胃肠道血管畸形的发病机制及沙利度胺对其治疗作用的机制

目的 探讨胃肠道血管畸形( GIVM)的发病机制及沙利度胺治疗GIVM所致消化道出血的作用机制.方法 收集10例因GIVM导致消化道大出血而行部分肠切除术患者的病变组织、非病变组织以及非GIVM患者的正常肠黏膜组织,分别进行免疫组化染色检测血管生成素2(Ang-2)、Notch1、Dll4的表达.体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)至对数生长期,同步化后分别用4种浓度的沙利度胺(25、50、100、200 mg/L)刺激24 h或48 h,另设溶剂对照组.实时定量PCR法测定沙利度胺刺激24 h后各组Ang-2、Notch1、Dll4 mRNA的表达水平,Western blot法测定沙利度胺作用48 h后各组Ang-2、Notch1、Dll4蛋白的表达水平.结果 免疫组化染色显示GIVM病变肠段血管扩张、扭曲,与GIVM患者的非病变组织及非GIVM患者的正常肠黏膜组织相比,其Ang-2、Notch1、Dll4的表达明显增强,且Ang-2的表达与Notch1、Dll4的表达水平呈正相关(r值均为0.732,P值均为0 016),Dll4与Notch1的表达呈完全正相关(r=1.000,P=0.000).实时定量PCR和Western blot结果提示,沙利度胺能明显抑制Ang-2、Notch1及Dll4的mRNA和蛋白表达,且这种抑制作用呈剂量相关.结论 Ang-2、Notch1、Dll4可能与GIVM的发病机制相关,沙利度胺可抑制其表达,且具有剂量依赖性.这一作用可能是沙利度胺抑制血管生成,从而有效治疗GIVM所致消化道出血的机制之一.

脐带间充质干细胞治疗1型糖尿病小鼠视网膜病变的作用机制探索

目的 研究人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)能否通过影响Notch信号通路及血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)对糖尿病视网膜病变(DR)起治疗作用.方法 选取周龄6～8周、体重20～24 g雌性NOD小鼠80只,适应性喂养1周后按随机数字表法将1型糖尿病发病小鼠分为糖尿病(DM)组、胰岛素(INS)组(给予甘精胰岛素干预)和干细胞(MSC)组(给予hUC-MSCs+甘精胰岛素干预),选取未发生糖尿病的NOD小鼠为正常对照(NC)组;每组10只小鼠.定期检测各组小鼠随机血糖.8周后处死小鼠,制作眼球切片,计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数;检测视网膜Notch-1蛋白胞内段(NICD)、发状分裂相关增强子1(HESR1) mRNA、VEGFR-2mRNA及蛋白的表达.多组间比较采用单因素方差分析,多组间两两比较采用小显著性差异法(LSD)-t检验.结果 (1)四组间突破内界膜的内皮细胞核数量总体比较差异有统计学意义(F=57.247,P＜0.001),与DM组(6.4±1.0)相比,MSC组(2.8±0.5)数量显著减少(P＜0.05).(2)四组间小鼠视网膜NICD蛋白、HESR1 mRNA、VEGFR-2mRNA及蛋白表达量比较差异均有统计学意义(分别为F=155.076～562.306,均P＜0.05).与NC组相比,DM组小鼠视网膜NICD蛋白(0.38±0.18比1.74±0.11)和HESR1 mRNA(0.29±0.04比1.00±0.00)表达下降、VEGFR2 mRNA(4.11±0.40比1.00±0.00)及蛋白(1.40±0.85比0.28±0.02)表达量增加(均P＜0.05);与DM组相比,MSC组小鼠视网膜NICD蛋白(1.36±0.05比0.38±0.18)、HESR1 mRNA (0.80±0.02比0.29±0.04)表达增加,VEGFR2 mRNA(1.80±0.27比4.11±0.40)及蛋白(0.92±0.10比1.40±0.85)表达量减少,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 hUC-MSCs可能通过激活Notch通路、抑制VEGFR-2来抑制视网膜新生血管形成,从而对DR起治疗作用.

