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白细胞介素6体外诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞的分化
背景:骨髓间充质干细胞是肝细胞的重要肝外来源,在多种细胞因子和生长因子诱导下可分化为肝细胞,从而参与肝功能的修复和重建.目的:观察白细胞介素6是否可诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞定向分化.方法:采用贴壁法分离培养昆明种雄性小鼠骨髓间充质干细胞,在无血清肝细胞培养液HEPATOZYME-SFM中分别加入2.5,5,10,20 μg/L白细胞介素6诱导其向肝样细胞分化;诱导培养0,7,14,21,28 d时取出细胞爬片,细胞免疫组织化学法检测细胞角蛋白18、甲胎蛋白表达情况,过碘酸-Schiff糖原染色检测细胞功能,ELISA和硝酸还原酶法分别检测培养液中白蛋白和一氧化氮水平.结果与结论:当白细胞介素6质量浓度在2.5~10 μg/L范围内,呈浓度依赖性和时间依赖性增加细胞角蛋白18、糖原表达率及细胞培养液中白蛋白水平;甲胎蛋白表达为先升后降直至21d停止.当白细胞介素6质量浓度增加到20 μg/L时上述诱导作用均不及质量浓度10 μg/L组.只有10 μg/L白细胞介素6组诱导到28 d时细胞培养液中测得微量一氧化氮;提示白细胞介素6可诱导骨髓间充质干细胞向肝系细胞分化,且在10 μg/L作用强,质量浓度再增高时诱导作用反而减弱.
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改良酶消化法分离培养人乳牙牙髓干细胞
背景:乳牙牙髓干细胞具有极强的增殖活力,可以在短期内获得组织工程需要的细胞量.目的:比较传统酶消化法和改良酶消化法获取人乳牙牙髓干细胞的成功率及生物学特性.方法:取无龋滞留乳切牙12颗,随机数字表法均分为两组,分别应用传统酶消化法和改良酶消化法分离获取乳牙牙髓细胞,在不同代次细胞中检测细胞扩增天数、收获量、生长曲线、倍增时间、克隆形成率、细胞表面特异标记物STRO-1、CD146、CD34和CD45的表达.细胞成骨、成脂诱导分化能力及通过检测碱性磷酸酶和牙本质涎蛋白表达水平,判定细胞牙向分化潜能.结果与结论:两组细胞生长曲线,扩增天数、细胞收获量及细胞倍增时间相比,差异有显著性意义(P＜0.05)；牙向分化实验结果显示,改良酶消化法碱性磷酸酶和牙本质涎蛋白较传统酶消化法和对照组而言呈强阳性表达.然而,两组在克隆形成率、细胞表面特异标记物及多项诱导分化等方面差异无显著性意义(P＞0.05).说明改良酶消化法与传统酶消法相比,可在较短时间内完成同源乳牙牙髓干细胞体外扩增培养,可为牙齿再生治疗提供高质量种子细胞,是乳牙牙髓干细胞体外培养的可靠方法.
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牙周膜干细胞成骨分化中细胞因子的作用
背景:牙周膜干细胞是牙周组织中的成体干细胞,具有高度增殖、自我更新能力和多分化潜能.促进牙周膜干细胞向成骨细胞分化有助于牙周疾病的治疗.目的:观察胰岛素样生长因子1和成纤维细胞生长因子2对牙周膜干细胞向成骨细胞分化的影响.方法:采用胶原酶消化人牙周膜组织,获得牙周膜干细胞,经体外鉴定、扩增后,通过倒置显微镜、苏木精-伊红染色、流式细胞仪对牙周膜干细胞进行生物学检测.分别在成骨细胞诱导培养液中加入成骨诱导液(对照组)及胰岛素样生长因子1和成纤维细胞生长因子2持续诱导7,14d后,进行碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性检测,以及茜素红染色,并用实时定量PCR法检测向成骨细胞分化的标志性基因的表达情况.结果与结论:胰岛素样生长因子1刺激组的碱性磷酸酶活性以及钙化结节明显高于对照组,Runx2、Alp、col-1的mRNA呈高表达；成纤维细胞生长因子2刺激组的碱性磷酸酶活性以及钙化结节也高于对照组,Runx2、Alp、col-1的mRNA表达量也高于对照组.提示胰岛素样生长因子1和成纤维细胞生长因子2在不同程度上促进体外培养的牙周膜干细胞向成骨细胞方向分化.
