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泰莱-Ⅱ型时间分辨荧光免疫分析仪检测肿瘤标记物的方法学评价
目的 对广州丰华公司泰莱(TALENT)-Ⅱ型时间分辨荧光免疫分析仪定量检测肿瘤标记物的方法学予以评价.方法 参照NCCLS EP10-T2文件,对泰莱Ⅱ型时间分辨荧光免疫分析仪检测人血清中的甲胎蛋白(hAFP)、癌胚抗原(CEA)进行评价,内容主要为线性、偏差、不精密度等指标.结果 高、中、低三种浓度CEA的绝对偏差分别是0.33、9.15、7.54 ng/ml,低于允许偏差的2.15、32.16、107.46 ng/ml;三种浓度hAFP的绝对偏差分别是6.06、57.02、66.81 U/ml,低于允许偏差的6.54、107.73、247.98 U/ml;三种浓度CEA的总不精密度分别是26.65%、3.30%和0.94%;hAFP的总不精密度分别是21.44%、0.86%和0.35%,除低浓度外均小于NCCLS文件规定的15%.与电化学发光法有良好的相关性,两个项目的相关系数分别为0.999 3、0.994 6.结论 TALENT-Ⅱ型时间分辨荧光免疫分析仪检测CEA和hAFP线性好,准确度高,精密度好,与电化学发光定量分析法高度相关,仪器稳定性好,性能可靠.
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两种方法检测C反应蛋白结果的可比性分析
目的：探讨2种方法检测血清和全血C反应蛋白（CRP）的结果可比性。方法采集40例患者血清及全血样本，并将其分为血清组和全血组，每组均为40份。血清组样本采用IMMAGE 800型全自动特定蛋白分析仪，全血组样本采用i-CHRO-M A Reader免疫荧光分析仪进行CRP测定，采用单因素方差分析、χ2检验及线性回归分析对检测结果进行统计学分析。结果经χ2检验及单因素方差分析，血清组和全血组样本检测结果的差异无统计学意义（P＞0．05）。将血清组和全血组样本CRP测定结果进行线性回归分析，得到线性回归方程：Y＝0．928 X＋0．662，其曲线拟合度指标 R2为0．896，Pearson相关系数为0．948，曲线的回归关系有统计学意义（P＜0．05）。结论血清免疫散射比浊法和全血免疫荧光定量法检测CRP的结果具有可比性，二者均可用于临床样本的检验。
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慢性丙型肝炎病毒感染者血清中自身抗体检测结果分析
.6%.结论 HCV感染可触发机体自身免疫反应,自身免疫可能是HCV感染后组织损伤的重要因素.
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两种血清学检测方法在婴、幼儿肺炎支原体感染早期诊断中的应用研究
目的 比较和分析肺炎支原体抗体的两种血清学检测方法,探讨其在婴、幼儿肺炎支原体感染早期诊断中的临床意义.方法 收集急性呼吸道感染患儿3 365例,根据不同年龄将其分为0～<1岁组(n=1 267)、1～<3岁组(n=1 709)、3～<6岁组(n=257)、6～<13岁组(n=132).采用被动颗粒凝集法(PPA)及间接免疫荧光法(IFA)检测肺炎支原体抗体MP-IgM,对IFA和PPA检测结果不一致的患儿进行双份血清MP-IgM抗体效价检测.结果 0～<1岁和1～<3岁组患儿IFA检测的MP-IgM阳性率高于PPA检测(P＜0.01),3～<6岁组和6～<13岁组患儿采用两种方法检测的MP-IgM阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05).两种检测方法的阳性符合率为95.53%(1 113/1 165),阴性符合率为89.45%(1 968/2 200),总符合率为91.56%(3 081/3 365).28例患儿双份血清MP-IgM抗体效价检测中,24例患儿的肺炎支原体抗体升高4倍.结论 IFA和PPA联合检测可有效提高肺炎支原体感染早期诊断的敏感性和特异性.
