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商品化的登革病毒、寨卡病毒、日本脑炎病毒和西尼罗病毒IgG抗体检测试剂盒效果评价
目的 比较登革病毒、寨卡病毒、日本脑炎病毒和西尼罗病毒四种商品化黄病毒IgG抗体检测试剂盒的交叉反应情况,并用健康人血清对商品化黄病毒IgG抗体检测试剂盒进行效果评价.方法 登革病毒、寨卡病毒和日本脑炎病毒感染病例(各3例)的恢复期血清,采用ELISA方法检测四种黄病毒IgG抗体,评估商品化黄病毒IgG抗体检测试剂盒的交叉反应情况,从此前出现过输入性寨卡病毒感染确诊病例的江门市采集健康人群血清,检测上述四种黄病毒IgG抗体,后通过蚀斑减少中和实验验证ELISA方法检测的寨卡病毒IgG抗体阳性结果.结果 通过确诊登革热、寨卡和乙脑病例恢复期血清检测发现,已有商品化试剂盒在检测登革病毒、寨卡病毒和日本脑炎病毒阳性血清时存在交叉反应.IgG抗体ELISA检测试剂盒检测发现,78例健康人血清样本中登革病毒抗体阳性样本数为0例;寨卡病毒抗体阳性样本数为8例(阳性率10.25％);日本脑炎病毒抗体阳性样本数37例(阳性率47.43％);33例健康人血清样本中西尼罗病毒抗体阳性样本数为0例.蚀斑减少中和实验结果显示,8例寨卡病毒IgG抗体阳性样本均未检测到中和抗体.结论 商品化黄病毒IgG抗体ELISA检测试剂盒存在交叉反应,单纯运用ELISA试剂盒检测会出现假阳性结果,因此在进行血清学方法检测时应联合其他检测方法.
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Elisa试剂盒法测定抗体修饰纳米粒表面OX26浓度
脑血管疾病是发病率较高的一种疾病，严重危害人类健康。为提高药物血脑屏障透过率可将药物进行抗体修饰，本文针对这种新剂型，应用Elisa试剂盒检测制剂表面是否连接有转铁蛋白受体的单克隆抗体OX26，并测定OX26浓度。
关键词： 血脑屏障 转铁蛋白受体的单克隆抗体 ELISA试剂盒 -
ELISA试剂盒法值得推广的孔雀石绿、结晶紫类物质检测法
孔雀石绿(Malachite Green,MG),结晶紫(Crystal Violet,CV)作为杀真菌剂和消毒剂被广泛应用于水产养殖.
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抗伏马菌素B1单克隆抗体的制备及试剂盒的研制
目的为了能够快速检测粮谷类食品中伏马菌素B1的污染水平,研制具有我国自主知识产权的针对伏马菌素B1快速检测试剂盒.方法制备了能分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,建立了敏感、特异、快速的酶联免疫吸附试验检测方法,终形成具有中国自主知识产权的伏马菌素B1快速检测试剂盒.结果该试剂盒所用单克隆抗体的Ig亚类为IgG1,亲和常数为8.3×10-8mol/L.该抗体与其他结构类似物无明显交叉反应,具有较高的特异性.试剂盒对伏马菌素B1低检出限5ng/ml,标准曲线的线性范围(50～500ng/m1),回归方程Y=-0.582X+1.793(r=0.99,P＜0.05);对玉米作50ng/ml,200ng/ml和500ng/ml 3个加标浓度的回收率在71.89%～112.95%之间;试剂盒在常温状态下有效期至少10个月;实验室内的变异系数和实验室间的变异系数均小于20%.
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TOXO-IgM实验室检测室内质控方法的建立
采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测弓形虫IgM抗体(TOXO-IgM),具有灵敏度高、特异性强、重复性好,所用试剂稳定、易保存,试验操作简便,结果判断客观等特点[1].但在实际工作中,多种ELISA试剂盒的质量优劣不一.因此加强质量管理,做好质量控制才能充分发挥其方法学的优点.
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凝血酶激活纤溶抑制物与冠状动脉病变程度的探讨
1 资料与方法选择2006年10月～2007年8月于山东大学齐鲁医院心脏内科入院或急诊收治的经冠状动脉造影术(CAG)患者100例,男69例,女31例,平均年龄(70.5±10.5)岁.排除出凝血疾病、慢性感染等病史,均经CAG证实.患者均知情同意.凝血酶激活纤溶抑制物(TAFI)抗原(TAFI: Ag)ELISA试剂盒,TAFI活性(TAFI:A)测定试剂盒(美国ADI公司).采用芬兰Thermo Electron Corporation生产的全自动酶标检测仪.
