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荧光法测定浮游植物体内叶绿素a的探讨
浮游植物体内叶绿素a是水质评价和富营养化水体的重要评价指标之一,目前国内多采用国家环保总局<水和废水监测分析方法>推荐的分光光度法作为浮游植物体内叶绿素a的测定方法,该法实验时提取过程繁琐,提取时间较长,且灵敏度较低.
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荧光定量聚合酶链反应法检测学龄儿童血清乙型肝炎病毒
目的用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法定量检测学龄儿童血清中的乙型肝炎病毒(HBV),以指导临床.方法以完全闭管式实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法,检测248份学龄儿童血清标本,同时用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测其中HBV的免疫标志物.结果 208份患儿血清标本HBV DNA的阳性率为76.0%,其中HBsAg、HBeAg、HBcAb组88份,HBsAg、HBeAg组12份和HBsAg、HBeAg、HBeAb、HBcAb组8份的阳性率均为100%,HBV DNA的平均拷贝数分别为1.0×108、4.4×108和2.2×107,其余各组HBV DNA的阳性率与HBsAg、HBeAg、HBcAb组比较,结果均为P＜0.01.40例健康儿童血清中的HBV DNA全部为阴性.结论 FQ-PCR可以检测学龄儿童HBV感染和复制的真实情况,对于儿童乙型肝炎的临床诊断、疗效观察和判断预后有较好的指导意义.
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血清胃蛋白酶原对胃癌癌前病变的诊断价值研究
目的：通过检测血清胃蛋白酶原在胃黏膜不同病理状态下的表达水平，探讨其作为临床筛查胃癌标志物的可能性及定量范围。方法用时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）法检测63例胃黏膜非典型增生、64例慢性萎缩性胃炎、67例胃癌患者和20例健康志愿者血清胃蛋白酶原（PG）Ⅰ、Ⅱ的含量，计算PGⅠ/PGⅡ比值（PGR），并对3类病变进行等级分组，比较PG水平在组间和组内差异。结果①与健康对照组（152．00μg/L）比较，萎缩性胃炎、非典型增生和胃癌患者PGⅠ水平中位数值分别为124．01、91．23和71．23μg/L，差异有统计学意义（Z＝-2．52，P＝0．0170；Z＝-3．42，P＝0．0014；Z＝-3．57，P＝0．0009）。PGR水平M值分别为7．61、5．21和4．32，低于健康组（15．38），差异有统计学意义（Z＝-2．98，P＝0．0029；Z＝-3．17，P＝0．0002；Z＝-2．89，P＝0．0001）；PGⅡ与健康组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。②非典型增生和胃癌组血清PGⅠ水平与萎缩组比较差异有统计学意义（Z＝-2．42，P＝0．0024；Z＝-3．62，P＝0．0009）；PGⅡ和PGR水平差异无统计学意义（P＞0．05）。③血清PGⅠ水平在萎缩性胃炎和胃癌组3个级别小组内比较差异无统计学意义（χ2＝2．86，P＝0．4143；χ2＝1．67，P＝0．1368）；而PGⅠ在非典型增生组，轻中度呈下降趋势，重度升高，差异有统计学意义（χ2＝0．83，P＝0．0430），PGⅡ水平和PGR差异无统计学意义（P＞0．05）。④以正常组和胃黏膜非典型增生组的血清PGⅠ和PGR所作的受试者工作特征（ROC）曲线下的面积分别为0．782和0．831；以血清PGI≤72．12μg/L和PGR≤4．32作为临界值筛查胃黏膜非典型增生的敏感性和特异性分别为89．48％和76．31％。结论①随胃黏膜病变严重程度增加，PGⅠ水平和PGR呈下降趋势，PG有可能作为胃黏膜恶性变的筛查标记物。②血清PG水平与胃黏膜病变密切相关，以血清PGI≤72．12μg/L联合PGR≤4．32作为临界值筛查胃黏膜非典型增生在本地区可能具有较好的敏感性和特异性。
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冷冻治疗对尖锐湿疣病人T淋巴细胞亚群及白细胞介素-2水平的影响
①目的探讨冷冻治疗对尖锐湿疣(CA)病人免疫功能的影响.②方法采用间接免疫荧光法和ELISA法分别对36例CA病人冷冻治疗前后不同时期及15例正常人外周血T淋巴细胞亚群、血清白细胞介素-2(IL-2)水平进行测定.③结果与正常组比较,CA病人治疗前外周血中CD4+细胞百分率降低(F=238.570,q=1 7.495,P＜0.05),CD4+/CD8+比值降低(F=206.343,q=18.060,P＜0.01),CD8+细胞百分率升高(F=343.459,q=30.359,P＜0.01),血清IL-2水平降低(F=95.337,q=13.841,P＜0.05);冷冻治疗后以上指标与对照组比较,均有明显改善(F=95.337～343.459,q=17.518～29.956,P＜0.01).④结论冷冻治疗可以提高CA病人的免疫功能.