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胃蛋白酶原Ⅱ的检测与应用
目的 探讨时间分辨荧光法(TRFIA)、化学发光免疫分析法(CLIA)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)的相关性,及其临床实用性.方法 在TRFIA法检测的临床标本中随机选择88份血清标本,分别用CLIA法和ELISA法再次检测PGⅡ,分析3种方法检测结果的相关性;对消化科门诊/病房患者和体检人群进行回顾性分析,验证TRFIA法检测PGⅡ对胃病筛查的可行性.结果 TRFIA法(Y)与CLIA法(X)PGⅡ检测结果呈显著正相关(r=0.946 7,P=0.000 1),回归方程为:Y=0.952 8X+0.571 1(P=0.000 1);TRFIA法(Y)与ELISA法(X)PGⅡ检测结果呈显著正相关(r=0.961 8,P=0.000 1),回归方程为:Y=0.727 5X+0.2617(P=0.0001);ELISA法(Y)与CLIA法(X)PGⅡ检测结果呈显著正相关(r=0.980 6,P=0.000 1),回归方程为:Y=1.304 9X+0.480 0(P=0.000 1);体检人群、消化科门诊患者、消化科住院患者的血清PGⅡ水平分别为(15.97±10.82)ng/mL、(20.75±17.27)ng/mL、(35.64±41.14)ng/mL,消化科门诊患者血清PGⅡ水平明显高于体检人群(P<0.05),消化科住院患者血清PGⅡ水平明显高于消化科门诊患者(P<0.05).结论 PGⅡ可能用于浅表性胃炎、胃十二指肠糜烂或溃疡的筛查,但鉴于不同方法检测结果的差异,建议各实验室根据不同方法建立自己的参考值.
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慢性萎缩性胃炎及胃癌患者血清胃蛋白酶原检测的临床价值
目的 研究血清中胃蛋白酶原(PG)亚群(PGⅠ、PGⅡ)的含量与慢性萎缩性胃炎及胃癌的关系,探讨血清PG测定对萎缩性胃炎及胃癌患者的临床诊断价值.方法 用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法检测66例萎缩性胃炎及胃癌患者血清PG的含量,并与对照组进行统计学分析.结果 (1)与对照组相比,萎缩性胃炎及胃癌患者,PGⅠ水平显著性下降(P<0.05),但PGⅡ差异无统计学意义(P>0.05),而PGⅠ/PGⅡ有所下降.(2)与萎缩性胃炎组相比,胃癌患者PGⅠ、PGⅡ及PGⅠ/PGⅡ略低于萎缩性胃炎,P>0.05.结论 血清PG的水平是慢性萎缩性胃炎和胃癌患者筛查的敏感指标,即血清PG的含量与胃黏膜疾病密切相关.而血清PGⅠ及PGⅠ/PGⅡ比值降低有可能是萎缩性胃炎和胃癌人群的早期筛查和辅助性诊断的血清学指标.
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时间分辨免疫荧光法在低浓度范围HBsAg检测中的应用价值
目的 探讨时间分辨免疫荧光法(TRFIA)检测低浓度HBsAg的佳阈值和诊断性能,及其与电化学发光法(ECL)定性结果的一致性.方法 选择TRFIA检测结果为HBsAg低浓度(0.16～5.0 μg/L)的标本499例,以ECL检测结果为乙型肝炎病毒(HBV)感染诊断依据,应用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析TRFIA检测低浓度HBsAg的佳阈值和诊断性能,以Kappa检验分析TRFIA与ECL定性结果的一致性.结果 TRFIA诊断低浓度HBsAg的ROC曲线下面积为0.587；取大Youden指数、大阳性似然比、低检出浓度对应的阈值及实际工作中使用的阈值时(分别为0.397、2.610、0.200、0.500 μg/L),诊断灵敏度分别是61.1％、9.1％、88.6％、45.7％,特异度分别是60.1％、96.7％、10.3％、66.7％,漏诊率分别是38.9％、90.9％、11.4％、54.3％,误诊率分别是39.9％、3.3％、89.7％、33.3％.以0.500 μg/L作为阈值时,TRFIA与ECL检测结果比较Kappa值为0.120,P＜0.05；以0.397 μg/L作为阈值时,Kappa值为0.202,P＜0.05.经ECL确认的176例(39.2％)低浓度HBsAg标本中,HBsAg＜0.2 μg/L者占11.9％(21/176)、0.2～0.5 μg/L者占42.6％ (75/176)、0.5～1.0μg/L者占19.9％(35/176)、1.0～5.0 μg/L者占25.6％(45/176).结论 应用TRFIA检测低浓度HBsAg标本时,各实验室应建立合适的诊断阈值；其与ECL检测结果的一致性一般,准确性低,需采用更灵敏的方法进行结果确认.