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抗伏马菌素B1单克隆抗体的制备和特性
目的:建立敏感、特异和快速的针对伏马菌素B1(fumonisin B1, FB1)的酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay ,ELISA)检测方法,形成具有我国自主知识产权的快速检测试剂盒.方法:利用B细胞杂交瘤技术,建立能分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株.结果:用伏马菌素B1-牛血清白蛋白(FB1-BSA)偶联物免疫8～10周龄雌性BALB/c小鼠后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合,经过3～4次亚克隆建立了1个稳定分泌抗伏马菌素B1毒素抗体的杂交瘤细胞株,命名为5A9.将杂交瘤细胞打入BALB/c小鼠腹腔,获得含抗伏马菌素B1毒素单克隆抗体的腹水,并将腹水用饱和硫酸铵法进行纯化,得到单克隆抗体.该单克隆抗体的Ig亚类为IgG1,腹水中抗体的滴度分别为2.56×106,参考工作浓度为3.2×105.纯化后抗体的IgG含量为10.4 g/L,亲和常数为8.3×10-8 mol/L.该抗体与其他结构类似物无交叉反应,具有较高的特异性.结论:制备了具有高特异性和亲和力的抗伏马菌素B1单克隆抗体,初步形成了针对伏马菌素B1的ELISA检测试剂盒.
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利用日ISA试剂盒检测乙型肝炎血清标志物的几点注意事项
利用ElisA试剂盒检测乙型肝炎血清标志物应是临床免疫实验室的主导技术,操作较简单,但操作或使用不当会影响检测结果.
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三种方法测定乙肝表面抗原结果比较
目的 比较三种方法对乙肝表面抗原的检测结果,分析不同方法对检测结果的影响.方法 对我院体检的120例用ELISA试剂盒、乙肝表面抗原试纸条、反向被动血凝法三种方法测定血清乙肝表面抗原.结果 120例体检者经过ELISA及HBsAg纸条法有13例阳性,反向被动血凝法有10例阳性.结论 反向被动血凝法灵敏度不如ELISA及HBsAg纸条法,仅适于筛查.临床应首选质量好的ELISA试剂盒进行HBsAg的检测,可疑结果用HBsAg纸条进行复验.
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利用ElISA试剂盒检测乙型肝炎血清标志物的几点注意事项
利用ElisA试剂盒检测乙型肝炎血清标志物英是临床免疫实验室的主导技术,操作较简单,但操作或使用不当会影响检测结果.
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利用ElISA试剂盒检测乙型肝炎血清标志物的几点注意事项
利用ElisA试剂盒检测乙型肝炎血清标志物英是临床免疫实验室的主导技术,操作较简单,但操作或使用不当会影响检测结果.
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针对SARS患者的特异性抗体检测结果不容乐观
问题篇:SARS抗体的检测结果令人堪忧◆北京佑安医院临床检验中心抗体检测结果:为了探讨SARS患者体内抗SARS冠状病毒抗体的产生和变化规律,北京佑安医院采用经国家食品药品监督管理局(SDA)审批的,由中国医学科学院、军事医学科学院和北京华大基因工程有限公司共同开发研制的抗SARS冠状病毒抗体检测试剂盒(ELISA试剂盒),对75例住院SARS患者的390份血清标本进行了IgM抗体和IgG抗体的检测.