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衰老可导致间充质干细胞氧化损伤修复能力降低
背景:DNA损伤及损伤后的应答异常会导致基因组不稳定,基因组不稳定是肿瘤形成的重要因素之一.在细胞衰老过程中,衰老细胞基因组稳定性下降,对于端粒、端粒酶的研究以及对于原癌基因和抑癌基因的研究,表明细胞衰老和肿瘤有密切的联系.目的:以氧化损伤为模型,探索DNA损伤应答异常是衰老细胞基因组不稳定性的直接原因.方法:培养骨髓间充质干细胞,流式细胞术进行检测鉴定.衰老相关β-半乳糖苷酶检测细胞衰老情况,BrdU掺入实验检测细胞增殖情况.建立体外培养人间充质干细胞衰老模型,通过CCK-8法检测细胞存活情况,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧,单细胞凝胶电泳观察细胞DNA损伤情况.结果与结论:人间充质干细胞经长期培养发生衰老,培养40代以后,衰老相关β-半乳糖苷酶染色阳性细胞明显增多,BrdU掺入能力显著下降,提示间充质干细胞长期培养后发生衰老.生存曲线结果显示H2O2作用下,年轻间充质干细胞存活率明显高于衰老间充质干细胞；活性氧及单细胞凝胶电泳结果显示,H2O2处理后衰老间充质干细胞DNA损伤更严重,修复时间更长,说明衰老间充质干细胞比年轻间充质干细胞对H2O2损伤更为敏感.
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神经干细胞培养及其影响因素
背景:神经干细胞移植治疗是中枢神经系统损伤性、难治性疾病研究的热点.如何有效提高神经干细胞存活率、克隆形成率将是其应用的重要基础和前提.目的:探讨影响神经干细胞培养质量的可能因素,为神经干细胞的基础和临床应用研究提供参考.方法:①神经干细胞分离和培养:分离出生24h内SD大鼠的大脑,剪碎离心后以1×108 L-1的浓度接种,经含体积分数为10％胎牛血清的DMEM/F12培养基预培养4h后改用无血清条件培养基(DMEM/F12,碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、B27)培养,2d或3d换液1次,6d时传代.②神经干细胞鉴定:倒置显微镜下观察细胞形态及生物学特性;免疫组化检测第3代细胞神经巢蛋白表达和诱导分化后神经元特异性烯醇化酶和神经胶质酸性蛋白的表达.结果与结论:出生24 h的新生大鼠可获得足量的神经干细胞；血清预培养可提高神经干细胞的增殖和存活率；免疫组化结合血清诱导分化可对培养的神经干细胞进行定性鉴定.取材时间、细胞接种密度、传代时间、细胞因子、血清等多种因素都将影响神经干细胞的培养质量.
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低氧环境下白细胞介素1β诱导中脑源性神经干细胞的分化
背景:在体外某些外来信号的调控和诱导下,神经干细胞可定向诱导分化成与受体部位细胞类型与构成相似的细胞群体,使其更容易掺入靶组织,并可满足移植所需的细胞数量,提高移植细胞的存活率.目的:验证白细胞介素1β在低氧环境下体外诱导中脑源性神经干细胞的分化.方法:分离孕12 d胎鼠中脑组织,培养神经干细胞、传代并鉴定.将鉴定后传代培养的中脑源性神经干细胞按分组接种于含体积分数10％胎牛血清的DMEM/F12培养基和含体积分数10％胎牛血清的DMEM/F12+白细胞介素1β培养基;分别置于常氧(体积分数21％O2)和低氧(体积分数3％O2)环境下诱导分化,诱导分化9-11 d后行小鼠抗大鼠酪氨酸羟化酶免疫细胞化学染色,检测酪氨酸羟化酶及神经元特异性烯醇化酶阳性细胞率.结果与结论:与常氧组比较,低氧组尤其是低氧+白细胞介素1β组中酪氨酸羟化酶阳性神经元的突起数目更多,且长度更为延长.孕12d胚鼠腹侧中脑组织可以在体外培养传代、并能诱导分化成多巴胺能神经元；在低氧环境或低氧+白细胞介素1β诱导下,分化率均高于常氧组,其表型更成熟.说明在低氧或低氧和白细胞介素1β诱导下,可明显促进中脑源性干细胞分化为形态及功能成熟的多巴胺能神经元.