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甲胎蛋白和游离β-绒毛膜促性腺激素双标记时间分辨荧光免疫滤纸干血片测定试剂盒的性能评价
目的 对研制的甲胎蛋白(AFP)和游离β人绒毛膜促性腺激素(fβ-hCG)双标记时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)滤纸干血片测定试剂盒进行性能评价.方法 应用TRFIA法检测滤纸干血片中AFP和fβ-hCG的含量,并对干血片检测方法的精密度、分析灵敏度、特异性、Hook 效应等进行评价,与同类试剂盒进行方法学比对试验.结果 待评价试剂盒AFP和fβ-hCG的剂量-反应曲线线性相关系数(r)可达0.99以上;批内、批间CV(%)均小于10.0%;AFP和fβ-hCG的灵敏度均不高于1.5 U/mL和2.0 ng/mL;与同类试剂比对,AFP和fβ-hCG结果的线性r均可达0.99以上;临床研究评价一致程度百分比可达100%.结论 待评价试剂盒具有灵敏度高,精密度好,特异性强,样本需求量少的优点;与同类产品检测结果相关性好,能满足临床需要.
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时间分辨荧光免疫分析法测定HBsAg的方法学评价
时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)具有灵敏度高、重复性好、标准曲线动态范围宽、标志物存储时间长等优点,已广泛用于临床[1],特别是近年来,作为检测乙型肝炎标志物的方法之一已逐步受到人们的重视[2].关于TRFIA的方法学评价较全面的报道并未见到,本文以检测HBsAg为例,对TRFIA方法学评价作了以下探讨.
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尿微量清蛋白时间分辨荧光免疫检测法的建立
目的 建立尿微量清蛋白(UmALB)的时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA).方法 以羊抗兔IgG包被板条,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3+及标记清蛋白(ALB),采用竞争法建立UmALB-TRFIA检测方法.发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液,数据采用双对数法数据处理程序.结果 此法的批内和天间CV分别为4.8%和5.4%,平均回收率为100.93%,灵敏度为0.34 μg/mL,线性范围为0.34～135 μg/mL.本方法与β2-微球蛋白无交叉反应,血红蛋白浓度小于4 g/L时对本方法无干拢,同放免法比较,结果相关性好.结论 尿微量清蛋白的时间分辨荧光免疫分析法的敏感度、特异性、准确度等指标符合临床诊断要求.
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自身抗体检测在系统性红斑狼疮诊断中的价值
目的 评价血清Smith抗体(抗-Sm)、抗核小体抗体(AnuA)、组蛋白抗体(AHA)、双链DNA抗体(抗-ds-DNA)、脱氧核糖核蛋白抗体(抗-DNP)、抗核抗体(ANA)联合检测在系统性红斑狼疮(SLE)诊断中的临床应用价值.方法 抗-ds-DNA及ANA采用间接免疫荧光法检测,抗-Sm采用免疫印迹法检测,AnuA和AHA采用酶联免疫吸附试验检测,抗-DNP采用胶乳凝集法检测.结果 56例SLE患者抗-ds-DNA、AnuA、AHA、抗-DNP、抗-Sm、ANA的阳性率分别为48%、46%、42%、51%、32%和100%.6项自身抗体联合检测的阳性率为100%,诊断效率为100%.结论 自身抗体联合检测大大提高了SLE的敏感性和诊断效率,可避免因单项检测出现的误诊和漏诊情况,对SLE的诊断和治疗有重要意义.
