.多重感染者中交叉反应率不足2%.LCR以HPV55型较多见,HCR集中体现在HPV53、66和82上.结论 使用全长RNA探针检测HPV DNA的第二代杂交捕获试验试剂主要进行筛查,其交叉反应发生在普通人群和CIN1患者,由于CIN2样本量小且主要感染为高危型,未发现交叉反应.
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人T淋巴细胞白血病不同细胞株的混合抗原肽诱导特异性CTLs细胞毒效应及其交叉反应性分析
目的探讨T淋巴细胞白血病不同细胞株的混合抗原肽诱导特异性抗瘤免疫的作用及不同细胞株混合抗原肽之间的交叉反应性.方法从不同白血病细胞株中分别制备混合抗原肽,与Hsp70体外结合,观察Hsp70-抗原肽复合物对人外周血单个核细胞(PBMC)的激活增殖作用;以激活增殖的PBMC为效应细胞,对不同的靶细胞进行体外杀伤试验.结果不同白血病细胞株的抗原肽为混合肽,经Hsp70提呈均能够有效激活PBMC,并能使激活的PBMC增殖,增殖活化的PBMC可以特异性杀伤与抗原肽对应的白血病细胞;Hut78-肽和Molt-4-肽激活的PBMC对Hut78细胞、Molt-4细胞和Jurkat细胞的细胞毒作用均显著高于HL-60-肽激活的PBMC(P< 0.05).而Hut78/Molt-4-肽激活的PBMC对Jurkat细胞的杀伤作用则显著高于Hut78-肽和Molt-4-肽单独激活的PBMC(P< 0.05). 结论不同T淋巴细胞白血病细胞株来源的混合抗原肽均能够诱导特异性抗肿瘤免疫,其所含的抗原肽之间存在交叉性,通过多株来源的抗原肽混合,这种交叉性可以被放大.
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四型念珠菌与抗念珠菌血清的交叉免疫反应
目的 分析4型不同念珠菌抗血清的免疫应答状况,为念珠菌疫苗的研制奠定实验基础.方法 将白色念珠菌、热带念珠菌、吉利蒙念珠菌、假热带念珠菌4型念珠菌分别超声破碎,0.5%甲醛溶液灭活,加入弗氏完全佐剂制成灭活全菌疫苗.分别在1、4、8、12周腹腔注射免疫小鼠,4周后收集小鼠抗体血清,分别按10、100、1000倍稀释,再分别加入含200μl4种念珠菌的沙氏培养液中,观察其抑菌作用.结果 所有抗体均为10倍效果佳,1000倍基本无效.白色念珠菌抗体血清对白色念珠菌、吉利蒙念珠菌、热带念珠菌有明显的抑菌作用(P<0.01);热带念珠菌抗体血清对白色念珠菌和热带念珠菌有抑菌作用(P=0.01);吉利蒙念珠菌抗体血清对吉利蒙念珠菌、热带念珠菌有抑制作用(P<0.01);假热带念珠菌抗体血清对热带念珠菌、假热带念珠菌有抑制作用(P<0.01).结论 小鼠念珠菌免疫抗体血清对念珠菌的生长有一定的抑制作用.
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重组外膜脂蛋白LipL32与致病性钩端螺旋体抗体的免疫反应性及与不同血清群交叉反应性的Western blotting评价
目的 研究钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL32与致病性钩体抗体的免疫反应性以及与不同钩体血清群之间的交叉反应性,为钩体病的血清学检测提供抗原.方法 依据黄疸出血群赖型56601株外膜脂蛋白LipL32基因序列设计引物,扩增出该基因片段DNA,将其克隆至表达载体pET-28a中.将构建好的重组质粒转化大肠埃希菌BL21并诱导表达,表达的重组蛋白纯化后采用Western blotting评价其与56601株及其他14个血清群致病性钩端螺旋体抗体的免疫反应性和交叉反应能力.结果 扩增获得了56601株脂蛋白LipL32基因,成功构建了原核表达重组质粒pET28a-LipL32.重组蛋白rLipL32为包涵体表达,且与56601株及另外14个血清群的致病性钩端螺旋体的兔抗体发生了特异性免疫反应.结论 原核表达重组外膜脂蛋白rLipL32在致病性钩体血清群之间有良好的交叉反应能力,可初步作为属范围内的钩端螺旋体抗体检测候选抗原.