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细胞粘着分子CD44V6在膀胱肿瘤中的表达
目的:探讨细胞粘着分子CD44V6在膀胱肿瘤中的作用及其临床意义.方法:利用免疫荧光法检测了28例膀胱肿瘤和5例正常膀胱移行上皮组织中CD44V6的表达情况.结果:浸润型膀胱肿瘤组织CD44V6阳性表达率为44.44%和75.00%,浅表型膀胱肿瘤阳性表达率为13.33%(P＜0.05),正常组织均阴性表达.半定量检测分析显示CD44V6的表达水平与肿瘤的分级和分期相关.结论:CD44V6的检测是一种提示肿瘤浸润和预后有实用价值的诊断指标.
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CA50时间分辨荧光免疫分析法的建立及对肿瘤诊断的临床应用
目的 建立CA50的时间分辨荧光免疫分析法(CA50-TRFIA),并对其方法 学及肿瘤诊断临床应用价值进行评价.方法 用稀土离子铕(Eu3+)标记CAS0单克隆抗体,以微孔板为载体,固相夹心法建立CA50-TRFIA.通过对76例恶性肿瘤患者、47例良性疾病患者以及213例健康人血清CA50的测定,应用临床诊断试验评价方法 ,对CA50 TRFIA方法 学和临床应用价值进行评价.结果 CA50 TR-FIA检测灵敏度为1.08×103 u/L,批内和批间CV分别为2.6%和3.5%,平均回收率为108.61%,与IR-MA法测定值的相关系数为0.904,可测范围为(1.08～140)×103u/L,良性疾病组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).卵巢肿瘤组、消化道肿瘤组、肺癌组分别与良性疾病组和对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01).结论 CA50时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)法具有良好的特异性、准确度、稳定性,且无放射污染,可作为肿瘤的辅助诊断指标.
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丙型肝炎病毒感染患者血清肝特异性自身抗体的检测及临床研究
目的 了解丙型肝炎患者血清中肝特异性自身免疫性抗体的检出率,探讨自身免疫在丙型肝炎(HCV)感染中的意义.方法 采用间接免疫荧光法,对220例丙型肝炎病毒感染者血清进行肝特异性自身抗体的检测;应用聚合酶链反应定量检测血清HCV-RNA含量,HCV抗体的检测用ELISA法;回顾性分析HCV-RNA病毒、AST、ALT、ALP和r-GT与自身抗体检出的关系.结果 220例丙型肝炎患者总自身抗体检出率为32.73%;HCV-IgG单阳性(HCV-IgG(+)HCV-RNA(-))的检出率为29.57%;HCV-IgG(+)HCV-RNA(+)自身抗体检出率为40.59%,HCV-IgG(+)HCV-RNA(-)与HCV-IgG(+)HCV-RNA(+)组比较差异有统计学意义(P＜0.01).各组与正常对照比较差异均有统计学意义(P＜0.01);自身抗体以低滴度为主,主要为抗核抗体.自身阳性的检出与性别无关(P＞0.05)与年龄关系密切(P＜0.01).自身抗体阳性丙型肝炎患者的血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、谷氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)及γ-球蛋白均高于自身抗体阴性患者,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 HCV在感染过程中可诱导自身免疫反应,使感染者体内产生多种自身抗体,自身抗体检出率与年龄关系密切且与病毒的复制有关.自身抗体以低滴度为主,主要为抗核抗体.自身抗体可能是HCV感染后肝组织损伤的重要因素,应引起重视.