Notch1高表达可使钙化的人心脏瓣膜间质细胞骨形态发生蛋白-2、4表达增加

目的 观察钙化的人心脏瓣膜间质细胞(hVIC) Notch1蛋白表达的变化及其对细胞钙化的影响,并探讨其机制.方法 体外培养hVIC,将其分为2组,分别为正常对照组和诱导钙化组,前者常规培养,后者在常规培养的基础上加用β-甘油磷酸(500μl)、抗坏血酸(200μl)和地塞米松(100μl)以诱导细胞钙化,2组细胞均培养7d.另取上述方法诱导钙化的hVIC为钙化对照组,再设钙化抑制组,即为在钙化对照组的基础上加入Notch1特异性抑制剂DAPT 50 μmol/L(4μl/孔),2组细胞均培养7d.4组均用脂多糖(LPS)诱导细胞的炎症反应.采用蛋白印迹法检测各组细胞内Notch1、磷酸化核转录因子κB (p-NF-κB)、骨形态发生蛋白(BMP)-2和BMP4的蛋白表达水平,ELISA法测定各组细胞培养液上清中BMP-2蛋白的含量,Von Kossa染色法观察各组细胞钙化的情况.结果 (1)诱导钙化组和正常对照组细胞Notch1、p-NF-κB、BMP-2、BMP4蛋白表达和细胞培养液上清中BMP-2蛋白的含量以及Von Kossa染色结果:诱导钙化组细胞Notch1、p-NF-κB、BMP-2和BMP-4蛋白表达水平均明显高于正常对照组(P均＜0.05).诱导钙化组培养液上清中BMP-2蛋白含量为(88.23±3.28) pg/ml明显高于正常对照组的(25.41 ±3.68) pg/ml(P=0.02).Von Kossa染色可见诱导钙化组细胞形成大小不等的结节,胞质内的沉积物与细胞结节被染成黑色,提示有钙质沉积,而正常对照组细胞形态结构清晰,细胞周围无沉积物形成.(2)钙化对照组和钙化抑制组细胞Notch1、p-NF-κB、BMP-2、BMP-4蛋白表达和细胞培养液上清中BMP-2蛋白的含量以及Von Kossa染色结果:钙化抑制组细胞Notch1、p-NF-κB、BMP-2和BMP4蛋白的表达水平均明显低于钙化对照组(P均＜0.05),钙化抑制组培养液上清中BMP-2蛋白的含量为(26.74±4.62) pg/ml明显低于钙化对照组的(80.41 ±2.96) pg/ml (P=0.02).Von Kossa染色可见钙化抑制组细胞钙结节明显少于钙化对照组.结论 钙化的hVIC Notch1蛋白高表达,促进了BMP-2和BMP-4蛋白表达增加,从而使hVIC发生成骨样改变,诱导细胞钙化,这一机制可能与NF-κB的活化有关.