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肿瘤糖疫苗的研究进展
肿瘤细胞表面异常表达的糖抗原为肿瘤糖疫苗的研究提供了合适的靶标,然而由于这些糖抗原的免疫原性较差,这又给糖疫苗的发展带来了很大的困难.本文概述了近年来科学工作者在提高肿瘤糖疫苗的免疫原性方面所做的努力:半合成的肿瘤糖疫苗将糖抗原与蛋白共价连接,已经有很多疫苗进入了临床试验;随后发展的全合成的肿瘤糖疫苗将糖抗原、T细胞表位和内源性佐剂共价连接,使疫苗的结构和组成更加确定;基于细胞代谢糖工程的肿瘤糖疫苗将非天然的糖疫苗与细胞表面代谢糖工程相结合,得到了强烈的免疫应答;某些基于天然糖抗原结构修饰的疫苗产生的抗体也可以与天然糖抗原发生交叉反应,这为肿瘤糖疫苗的发展提供了新的方向.
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羟苯酯类防腐剂的不良反应
目的 综述羟苯酯类防腐剂不良反应.方法 参阅国外相关文献,总结羟苯酯类的不良反应.结果 羟苯酯类是常用的防腐剂,不良反应表现为过敏、交叉反应和激素效应,会发生“羟苯酯类悖论”现象.结论 医务人员使用含羟苯酯类的制剂处方时,要重视它的不良反应,做到合理运用.
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梅毒螺旋体免疫基因及应用研究进展
梅毒(sypilis)是由梅毒螺旋体(Treponema pallidum,TP)(又称苍白螺旋体)引起的一种慢性全身性传染性疾病[1].其可经性接触、血液和胎盘等途径传播,危害性极大,几乎可侵犯人体所有器官,并可引起妊娠不良或先天性梅毒.梅毒的广泛流行和传播已成为世界各国的公共卫生问题.梅毒螺旋体细长,形似细密的弹簧,结构复杂,一般染料不易着色.其抗原分为如下3类:螺旋体表面特异性抗原(刺激机体产生特异的凝集抗体)、螺旋体内类属抗原(与非病原性螺旋体有交叉反应)和螺旋体与宿主组织磷脂形成的复合抗原(当螺旋体侵入组织后,组织中的磷脂可粘附在螺旋体上,形成复合抗原,可刺激机体产生抗磷脂的自身免疫抗体,称为反应素,可与动物心肌提取的类脂质抗原起沉淀反应或补体结合反应).
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副肿瘤性小脑变性二例
副肿瘤性小脑变性(paraneoplastic cerebellar degen-eration,PCD)是一种与肿瘤相关,但原因不明的小脑非转移性病变,可能与抗肿瘤抗体和神经细胞之间的交叉反应有关[1].临床报告较少,现报告2例并复习相关文献.
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肿瘤抗体治疗与基因抗体治疗的前景
早在1888年,von Behring新发现在白喉或破伤风毒素免疫动物后,其血清中可产生一种中和毒素的物质,从而开始进行抗体研究,他因此获得了第一届诺贝尔奖.但由于这种免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物,特异性不高,容易出现交叉反应,所以其应用受到限制,在随后很长一段时间,抗体技术并没有重大突破.直到1975年,Kohler和Milstein成功研究出杂交瘤技术(获诺贝尔奖),出现单克隆抗体(MAb),这才有了真正意义上的治疗性抗体,为肿瘤的治疗提供了一种新的方法--肿瘤的抗体导向治疗法.
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肿瘤分子靶向治疗进展(二)临床常用分子靶向药物
单克隆抗体1975年Koehler等采用细胞融合技术,使小鼠免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,形成杂交瘤细胞,后者产生的抗体,称为单克隆抗体(monoclonal antibody,MoAb),简称单抗,由于单抗具有性质纯、效价高、特异性强,少或无血清交叉反应等特点,已被广泛应用于肿瘤的治疗.