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人羊膜间充质干细胞体外大量扩增的方法
背景：一个胎盘羊膜的面积约600 cm2，羊膜来源间充质干细胞即取材于胎盘上的羊膜。
目的：建立一种简单的体外分离培养人羊膜来源间充质干细胞的方法，并分析其生物学特性。
方法：采用胰酶和直接贴壁相结合的方法分离获取人羊膜来源间充质干细胞并进行体外培养，观察细胞形态，分析传代第5代细胞生长曲线，检测第5代细胞表面标志表达和检测细胞周期。取传代第4代细胞行体外成骨细胞诱导和成脂诱导，冻存第4代细胞6个月后复苏，计数复苏后细胞存活率并绘制复苏细胞生长曲线。
结果与结论：原代接种后第9天有少许细胞爬出，15 d左右细胞达80%-90%融合，细胞以梭形为主。细胞传代后，细胞形态均一，螺旋状排列。传代细胞潜伏期48 h，对数增殖期4 d左右，对数增殖期后进入平台期。间充质干细胞表面CD34、CD14、CD19、CD45、HLA-DR 呈阴性表达，CD73、CD105、CD90呈阳性表达。茜素红染色及油红O染色阳性，证实具有向脂肪细胞、成骨细胞分化的能力。流式细胞术细胞周期检测，S期占28%。冻存复苏后细胞存活率达90%以上，且与未冻存传代细胞具有相同的生长特性。结果证实实验成功地建立了一种简化的人羊膜来源间充质干细胞大量扩增的方法。 -
Neurogenin2基因调控许旺细胞转分化为神经元
背景：Neurogenin2(Ngn2)基因调控星形胶质细胞分化为神经元已被实验证实，这提示许旺细胞也可能通过基因调控分化为神经元。
目的：研究Neurogenin2基因调控大鼠许旺细胞向神经元分化的可行性。
方法：体外培养、纯化及鉴定大鼠许旺细胞，然后用含绿色荧光蛋白基因的慢病毒载体系统将Neurogenin2基因转染导入许旺细胞中，后用含碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子和脑源性细胞生长因子的无血清DMEM诱导培养许旺细胞2周。显微镜观察细胞形态，免疫细胞化学检测髓磷脂碱性蛋白及神经元特异性烯醇化酶。
结果与结论：许旺细胞转染导入 Neurogenin2基因并诱导分化后，免疫荧光检测发现12.56%的细胞表达神经元标志性蛋白神经元特异性烯醇化酶，而对照组均未发现表达神经元标志性蛋白神经元特异性烯醇化酶。Neurogenin2基因植入可使大鼠许旺细胞表达神经元标志性蛋白神经元特异性烯醇化酶，提示该基因可调控许旺细胞转分化为神经元。关键词： 干细胞 干细胞培养与分化 许旺细胞 neurogenin2 基因 分化 神经元 神经元特异性烯醇化酶 干细胞图片文章 -
小鼠间充质干细胞三系分化中SOX9与Ⅱ型胶原mRNA的定量
背景：研究表明，软骨中的主要成分Ⅱ型胶原的基因-Col2a1在软骨细胞中的表达与SOX9的浓度呈剂量依赖正相关关系。
目的：通过成骨、成软骨、成脂肪诱导干细胞分化，分析3种分化过程及不同时期的SOX9与Ⅱ型胶原 mRNA含量的变化，探讨SOX9在不同时空分布的表达规律及与Ⅱ型胶原的相关关系。
方法：取4周龄昆明小鼠骨髓间充质细胞，体外培养得到间充质干细胞并传达至第3代，对间充质干细胞进行流式细胞仪鉴定细胞表型，共分3组每组设3个时间段，通过成骨、成软骨、成脂肪3种诱导培养液对3组细胞进行诱导，另设不进行诱导的细胞作为对照组。分别在诱导3，7，14 d后收集提取细胞的总RNA，通过RT-PCR进行SOX9与Ⅱ型胶原的mRNA定量检测，同时对诱导后的细胞进行染色、免疫荧光染色，观察其分化状态及相关统计分析。