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小鼠 Sca-1阳性心脏干细胞的分离提取和表型鉴定
【目的】探索可靠的小鼠心脏干细胞（ cardiac stem cells ，CSCs）分离方法，并对体外培养的 CSCs进行表型鉴定。【方法】选用 SPF 级3～4周龄 ICR 小鼠，无菌条件下处理心脏组织，胶原酶 A 消化，40μm 筛网过滤，制备单细胞悬液，利用免疫磁珠分选法结合抗干细胞抗原‐1（stem cell antigen‐1，Sca‐1）的磁珠抗体来分离 Sca‐1阳性干细胞，并进一步行免疫荧光、流式细胞及基因表达等鉴定。【结果】利用磁珠分选法结合特异的抗 Sca‐1的磁珠抗体，成功地从小鼠心脏组织中分离出 Sca‐1阳性细胞群。这些细胞具有小、圆、亮等特征，能在体外培养扩增，传代后仍绝大部分表达 Sca‐1抗原，但基本不表达内皮系或造血细胞系的特异抗原 c‐kit 、Flk‐1、CD31、CD34、CD45等。这些 Sca‐1阳性细胞表达多能干细胞特征的 Nanog 、TERT 基因，心脏胚层特异的 ISL‐1、TBX5基因及心肌特异性转录因子 GATA4、Nkx2．5、MEF2C ，但不表达成熟心肌的标志基因α‐M HC 。【结论】利用磁珠分选法结合抗特异干细胞表面标志物 Sca‐1的磁珠抗体能在短期内获得高纯度的Sca‐1阳性 CSCs ；小鼠 Sca‐1阳性 CSCs 能在体外培养增殖，有助于 CSCs 相关的组织工程或分子机制的实验研究。
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0～18岁健康人群的血清N末端脑钠肽前体参考值范围研究
【目的】建立0～18岁健康人群血清N末端脑钠肽前体（N terminal pro‐brain natriuretic peptide ，NT‐proBNP）参考值范围。【方法】用免疫荧光法检测1225例0～18岁健康人群的血清NT‐proBNP浓度。【结果】1225例儿童按新生儿期（0～30 d ）、婴儿期（1个月至1岁）、幼儿期（1～4岁）、学龄前期（4～7岁）、学龄初期（7～10岁）、学龄中期（10～13岁）、青春期（13～18岁）年龄分组检测血清 NT‐proBNP水平，结果依次为：中位数1360．0 pg／mL ，参考范围（250．0～3987．0） pg／mL ；中位数106．0 pg／mL ，参考范围（20．0～532．0） pg／mL ；中位数80．0 pg／mL ，参考范围（20．0～324．0） pg／mL ；中位数58．0 pg／mL ，参考范围（20．0～374．0） pg／mL ；中位数38．0 pg／mL ，参考范围（20．0～163．0） pg／mL ；中位数29．0 pg／mL ，参考范围（20．0～296．0） pg／mL ；中位数20．0 pg／mL ，参考范围（20．0～145．0） pg／mL。0～18岁健康人群各年龄组NT‐proBNP水平与年龄的增长呈负相关（R＝－0．230，P＜0．05）。各年龄段男女性别间的NT‐proBNP无显著性差异（ P＞0．05）。【结论】0～18岁健康人群血清NT‐proBNP水平随年龄增加有降低趋势；0～18岁不同年龄段健康人群血清NT‐proBNP参考值范围与成人不同，不能随意套用。
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电化学发光免疫法和时间分辨荧光免疫法检测血清TSH的比较
[目的]比较电化学发光免疫法和时间分辨荧光免疫法两者在检测血清TSH上的优势.[方法]利用两法分别检测血清促甲状腺激素(TSH)并进行精密度、准确度、病人结果可报告范围,分析灵敏度、特异性、回收率等几方面的比较.[结果]两法检测血清TSH的敏感度分别为0.05 mIu/L和0.100mIu/L,病人可报告范围分别为0.05～100.00mIu/L和0.10～80.00mIu/L,电化学发光免疫法精密度和准确度优于时间分辨荧光免疫法.[结论]电化学发光免疫法检测血清TSH在精密度、敏感度、稳定性,病人可报告范围等方面更优于时间分辨荧光免疫法.