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乙型肝炎两对半和HBV DNA定量检测的临床应用
目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)免疫标志物(HBV-M)与HBV DNA之间的相互关系,为临床诊断、治疗乙型肝炎提供有价值的判断标准.方法 用时间分辨荧光免疫法(TRFIA)定量检测HBV-M,并与荧光定量聚合酶链反应检测HBV DNA相比较.结果 105例乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗体(抗-HBe)、乙型肝炎核心抗体(抗-HBc)均为阳性,85例HBsAg、HBeAg、抗-HBc均为阳性;34例乙型肝炎病毒抗体(抗-HBs)、抗-HBe、抗-HBc阳性组中HBV DNA的检出率分别为65.7%、96.5%和11.7 %.以HBsAg含量为100 ng/mL作为HBV复制的诊断限.其特异性和敏感性分别是70.O%和84.O%.结论 TRFIA定量检测HBV-M灵敏度高、特异性强、操作简便,无放射性污染,是一种较好的HBV-M测定方法 ,在实验室不具备HBV DNA定量测定的条件下,选择TRFIA进行乙型肝炎两对半定量检测也是一种较好的方法 .
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时间分辨荧光免疫法检测乙型肝炎病毒标志物
目的 探讨时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)检测乙型肝炎病毒(HBV)5项血清学指标的临床应用价值.方法 用酶联免疫吸附试验(ELISA)和TRFIA同时测定188例患者HBV血清标志物5项指标.结果 两种方法测定乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗体(抗-HBe)、乙型肝炎核心抗体(抗-HBc)结果符合率分别为94.7%、96.8%、95.7%、89.4%和90.4%,经成组卡方检验,两种检测方法结果相关性良好(P<0.01),经配对卡方检验,两种方法检测HBsAg、抗-HBs、HBeAg结果差异无统计学意义(P>0.05),检测抗-HBe、抗-HBc结果差异有统计学意义(P<0.05).TRFIA法阳性率高于ELISA法.结论 TRFIA法是一种灵敏、特异、准确的定量检测方法,对评估HBV感染后病情转归及抗病毒治疗的疗效具有重要的临床意义.
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CD25在人肝毛细胆管的表达
肝脏疾病种类繁多,有相当一部分涉及肝毛细胆管,但毛细胆管用普通HE染色无法辨认,往往需电子显微镜才能观察其形态,导致我们对毛细胆管的分布、形态、病变认识不足.因此,有必要寻求一种方便、实用、低成本的方法来标记肝毛细胆管.本研究通过免疫组织化学,免疫荧光均证实人肝组织毛细胆管表达CD25,并通过阻断试验进一步证实CD25表达的特异性.
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激光共聚焦显微镜对肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的荧光定量分析
拟以间接免疫荧光组织化学染色配合激光共聚焦显微镜扫描探讨一种准确、定量反映肝组织Ⅰ、Ⅲ胶原变化的新方法.