结果与结论：第3代骨髓间充质干细胞生长良好，流式细胞仪鉴定细胞表型证实为干细胞，对诱导后细胞进行染色、免疫荧光染色结果证实细胞分化为骨、软骨、脂肪细胞。经RT-PCR检测，在3组诱导分化细胞中SOX9 mRNA 含量由高到低分别是成软骨、成骨、成脂肪，Ⅱ型胶原 mRNA 含量由高到低分别是成软骨、成脂肪、成骨。在成软骨分化中SOX9在3，7 d表达不断升高，14 d呈下降趋势。Ⅱ型胶原在3，7，14 d均逐渐升高。在成骨分化中SOX9 mRNA含量随着时间推移而增加，而Ⅱ型胶原则随着时间推移而不断降低。在成脂肪分化中SOX9 mRNA表达与对照组比较差异无显著性意义(P >0.05)；而Ⅱ型胶原的表达没有规律可循，时间点的延伸及检测未观察到。结果提示，SOX9在软骨分化中作用优于成骨、成脂肪组，且软骨分化中SOX9与Ⅱ型胶原存在相关性，可能在软骨分化的早期Ⅱ型胶原随着SOX9的变化而变化；且软骨分化和成骨分化过程中SOX9可能起到了一个互相协调促进平衡的关键作用。 -
下颌下腺主导管结扎可激活损伤组织中的干/祖细胞
背景：成体干细胞的伦理学问题较少，而且某些操作技术比较成熟，利用成体干细胞进行组织工程化涎腺的构建具有十分诱人的吸引力和极其重要的应用前景。目的：建立下颌下腺主导管结扎的涎腺组织损伤大鼠模型，探讨涎腺组织损伤模型中成体干/祖细胞存在的可能性及可能位置。方法：SD大鼠统一行右侧下颌下腺主导管结扎，1周后处死大鼠取出两侧腺体，通过苏木精-伊红染色、PAS糖原染色及细胞角蛋白19、Bcl-2、Ki-67等指标的免疫组织化学测定，对正常涎腺组织与建立的损伤模型组织进行比较。结果与结论：同一只大鼠，结扎侧与对照侧体积、质量有明显的差异。对照侧下颌下腺组织呈卵圆形，色泽红润，表面光滑，有完整包膜，质地柔软；结扎后腺体萎缩，组织形态欠规整，色泽暗红，包膜充血，质地变韧，周围组织血管代偿性扩张。主导管结扎的组织损伤模型可导致 PAS 阳性腺细胞的消失和细胞角蛋白19阳性的小导管上皮细胞增殖，并有在未结扎的腺体中很少见到的小丛层粘连蛋白阳性细胞出现在导管周围，而抑制细胞凋亡的Bcl-2和提示增殖活跃度的Ki-67的表达均有所增强。可见下颌下腺组织中可能存在着定位于涎腺周围导管区的下颌下腺干/祖细胞；下颌下腺主导管结扎导致的组织损伤模型是一种能有效激活下颌下腺组织中干/祖细胞的方法。
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角质细胞无血清培养基促进大鼠毛囊干细胞的增殖
背景：以往研究培养毛囊干细胞多使用DMEM/F12+体积分数10%胎牛血清培养基，而进年来开发出的角质细胞无血清培养基也可应用于毛囊干细胞的培养。
目的：观察3种不同培养基对大鼠毛囊干细胞增殖情况及干细胞纯度的影响。
方法：取大鼠触须部皮肤组织，体式显微镜下分离出毛囊组织，中性蛋白酶Ⅱ与胰蛋白酶和乙二胺四乙酸混合液“两步酶法”消化。所得细胞悬液按细胞数平均分为3份，分别使用角质细胞无血清培养基、DMEM/F12+体积分数10%胎牛血清及角质细胞无血清培养基+体积分数10%胎牛血清共3种培养基培养，Ⅳ型胶原差速贴壁法筛选毛囊干细胞，进行传代培养。