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TR-FIA法对低浓度HBsAg样本检测的临床价值
乙型肝炎是一种常见病、多发病;乙肝病毒(HBV)感染呈全球性分布,世界人口的5%约为慢性乙型肝炎表面抗原(HBsAg)携带者,我国是高流行区之一.
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荧光定量PCR评价铜绿假单胞菌感染的实验研究
目的 探讨FQ-PCR定量检测铜绿假单胞菌oprⅠ基因的方法在快速诊断铜绿假单胞菌败血症,及快速判定抗生素体内疗效中的作用.方法 (1)制备不同浓度的标准菌株并行药敏实验,找出敏感药物(丁胺卡那霉素)及非敏感药(苯唑西林钠).(2)SD大鼠120只随机分为5组,分别取不同浓度的菌液尾静脉注入,于实验开始0 h、12 h、24 h、48 h各组分别麻醉6只大鼠,采血作血培养、FQ-PCR.(3)SD大鼠72只随机分为治疗组、处理组和对照组,均给予1×109 CFU/ml尾静脉注入.随后治疗组立即给予敏感抗生素;处理组立即给予非敏感抗生素;对照组同时给予等量生理盐水,均于尾静脉注入.各组于首次注射后0 h、12 h、24 h、48 h分别麻醉6只大鼠,采血作血培养、FQ-PCR.结果 (1)1×109 CFU/ml、1 ×108 CFU/ml组各时间段血培养均为阳性,FQ-PCR检测,均为阳性.(2)1×107 CFU/ml、1×106 CFU/ml组0 h、12 h血培养均为阳性,1×107 CFU/ml组24 h血培养为阳性,48 h为阴性,而1×106 CFU/ml组24 h、48 h血培养均为阴性.FQ-PCR检测1×107 CFU/ml组0 h、12 h、24 h为阳性,48 h为阴性.1×106 CFU/ml组0 h、1-2 h、为阳性24 h、48 h为阴性.(3)1×105 CFU/ml组各时间段血培养均为阴性,FQ-PCR检测均为阴性.(4)处理后对照组、处理组各时间段血培养均为阳性,而处理后治疗组各时间段血培养均为阴性.FQ-PCR检测三组各时段均为阳性.结论 (1)FQ-PCR诊断铜绿假单胞菌败血症与传统细菌培养比较其特异性吻合率达100%,虽灵敏度并未增加,但诊断时间明显缩短.(2)有效抗生素治疗后,运用FQ-PCR诊断灵敏度明显高于细菌培养.(3)40用FQ-PCR检测铜绿假单胞菌oprⅠ基因的拷贝数的变化可能有助于扰生素体内敏感性的判断.
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生物薄片技术在病毒性脑炎病原体特异性抗体检测的初步应用
目的 探讨生物薄片技术免疫荧光法对小儿病毒性脑炎脑脊液病原体特异性抗体检测的临床应用价值.方法 对56例病毒性脑炎患者应用生物薄片技术同时检测脑脊液中20种嗜神经病原体的特异性抗体,随机分为2组:A组检测12例稀释10倍后的脑脊液中的病原体特异性抗体IgG和IgM.B组检测16 例不稀释脑脊液中病原体特异性IgG和IgM.结果 A组中所有检验标本检测结果均为阴性,B组16例病原体特异性抗体IgG检测有13阳性,其中一种病原体特异性抗体阳性8例,二种病原体特异性抗体阳性3例,三种以上病原体特异性抗体阳性2例.病原体特异性IgM抗体,13例为阴性,仅3例阳性.结论 间接免疫荧光法检测脑脊液中病原体特异性抗体,有重要的临床应用价值;该检测需直接应用未稀释的脑脊液;脑脊液中病原体特异性抗体 IgM阳性率低,而IgG阳性率较高;应用该检测可诊断多种病原体混合感染.