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微量免疫荧光试验和PCR在诊断肺炎衣原体急性感染中的应用
目的 探讨肺炎衣原体(Cpn)急性感染在呼吸道疾病中的重要性。方法 用微量免疫荧光(MIF)试验检测了93例住院病人血清中Cpn抗体IgG，同时用PCR测定了其中55例病人咽试子标本中Cpn DNA。结果 35.5%呼吸道疾病存在Cpn急性感染。在肺炎组抗体(效价≥512)阳性率为47.6%，提示1998～1999年可能处在北京市Cpn流行期；在哮喘组的阳性率达到50%；在肺心病组和肺癌组的阳性率分别为50.0%和26.3%。PCR检测Cpn的阳性率仅为9.1%，MIF和PCR的检测结果存在差别。结论 检测Cpn抗体IgG有助于对Cpn急性感染进行诊断，从而指导临床用药。
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抗双链DNA抗体不同检测方法的比对分析
目的 评价间接免疫荧光法(IIFA)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)和免疫印迹法(IBT) 检测抗双链DNA(dsDNA)抗体的特点及应用价值.方法 采用IIFA、ELISA和IBT法对实验组(系统性红斑狼疮患者,n=70)及健康对照组(健康人,n=650)血清标本进行抗dsDNA抗体的检测.结果 经IIFA、ELISA法及IBT法检测,实验组抗dsDNA抗体的阳性率分别为34.29%,54.29%和44.29%;健康对照组抗dsDNA抗体的阳性率分别为0.15%,4.46%和1.54%,ELISA和IBT检出阳性率与IIFA方法比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 在血清抗dsDNA抗体的检测上,IIFA法特异性高,敏感性较低;而ELISA和IBT法检测敏感性高,特异性较差.
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ASPP家族基因在膀胱尿路上皮癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨ASPP1、ASPP2及iASPP基因在膀胱尿路上皮癌组织中的表达及其临床意义.方法 应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(fqRT-PCR)对30例膀胱尿路上皮癌组织及其癌旁组织中ASPP1、ASPP2及iASPP mRNA的表达进行检测.结果 膀胱尿路上皮癌组织中ASPP1、ASPP2 mRNA的表达水平(0.651±0.214、0.703±0.184)显著低于正常膀胱组织(0.923±0.182、0.963±0.208)(P<0.05),而膀胱尿路上皮癌组织中iASPP mRNA的表达水平(0.508±0.227)明显高于正常膀胱组织(0.305±0.136) (P<0.05).ASPP1、ASPP2及iASPP mRNA的表达与膀胱尿路上皮癌的分化程度有关(P<0.05).结论 ASPP1、ASPP2及iASPP mRNA在膀胱尿路上皮癌组织中有不同程度的表达,可能参与了膀胱尿路上皮癌的发病.
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人子宫内膜基质细胞的分离纯化和体外培养方法研究
目的：分离和纯化人子宫内膜基质细胞用于宫腔粘连发病机制的研究。方法通过二次酶消化、一次网筛和差时贴壁等方法，分离和纯化人子宫内膜基质细胞，体外培养传代，通过免疫组织化学法进行细胞表型鉴定。结果基质细胞在接种后30 min开始贴壁，可见梭形和多角形2种形态的细胞。免疫组织化学显示这2种细胞具有波形蛋白免疫反应性，反应率可达95％以上，而细胞角蛋白无免疫反应性，提示其为来源于内膜基质的基质细胞。分离出的子宫内膜基质细胞可以在体外进行增殖。结论采用二次酶消化、一次网筛和差时贴壁纯化等方法，可成功分离人子宫内膜基质细胞，且基质细胞可以有限的传代。
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时间分辨荧光免疫法与酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒血清标志物的比较
目的：探讨时间分辨荧光免疫法与酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒血清标志物的临床价值。方法选取该院检验科2013年6~12月收取的乙型肝炎患者血清标本250份，分别采用时间分辨荧光免疫法与酶联免疫吸附法进行检测，比较2种方法对乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）、乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）、乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）及乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）等乙型肝炎病毒血清标志物阳性检出率。结果时间分辨免疫荧光法用于乙型肝炎患者HBsAg、HBeAb、HBcAb、HBsAb及HBeAg检测阳性率均明显高于酶联免疫吸附法，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论相较于酶联免疫吸附法，时间分辨荧光免疫法用于乙型肝炎患者可显著提高病毒血清标志物阳性检出率，具有临床应用价值。