结果与结论：培养毛囊干细胞传至第3代，锥虫蓝染色计数法检测结果显示，此3组间细胞活率差异无显著性意义(P>0.05)。CCK8比色法检测细胞生长曲线显示，培养前2 d，此3组细胞生长均较缓慢；培养4 d，细胞生长进入对数生长期，3种培养基培养的细胞增殖活性：角质细胞无血清培养基+10%胎牛血清组>DMEM/F12+10%胎牛血清>角质细胞无血清培养基(P<0.05)。流式细胞仪检测显示，角质细胞无血清培养基组CD34的表达高于角质细胞无血清培养基+10%胎牛血清组(P<0.05)。DMEM/F12+10%胎牛血清组中CD34、β1-整合素(CD29)及CK15标记物的表达低于其他2组(P<0.05)。结果表明，角质细胞无血清培养基较DMEM/F12+体积分数10%胎牛血清能培养出纯度更高的毛囊干细胞，并且在此培养基培养的基础上加入血清，能够促进毛囊干细胞的增殖。 -
SiRNA沉默Sox-9基因调控骨骺干细胞的增殖及凋亡
背景：目前有研究表明，很多细胞生长因子可促进骨骺干细胞的增殖和分化，并且这种调控作用与Sox-9有密切的关系。
目的：观察小分子干扰RNA沉默Sox-9基因及对大鼠骨骺干细胞增殖、凋亡的影响。
方法：采用酶消化法分离、免疫磁珠法纯化及免疫组织化学SABC法鉴定得到大鼠骨骺干细胞，首先进行预转染Sox-9 siRNA，判断转染效率，实验分2组：对照组常规培养，实验组采用Sox-9 siRNA转染。
结果与结论：实验成功分离、纯化了原代骨骺干细胞，生长状态稳定、贴壁牢固，光学显微镜下细胞多呈梭形。免疫组织化学染色和免疫荧光鉴定显示，Sox-9 siRNA转染的大鼠骨骺干细胞可稳定表达相对特异性标志物成纤维细胞生长因子受体3。RT-PCR，MTT，流式细胞仪检测检结果提示，与对照组相比，实验组Sox-9 mRNA表达及细胞存活率降低(P<0.05)，凋亡率增加(P<0.05)。结果证实，siRNA沉默Sox-9基因可调控大鼠骨骺干细胞的增殖和凋亡。 -
胶质细胞源性神经营养因子基因修饰后间充质干细胞的生长与分化
背景：近年来，研究表明外源性神经营养因子或化学诱导剂可诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化，但外源性诱导剂诱导作用短暂且化学性物质不可避免的对细胞活力造成负面影响，一定程度上限制了骨髓间充质干细胞的基础研究与临床应用空间。
目的：以载胶质细胞源性神经营养因子和绿色荧光蛋白基因重组腺病毒(Ad-rGDNF-GFP)转染大鼠骨髓间充质干细胞，观察目的基因在靶细胞内的表达、对细胞的营养作用及对骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化的影响。
方法：转染组中以Ad-rGDNF-GFP转染骨髓间充质干细胞，感染复数分别为10，50，80，100，150，200；对照组加入等量的培养液作为对照。转染后12 h，倒置荧光显微镜观察2组中绿色荧光蛋白的表达情况；转染后72 h，流式细胞仪测定转染组中转染效率；MTT法测定2组中细胞活力；转染后5，10 d，PCR检测转染组中胶质细胞源性神经营养因子mRNA的表达；转染后5 d免疫荧光鉴定2组中神经元烯醇化酶的表达情况，转染后10 d鉴定微管相关蛋白2的表达。