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近期移植肾排斥反应对长期存活的影响及处理方法
目前同种肾移植的症结所在依然是怎样提高长期存活率和生活质量.由于移植免疫学的迅速发展,同种肾移植近期效果明显提高,移植肾1年存活率超过90%,尸肾移植物半数存活时间(T1/2)亦由原来的6.7年延长至90年代的10.9年,但长期效果还不尽人意.影响长期存活的因素很多,如供肾质量、缺血时间、移植肾功能延迟恢复(GDF)、淋巴毒交叉反应、HLA配型、免疫抑制剂以及急性排斥反应等.近年来,越来越多的证据表明,急性排斥反应是影响移植肾长期存活的重要独立危险因素.
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"传染性非典型肺炎"与其他相似的呼吸道感染的鉴别
■"传染性非典型肺炎"的特点病原学:起初我国学者报告在多例病死的"非典型肺炎"患者不同的组织器官中找到衣原体或是"衣原体样颗粒",并且这种颗粒与病人的血清有交叉反应,所以可以认为在这些尸检的病人确有衣原体或"衣原体样颗粒"的感染,但不能肯定是原发感染,也不能排除终末期病人合并有衣原体或是"衣原体样颗粒"的感染.后来国外和我国学者在患者的身上分离到了变异的冠状病毒,目前一般认为它可能是引起"传染性非典型肺炎"的病原.根据目前的结果,不管是哪一种病毒或衣原体,都是在有变异并增强了传染性与致病性的前提下,才能成为"传染性非典型肺炎"的致病元凶,同时也不能绝对排除有两种或两种以上致病原协同作用的可能.另外,根据广东的经验和我们的观察,有些患者在发病后肺部病变急剧进展呈急性肺损伤改变,皮质激素可以起到较好的疗效,因此推测也有可能在感染的基础上合并有免疫病理改变.
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肝素诱导的血小板减少症及肝素/血小板因子4抗体与低分子肝素交叉反应的初步研究
肝素是治疗及预防血栓性疾病的常用药物.肝素诱导的血小板减少症(heparin-induced thrombocytopenia, HIT)是肝素的不良反应,可伴有病理性血栓形成,称为肝素诱导的血小板减少并血栓形成综合征(heparin-induced thrombocytopenia with thrombosis syndrome, HITTS),有很高的致残率及致死率.低分子肝素(LMWH)也有引起HIT的风险,可与普通肝素(UFH)诱导产生的肝素/血小板因子4抗体(HIT抗体)发生交叉反应[1-2].我们观察了50例动脉硬化闭塞症患者应用UFH治疗后HIT的发病以及低分子肝素钙注射液(尤尼舒)与肝素/血小板因子4抗体间交叉反应情况,报告如下.
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应用基因芯片技术进行HLA-A抗原DNA分型
血清学方法是HLA-A位点的经典分型方法[1].血清学之间的交叉反应,尤其是A19分裂子之间较强的交叉反应以及淋巴细胞膜抗原的弱表达,常常使分型出现技术上的困难和判断误差,因此HLA-A位点的基因分型成为必然趋势.我们在成功研制了DR位点基因分型芯片的基础上[2],研制了HLA-A位点的基因分型芯片并进行了临床验证和应用,现报告如下.
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盘尼西林皮肤测试后不良反应临床分析
目的 比较盘尼西林皮肤测试后的口服抗生素不良反应.方法 两组的性别,年龄,和追踪时间是匹配的.所有的人至少有一次青霉素皮试和口服抗生素.青霉素皮试后平均随访间隔为34.5±16.6个月.共有1655总口服抗生素记录.结果 在青霉素皮试阴性个体的追踪中,头孢菌素药物不良反应发生率显着低于非β-内酰胺(p=0.005).青霉素皮试阴性者使用青霉素是安全的.总的来说,头孢菌素引起较少的药物不良反应,无论青霉素皮试状态(P=0.005)是阴性还是阳性.结论 头孢菌素比非β-内酰胺更安全,对青霉素皮肤试验阳性和阴性个体都是这样.