关键词： 脑炎 病毒性/诊断/免疫学 荧光免疫测定 自身抗体/分析 -
Ⅳ型胶原在贲门癌自体荧光诊断中的实验研究
目的比较胃底贲门正常组织和癌组织中Ⅲ、Ⅳ型胶原蛋白分布差异,分析胃底贲门组织癌变后Ⅲ、Ⅳ型胶原蛋白分布的改变对组织的自体荧光产生的影响.方法采用免疫组化技术,半定量计分分析Ⅲ、Ⅳ型胶原在16例贲门癌病人正常和癌组织中的分布差异.结果正常组织的基底膜呈现很强的Ⅳ型胶原抗体阳性反应,在基底膜形成较粗的环形染色带;Ⅲ型胶原抗体阳性反应在细胞外间质呈连续的细丝纤维样.癌组织Ⅳ型胶原抗体反应在癌巢周边为阴性,或仅在残存的基底膜有片断的阳性反应;而Ⅲ型胶原在癌间质中的抗体阳性反应较正常组织变化不明显,或还稍有增强;Ⅲ型和Ⅳ型在正常组织和癌组织中的分布差异有统计学意义(P＜0.001).结论贲门癌组织中细胞外基质内Ⅳ型胶原比正常组织显著减少,而Ⅲ型胶原减少不明显;Ⅳ型胶原可能是胃底贲门黏膜细胞外基质自体荧光物质的主要来源.细胞外基质中Ⅳ型胶原的降解可能是癌组织自体荧光减弱的主要原因之一.
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硬膜替代材料Dura-L移植后的形态学与免疫原性研究
目的 研究新型硬膜替代材料Dura-L移植后的形态学与免疫原性.方法 选用40只成年雄性家兔,随机等分成5组:A:单侧自体移植无创组,B:单侧自体移植创伤组,C:单侧Dura-L移植加对侧自体移植无创组,D:单侧Dura-L移植加对侧自体移植创伤组,E:单侧阳性对照膜移植无创组.应用显微外科技术在无菌条件下施行硬膜替代手术,将Dura-L移植于C、D组兔脑表面.分别于2周、1个月、3个月应用扫描电镜、免疫荧光、病理学切片检测进行评价.结果 2周末、1个月末、3个月末C组、D组与E组间在表面光滑程度、荧光强度、炎性细胞浸润三方面之间的差异具有统计学意义,而与A、B两组间的差异不具有统计学意义.结论 Dura-L移植后形态学与家兔硬膜类似,免疫原性低,是一种比较适合的硬膜替代材料.
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甲醛固定石蜡包埋肾组织做免疫荧光染色在病理诊断中的应用
目的探讨甲醛固定、石蜡包埋的肾穿刺组织做免疫荧光染色的可行性.方法选择10例膜性肾病、25例IgA肾病及10例狼疮肾炎患者的肾穿刺组织.对石蜡切片进行脱腊、修复抗原及直接免疫荧光染色,并将染色结果与冰冻切片染色结果进行比较.结果在本实验条件下,二甲苯浸泡30 min、胃蛋白酶消化10 min为适脱蜡及抗原修复条件,抗体稀释至特异荧光强度足够及非特异荧光背底弱为当.应用上述条件对石蜡切片进行直接免疫荧光染色,其结果与冰冻切片染色的诊断符合率达100%,而石蜡切片具有组织结构保存好、免疫沉积物清晰、易于判断结果及免疫荧光淬灭时间长等优点.结论石蜡切片免疫荧光染色可作为冰冻切片免疫荧光染色的补充手段,它无需低温保存即能转运肾组织至肾脏病理诊断设备及水平较好的医院做免疫荧光检查,于国内推广具有现实意义.