结果与结论：转染后12 h，细胞中可观察到绿色荧光蛋白的表达，随时间延长荧光强度逐渐加强。以感染复数=100时绿色荧光蛋白的表达强度、稳定性较好，转染后3 d，转染效率近90%；转染后转染组细胞活力增加；转染5 d后，骨髓间充质干细胞表达神经元烯醇化酶，细胞伸出神经样细胞突起；转染10 d后，胶质细胞源性神经营养因子mRNA表达显著增强，骨髓间充质干细胞表达神微管相关蛋白2，细胞突触样结构明显且相互连接成网，呈现典型神经样细胞形态。说明以Ad-rGDNF-GFP转染骨髓间充质干细胞，感染复数=100时，可获得较高的转染效率，胶质细胞源性神经营养因子表达后明显提高了骨髓间充质干细胞活力，并诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞定向分化。 -
Accutase酶在精原干细胞原代分离中的应用
背景：有研究报道胰酶消化在一定程度上会破坏精原干细胞表面抗原并影响细胞活性，对后续的细胞分选及下游实验有一定影响。Accutae 酶具有蛋白酶和胶原酶的双重活性，在消化结束时无需终止和清洗，有保护细胞表面抗原的特殊作用，因而被应用于多种干细胞的培养及消化传代中。
目的：比较Accutase酶和胰酶在原代消化分离睾丸组织获取精原干细胞中的作用。
方法：新生5-7 d昆明雄鼠45只，取双侧睾丸胶原酶初步消化，混悬液定容后分为Accutase酶组、胰酶组、混合酶组(透明质酸酶+胰酶组)，不同组别小鼠睾丸组织分别于酶消化1，3，5 min后显微镜下观察并拍照，比较各组不同时间点的消化状态及形成单细胞所需的时间；获取单细胞悬液后分别计算单位体积内所得细胞总数及死亡率；通过差速贴壁方法去除间质细胞及支持细胞，经包被有干细胞标志分子 CD90.2的免疫磁珠进行分选，将所得 CD90+及 CD90-细胞用精原干细胞表面标志分子--胶质细胞源性神经营养因子受体α1标记，流式细胞仪检测不同组别CD90+及 CD90-细胞群中胶质细胞源性神经营养因子受体α1精原干细胞的阳性率。
结果与结论：不同类别的消化酶对小鼠睾丸的消化作用有明显差异，其中 Accutase 酶能更快获取单细胞悬液，其细胞团及破膜细胞明显少于胰酶组和混合酶组，其所得细胞总数高于其余2组，而细胞死亡率则低于其余2组。差速贴壁后细胞免疫磁珠分选结果显示Accutase酶组CD90+精原干细胞得率高，流式分选结果显示胶质细胞源性神经营养因子受体α1+/CD90+细胞为72.24%，高于胰酶组及混合酶组(51.16%，71.27%)；而胶质细胞源性神经营养因子受体α1+/CD90-细胞比率(15.03%)则低于胰酶组及混合酶组(18.8%，24.23%)。结果表明Accutase酶在分离和获取精原干细胞实验中效果优于胰酶。 -
诱导心脏肌成纤维细胞向心肌样细胞转分化的miRNA
背景：微小 RNA(miRNA)是一类非编码小分子 RNA，miRNA参与调控基因表达，在促进前体细胞增殖与分化中发挥了重要的作用。miRNA是否可促进前体细胞向心肌细胞的分化则鲜见报道。
目的：验证转入特定miRNA(miRNA-1、miRNA-499)诱导新生小鼠心脏肌成纤维细胞转分化为心肌样细胞的可行性。
方法：体外培养新生小鼠心脏成纤维细胞，常氧培养传代至P2；37℃低氧(体积分数3%O2)培养48 h；免疫荧光染色检测心脏成纤维细胞特异性标记物波形蛋白的表达，免疫荧光染色、流式细胞技术检测心脏成纤维细胞向心脏肌成纤维细胞表型转化的标记物α-平滑肌激动蛋白的表达。实验分为4组：miRNA-1转染组、miRNA-499转染组、miRNA-1/miRNA-499共转染组及空白对照组，采用 miRNA 芯片检测心脏肌成纤维细胞与心肌细胞中微小RNA的表达差异；real-time qPCR方法验证芯片检测结果。