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白色念珠菌肠道感染对脾虚小鼠脾指数、γ干扰素、白介素10影响随机平行对照研究
[目的]观测白色念珠菌肠道感染对脾虚小鼠脾指数、γ干扰素、白介素10影响.[方法]使用随机平行对照方法,将60只SPF级昆明小鼠(雌雄各半,体质量20±2g)按随机数字表法分为4组,空白组(A组)、脾虚模型组(B组)、白色念珠菌感染组(单纯感染组,C组)、白色念珠菌脾虚感染组(脾虚感染组,D组),15只/组.使用饮食失节+劳倦过度复合因素方法复制脾虚模型,实验第1d起,B、D组小鼠单日游泳至耐力极限,禁食饲料,喂饲甘蓝;双日喂饲猪油脂0.5mL/只;A、C组小鼠正常饲养;连续14d.实验前7d,将白色念珠菌株在沙保斜面培养基上转种2次,37℃恒温箱培养24h,选择3个直径≥1mm菌落,无菌生理盐水制成菌悬液,血球计数板计数,调整菌液至2×108CFU/mL.灌胃干预:实验第15d,C、D组灌胃白色念珠菌悬液0.2mL/10g体质量,浓度为2×108CFU/mL,A、B组等量生理盐水.实验第35d,各组小鼠随机取10只称体质量,脊髓离断,取脾脏并称质量,冲脾法制备脾细胞悬液,光镜下计数脾细胞,调浓度至107,取100μL加1640培养液500μL混匀;二氧化碳培养箱培养48h,取上清液.观测脾指数、脾细胞IFN-γ、IL-10(双抗体夹心法,严格按照ELISA试剂盒说明操作).[结果]实验第35d(染菌3周),脾脏外观形态单纯感染组和脾虚感染组体积增大,尤其是脾虚感染组增大明显,颜色变深,呈深暗红色.脾指数单纯感染组和脾虚感染组明显高于空白组(P＜0.05,P＜0.01),单纯感染组和脾虚感染组明显高于脾虚模型组(P＜0.01),脾虚感染组明显高于单纯感染组(P＜0.01).IFN-γ、IL-10脾虚感染组明显高于空白组(P＜0.01),单纯感染组和脾虚感染组明显高于脾虚模型组(P＜0.05或P＜0.01),脾虚感染组明显高于单纯感染组(P＜0.01).[结论]白色念珠菌肠道感染可升高脾虚小鼠脾指数,促进脾细胞IFN-γ和IL-10表达.
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酶联法检测流感疫苗中卵清蛋白含量试剂盒的质量验证
目的 验证酶联法检测流感疫苗中卵清蛋白含量的试剂盒的质量.方法 选取卵清蛋白标准品及20批全病毒流感灭活疫苗,对北京天坛生物制品股份有限公司生产的卵清蛋白ELISA试剂盒(简称天坛试剂盒)进行验证,确定该试剂盒的佳检测区间、精密度、准确度及稳定性,并与德国Seruzym试剂盒进行比较,确定二者之间是否有相关性.结果 天坛试剂盒的佳检测区间为2.5～20 ng/ml,试验间精密度分别为0.37%～9.79%、1.25%～5.57%和0.70%～5.51%,均小于10%;试验内精密度为1.28%;配制5、10和20 ng/ml 3个浓度的标准品,由同一实验人员分别进行9次准确度验证,回收率分别为105.67%、108.61%和98.67%;37℃放置3 d与4℃保存的试剂盒检测结果之间差异无显著意义(t=2.075,P=0.051 8);与进口试剂盒检测结果之间存在正相关关系(r=0.989,t=24.56,P＜0.000 1)和直线回归关系(b=0.629,F=602.97,P＜0.000 1),直线回归方程为(y)=0.629x-13.77.结论 天坛试剂盒具有较好的精密度、准确度及稳定性;检测结果与进口试剂盒存在正相关和直线回归关系,可以用于卵清蛋白的常规检测.
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Vero细胞HCP试剂盒的稳定性观察
目的 观察vem细胞HCP试剂盒的稳定性.方法 将Vem细胞HCP试剂盒分别于2-8℃和37℃放置不同时间,检测试剂盒的灵敏度、特异性、准确性及精密性.结果 试剂盒在2～8℃放置10个月的特异性及灵敏度均较好;检测参考品的回收牢在91.7%～114.8%之间;对不同制品检测结果 的变异系数均小于10%.37℃放置7d,试剂盒的灵敏度仍可达12.5 ng/ml;放置10d,检测参考品的回收率在85%-115%之间;对不同制品检测结果 的变异系数均小于10%.结论 Veto细胞HCP试剂盒于2～8℃放置10个月及37℃放置7d的稳定性较好,仍可正常使用.
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电针对佐剂性关节炎大鼠血清IL-2和IL-10的影响
l 实验材料 Wistar大鼠40只,雄性,体重180-200g,1.5月龄,黑龙江中医药大学实验动物中心提供.弗氏完全佐剂:美国Sigma;血清白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素一lO(IL-10)ELISA试剂盒:美国ADL公司.KWD-808Ⅱ型电针仪:常州长城;Anthos 2010型全自动定量酶标仪:奥地利;AB204-N电子分析天平:梅特勒托利多集团;TCL-16B高速台式离心机:上海安宁科学仪器厂.