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Rac1在人神经胶质瘤组织中的表达及其与病理分级的相关性研究
目的 观察Rac1 mRNA及蛋白在神经胶质瘤组织中的表达情况,探讨Rac1与病理分级的相关性.方法 应用免疫荧光组织化学、RT-PCR和Western blotting方法检测45例神经胶质瘤组织和10例正常脑组织标本中Rac1 mRNA及蛋白水平.结果 3种检测结果均表明,Rac1在正常脑组织中无表达,45例脑胶质瘤中多42例有Rac1表达,表达率与病理分级呈正相关,即脑胶质瘤病理级别越高,Rac1阳性表达率越高.结论 Rac1在脑胶质瘤中的高表达与神经胶质瘤的侵袭、转移密切相关,可做为一个反映脑胶质瘤增殖能力和恶性程度的指标.
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丙型肝炎患者自身抗体检测的临床意义
目的探讨丙型肝炎患者血清中自身免疫性抗体的检出率与疾病的相关机理.方法对89 例丙型肝炎患者血清和20例体检健康者血清进行抗核抗体(ANA)、ENA抗体、抗线粒体抗体(AMA)、抗平滑肌抗体(SMA)、抗肝膜抗体(LMA)、类风湿因子(RF) 等自身抗体检测.结果①丙型肝炎伴ANA、ENA抗体等6种自身抗体阳性率高于正常对照组(P<0.05),其中RF 的阳性检出率高(30.34%).②急性丙肝组患者阳性检出率为43.75%;慢性丙肝组阳性检出率36.99%,两组比较差异无显著性(χ2=0.25,P>0.05).③单纯抗-HCV阳性的58例中自身抗体阳性者25例,检出率43.10%; HCV RNA 阳性的31例中9例抗体阳性,检出率29.03%.结论 HCV感染过程中机体普遍存在自身免疫现象, 应引起重视.
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可溶性细胞间黏附分子-1时间分辨免疫荧光分析的方法学评估
目的 评估所建立的可溶性细胞间黏附分子-1生物素-亲和素系统(BAS)时间分辨荧光免疫分析方法(sICAM-1 BSA-TRFIA)的技术指标及应用价值.方法 建立sICAM-1 BsA-TR-FIA,分析其检测曲线的性质参数,研究该方法的灵敏度、精密度和回收率、特异性,稳定性、平行性,以及与酶联免疫吸附试验分析法(ELlSA)间的相关性.结果 此法特异性较高,同批试剂连续6个月应用分析结果稳定,灵敏度为1.32 μg/L,批内和批间CV分别为4.24%和6.83%,平均回收率为99.87%,线性范围为(2.5～1 933)μg/L,与ELISA所测结果比较高度相关(r=0.939),与TNF-а、IL-8、IL-1、IL-2和IL-6等免疫分子无交叉反应.结论 sICAM一1 BSA-TRFIA是一种特异性强、稳定性好、灵敏度高、可测范围较广的检测方法,可以方便地应用于临床,为相关疾病的诊断和监测提供一项良好的实验诊断指标.
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泰莱-Ⅱ型时间分辨荧光免疫分析仪的应用评价
目的 对广州丰华公司泰莱(TALENT-Ⅱ型)时间分辨荧光免疫分析仪定量实验方法及其主要性能指标进行评价.方法 通过测定人血清中的甲胎蛋白(hAFP)、人绒毛膜促性腺激素(HCG)含量,应用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)文件及《临床实验室质量管理文件汇编》文件对TALENT-Ⅱ分析仪的偏差和不精密度进行评价.结果 该系统与罗氏2010电化学发光检测系统的相关系数r＞0.99;hAFP和HCG高、中、低浓度的绝对偏差均在相应的允许偏差范围内;hAFP和HCG高、中浓度的总不精密度均小于10%.结论 TALENT-Ⅱ型时间分辨荧光免疫分析系统与罗氏2010电化学发光检测系统有较好的相关性,同时具有较好的稳定性.