结果与结论：心脏肌成纤维细胞中过表达 miR-1、miR-499后，心脏发育不同阶段特异性因子发生不同程度的表达变化，与空白对照组相比，其余3组 GATA4、Tbx5、Mef-2c、α-MHC表达明显增高，Mesp1、Isl1表达均无显著变化。结果表明，特定miRNAs可诱导心脏肌成纤维细胞表达心肌细胞特异性性标志物，具备诱导心脏肌成纤维细胞向心肌细胞直接转分化的潜力。 -
人胚胎成纤维细胞饲养层的制备
背景：极小胚胎样干细胞是近年来发现的一种具有类似胚胎干细胞生物学特性的非造血干细胞，但对其体外培养扩增的方法报道极少。有研究推测，人胚胎成纤维细胞能为人骨髓极小胚胎样干细胞体外培养扩增提供良好的微环境。
目的：从人胚胎躯干中分离、培养人胚胎成纤维细胞，制备人胚胎成纤维细胞饲养层用于人骨髓极小胚胎样干细胞的培养。
方法：利用胰酶消化法从孕5-9周龄人胚胎躯干中分离培养人胚胎成纤维细胞。制作饲养层，使用不同浓度丝裂霉素C处理后，用于培养分选后的人骨髓极小胚胎样干细胞，以细胞形态、生长曲线作为胚胎成纤维细胞和饲养层的评价指标。
结果与结论：从人胚胎中成功分离培养出人胚胎成纤维细胞，该细胞可传代24代以上，且经过传代及冻存复苏后生物学特性无改变。丝裂酶素C低于12 mg/L时，人胚胎成纤维细胞增殖不能完全抑制；高于14 mg/L，人胚胎成纤维细胞可能死亡。12 mg/L丝裂霉素C作用3 h后能较好地抑制人胚胎成纤维细胞的增殖，并且保持其活力约2周，可以在很长一段时间内用作人骨髓极小胚胎样干细胞的饲养层。 -
经颅磁刺激帕金森病模型小鼠体内神经干细胞的增殖
背景：神经毒素1-甲基-4-苯基-1、2、3、6-四氢吡啶能够诱导类似于在原发性帕金森病所观察到的临床、生化和病理的特征。
目的：观察重复经颅磁刺激对帕金森病模型小鼠侧脑室室管膜下区内源性神经干细胞增殖的影响及对情绪障碍的影响。
方法：选用雄性C57BL/6J小鼠72只，随机分为4组。帕金森病模型组和磁刺激组采用背部皮下注射1-甲基-4-苯基-1、2、3、6-四氢吡啶注射4次制备急性帕金森病模型，末次注射24 h后，对磁刺激组小鼠进行重复经颅磁刺激干预，刺激频率为1 Hz，刺激强度为阈上20%，刺激5个序列，每个序列刺激25次，分别治疗1，3，7 d；假磁刺激组不暴露于磁场下；帕金森病模型组不给予任何处理；盐水对照组皮下注射与帕金森病模型组等量的生理盐水。对重复经颅磁刺激干预前后进行高架十字迷宫实验，以评价其情绪障碍。利用免疫组织化学染色的方法检测室管膜下区巢蛋白阳性细胞数。
结果与结论：①高架十字迷宫试验：各组内及各组间在不同时间点，小鼠的开放臂停留时间比例(OT%)差异无显著性意义，但重复经颅磁刺激干预后的小鼠OT%有较明显的下降。②巢蛋白免疫组织化学染色结果：帕金森病模型组较盐水对照组巢蛋白的阳性细胞数于第3天和第7天时明显增高，较假磁刺激组无统计学意义。②磁刺激组较假磁刺激组及帕金森病模型组巢蛋白的阳性细胞数明显增高。③巢蛋白的阳性细胞数随时间的延长而增加，内源性神经干细胞沿一定的路径逐渐往外迁移，第3天时有一部分迁移到胼胝体，到第7天时有一部分能迁移到大脑皮质。说明重复经颅磁刺激能促进内源性神经干细胞增殖，内源性神经干细胞增殖具有时间依赖性。 -
K562细胞株侧群细胞中部分白细胞分化抗原的表达
背景：白血病侧群细胞表型的研究对于理解肿瘤细胞的异质性和起源、分子标记和靶向治疗等都有积极意义。