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ELISA试剂盒底色较深的室间控制探讨
酶联免疫吸附试验(ELISA)技术问世以来,因其操作简便、反应敏感、结果准确、特异性强在医药卫生中被广泛地应用.但目前国内用于检测的ELISA试剂盒品牌较多,质量参差不齐,非特异性反应时有出现.非特异性反应的产生是造成假阳性的重要原因之一,检测工作者决不可忽视.作者在该技术的应用过程中对操作方法进行了一些探索,现对ELISA试剂盒底色较深的室间控制提出一些看法.
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闽产砂仁中黄曲霉毒素B1的含量测定及限量制定
目的 对闽产21批次砂仁中黄曲霉毒素B1的含量进行测定,并初步制定其限量标准.方法 间接竞争酶联免疫吸附法（ELISA法）.结果 被测样品均有不同程度的污染黄曲霉毒素B1(AFB1),并且在贮藏过程中有发霉现象者含量较高.结论 建立中药长泰砂仁的黄曲霉毒素B1含量限度标准非常必要.
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弓形虫多表位基因重组抗原在弓形虫免疫检测中的应用
目的 评价弓形虫多表位基因重组抗原在弓形虫感染诊断中的效果,探索多表位抗原在弓形虫免疫检测中的应用前景.方法 以Ni-NTA Agarose和割胶电渗两步纯化法,获取弓彤虫多表位基因的原核表达纯化产物rMAG,以适宜浓度的rMAG包被ELISA微孔板,分别检测弓形虫急性和慢性感染血清,评价试剂盒检测的敏感性和特异性.结果 经Ni-NTA Agarose和割胶纯化,得到了纯度为95.86%的弓形虫多表位重组可溶性抗原.以3 μg/ml的抗原浓度包被ELISA微孔板,对兔和小鼠的急慢性弓形虫感染血清进行了检测.结果 检测小鼠血清141份.其中慢性感染弓形虫小鼠血清117份、正常小鼠血清24份,检测体系的敏感性为88.88%,特异性为91.67%,一致性为89.36%.检测兔血清24份,其中急性感染弓形虫兔血清18份,正常兔血清6份,阳性血清检出率为94.4%.总一致性为91.5%.结论 以弓形虫多表位重组抗原构建的ELISA试剂盒既可以检测弓形虫急性感染血清,又可以检测弓形虫慢性感染血清,具有一定的应用前景.
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双抗体间接夹心ELISA法检测乳腺癌患者外周血MUC1蛋白水平的评价
目的 优化双抗体问接夹心ELISA试剂盒,并探讨其在乳腺癌患者中检测MUC1黏蛋白水平的应用价值.方法 用基因重组MUC1-GST和MUCl-MBP融和蛋白免疫家兔和大鼠,获得抗MUC1血清,并对其纯化,获得纯化的家兔抗人及大鼠抗人MUC1多克隆抗体；经不同的筛选确立了以家兔抗人MUCl抗体作为包被抗体、大鼠抗人MUC1抗体作为检测抗体的双抗体问接夹心试剂盒,敏感度可达到0.2 ng/ml.结果 应用建立的试剂盒对40例乳腺癌,18例乳腺良性疾病和120健康对照者血清中MUC1蛋白水平的进行检测,检则结果绘制ROC曲线,分析得出以2.75 ng/ml为乳腺癌患者与乳腺良性疾病患者的临界值,以1.86 ng/ml为乳腺疾病与正常人为临界值,检测结果表明本研究对乳腺癌诊断的阳性率高达97.5％,乳腺良性疾病的阳性率为66.7％,正常人特异性为96.7％.对于乳腺癌同一病例样本用酶联免疫法CA15-3诊断试剂盒进行对比检测,其检出率为3.33％,特异度为100％.绘制ROC曲线对比显示,本研究所建立的双抗体夹心ELISA方法对乳腺癌诊断的准确度明显高于CA15-3试剂盒.结论 本研究成功建立了特异性强,灵敏度良好的双抗体间接夹心ELISA试剂盒,有望开发为临床辅助诊断的常规试剂盒,尤其有望应用于乳腺癌的大规模筛查及早期诊断.
关键词： MUC1 抗MUC1多克隆抗体 ELISA试剂盒 乳腺癌