目的：鉴定人慢性粒细胞白血病细胞株 K562中是否存在侧群细胞，并观察侧群细胞亚群与非侧群细胞亚群中部分白细胞分化抗原的表达差异。
方法：采用流式细胞术检测K562细胞株中是否存在侧群细胞；并进一步分析K562侧群细胞和非侧群细胞两亚群间CD34+、CD34+CD38-、CD34+CD38+、HLA-DR+细胞的表达情况。
结果与结论：经Hoechst33342染色，流式细胞仪分析结果显示在K562中存在侧群细胞，这部分细胞比例少，为(2.7±0.5)%；统计学分析侧群细胞和非侧群细胞亚群中 CD34+、CD34+CD38-细胞表达率差异有显著性意义，而CD34+CD38+细胞表达率和HLA-DR+细胞表达率差异均无显著性意义；侧群细胞和非侧群细胞相比在分化抗原表达上有异质性。 -
人外周血内皮祖细胞的分离、培养及鉴定
背景：内皮祖细胞是成熟内皮细胞的前体细胞，具有新生血管和新生内皮化作用，在许多方面均有广泛应用前景，但其生物学特征及鉴定方法仍存争议。
目的：探索从人外周血分离培养内皮祖细胞的方法并鉴定其生物学特征。
方法：外周采血后应用密度梯度离心法分离成人外周血单核细胞，在内皮细胞全培养基重悬后接种于纤维连接蛋白包被的培养瓶中，体外培养扩增获取人内皮祖细胞并观察其形态变化、生长增殖潜能及细胞表面抗原表达情况，并通过细胞一氧化氮分泌功能测定及体外血管形成实验检测其功能学特征。
结果与结论：体外诱导培养后，六七天形成纺锤样细胞簇，两三周黏附细胞发育形成鹅卵石样外观细胞，逐渐融合呈外生性生长。在相同培养条件下，与人主动脉内皮细胞相比人内皮祖细胞具有高的增殖潜能。人内皮祖细胞表达CD31、CD34、CD144、KDR，表现为典型内皮细胞系表型，此外细胞可摄取ac-LDL并结合UEA-Ⅰ。在功能上内皮祖细胞可分泌一氧化氮并可在Matrigel中形成管腔样结构。提示通过密度梯度离心法分离人外周血单核细胞体外黏附诱导培养可获取人外周血内皮祖细胞；细胞形态、增殖能力、生物表型特征结合细胞功能学的综合性鉴定方法用于内皮祖细胞的鉴定具有一定意义。 -
人外周血与脐血内皮祖细胞生物学特性的比较
背景：内皮祖细胞可从外周血与脐血中获取，是修复各种疾病所致损伤的血管内皮细胞不可或缺的细胞来源。目的：比较人外周血与脐血来源的内皮祖细胞经体外培养后生物学特性的差异。
方法：通过密度梯度离心法和6%羟乙基淀粉结合密度梯度离心法分别分离人外周血与脐血中的单个核细胞，分别设为脐血源组和外周血源组，计数各组单个核细胞数量，按1.0×106/cm2接种于大鼠尾胶包被的培养皿中，用内皮细胞培养基进行诱导，共培养7d。
结果与结论：外周血与脐血体外培养分离出内皮祖细胞具有类似的形态学特征。光学显微镜下观察，随着培养天数的增加，大多数细胞由早期的贴壁圆形转变为梭形。外周血源组内皮祖细胞有细胞集落形成，脐血源组可见梭形细胞自行排列生长为典型的线样结构。锥虫蓝染色及绘制细胞生长曲线后发现，外周血源组单个核细胞及内皮祖细胞数量、内皮祖细胞活率及增殖能力均低于脐血源组(P<0.05)。外周血源组和脐血源组内皮祖细胞在接种后第3天增殖速度达到峰值，在随后的培养中细胞增殖呈衰减态。流式细胞仪及免疫荧光染色检测结果显示，外周血源组和脐血源组内皮祖细胞均可表达具有内皮祖细胞表型的CD133、CD34和血管内皮细胞因子受体2表面标志物，两组既摄取Dil标记乙酰化低密度脂蛋白，也能标记体外内皮祖细胞的标志物荆豆凝集素Ⅰ。结果证实，脐血来源的内皮祖细胞与外周血来源的内皮祖细胞生物学特性相近，脐血来源的内皮祖细胞增殖能力更强。