肿瘤坏死因子α抑制剂通过激活Notch1信号通路减轻创伤小鼠心肌再灌注损伤

目的 研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)抑制剂对创伤后心肌缺血再灌注(ML/R)损伤的影响,探讨跨膜蛋白受体Notch1在其中的作用.方法 健康雄性c57小鼠,10～ 12周龄.建立创伤合并MI/R小鼠模型后分为5组,即溶剂对照组、依那西普组、乱码RNA对照组、Notch1 siRNA组和依那西普+ Notch1 siRNA组,每组8只小鼠.采用Noble-Collip鼓建立创伤小鼠模型.创伤5d后,通过心肌点注射特异性siRNA(20 μg)建立Notch1降低小鼠模型.创伤7d后,建立MI/R小鼠模型,即麻醉小鼠后经左胸前第4、5肋间暴露心脏,结扎冠状动脉左前降支,缺血30 min后,解开结扎线实现再灌注.需要依那西普干预的小鼠均是在再灌注前10 min腹腔注射依那西普8 mg/kg.ELISA法检测血浆中TNF-α和肌钙蛋白I(cTnI)含量以及心肌组织中硝基酪氨酸水平.再灌注24 h后,利用小动物超声系统测定小鼠左心室射血分数(LVEF).伊文思蓝和2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)双染缺血再灌注心肌组织,计算梗死心肌面积比值.采用caspase-3试剂盒测定心肌caspase-3活性.蛋白印迹法测定心肌TNF-α蛋白和Notch1胞内片段(Notch1 ICD)含量.化学发光法测定心肌超氧阴离子含量.结果 (1)依那西普组和溶剂对照组小鼠cTnI、LVEF、心肌梗死面积和心肌caspase-3活性的检测结果:依那西普组小鼠cTnI的含量明显低于溶剂对照组(P＜0.01),LVEF明显高于溶剂对照组(P＜0.01),心肌梗死面积明显低于溶剂对照组(P＜0.01).依那西普组小鼠心肌组织中caspase-3活性明显低于溶剂对照组(P＜0.01).(2)依那西普组和溶剂对照组小鼠心肌中TNF-α蛋白和Notch1 ICD含量及血浆TNF-α浓度的检测结果:依那西普组小鼠心肌中TNF-α蛋白含量明显低于溶剂对照组(P＜0.01),且血浆中TNF-α浓度亦明显低于溶剂对照组(P＜0.01).而依那西普组小鼠心肌中Notch1 ICD含量则明显高于溶剂对照组(P＜0.05).(3) Notch1 siRNA组和乱码RNA对照组小鼠cTnI、LVEF、心肌梗死面积和心肌caspase-3活性的检测结果:Notch1 siRNA组小鼠cTNI的含量明显高于乱码RNA对照组(P＜0.05),LVEF明显低于乱码RNA对照组(P＜0.05),心肌梗死面积明显大于乱码RNA对照组(P＜0.05).Notch1 siRNA组小鼠心肌caspase-3活性明显高于乱码RNA对照组(P＜0.05).(4)溶剂对照组、依那西普组、依那西普+ Notch1 siRNA组小鼠心肌超氧阴离子和硝基酪氨酸含量的检测结果:依那西普组小鼠心肌超氧阴离子和硝基酪氨酸的含量均明显低于溶剂对照组(P均＜0.01).而依那西普+ Notch1 siRNA组小鼠心肌超氧阴离子和硝基酪氨酸的含量则均明显高于依那西普组(P均＜0.05).结论 TNF-α抑制剂可减轻小鼠创伤后MI/R损伤,其机制可能与激活Notch1信号通路而抑制心肌氧化/硝化反应有关.

Noteh1、Dll4蛋白在骨肉瘤的表达及临床意义

目的 探讨Notch1及其配体Dll4在骨肉瘤的表达及其和血管牛成的关系.方法 采用免疫组化SP法检测62例骨肉瘤Notch1和Dll4蛋白的表达,并根据CD34染色结果 计数微血管密度(MVD).43例骨软骨瘤标本作为对照.结果 (1)Notchl和Dll4在骨肉瘤表达的阳性率为85.5%、88.7%,骨软骨瘤表达阳性率为21.2%、23.6%,差异具有显著性(P<0.05);且Notch1和Dll4表达存在正相关(P<0.05,r=0.842).(2)Notch1和Dll4蛋白的阳性表达与骨肉瘤组织分化程度、Ennecking分期和有无转移密切相关(p<0.05).(3)Notch1或Dll4高表达组MVD显著高于低表达组)P<0.05).结论 Notch1、Dll4在骨肉瘤组织中的表达上调与血管生成密切相关,可能在骨肉瘤发生、发展中起重要作用.

靶向沉默Notch1基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨沉默Notch1基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响. 方法 将靶向Notch1的siRNA真核表达载体psiRNA Notch1-1转染膀胱癌细胞株T24和BIU-87,噻唑盐法、流式细胞术检测沉默Notch1后膀胱癌细胞生长、细胞周期和凋亡情况.RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后Notch1基因mRNA和蛋白表达的变化. 结果 转染后72 h,T24和BIU-87细胞G0/G1期细胞比例明显增加,分别为(80.13±2.69)%和(69.44±2.41)%,与T24对照组(23.89±1.32)%和BIU-87对照组(24.63±1.68)%比较差异有统计学意义(P值均<0.05).转染后72 h,T24和BIU-87细胞凋亡率分别为(13.75±1.23)%和(8.72±1.01)%,与T24对照组(1.28±0.14)%和BIU-87对照组(1.01±0.27)%比较差异均有统计学意义(P值均<0.05).转染后24 h细胞生长明显受到抑制,该抑制作用持续到转染后96 h.转染后72 h,T24和BIU-87细胞中Notch1基因mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05). 结论 Notch1在膀胱癌细胞株中可能起致癌作用.沉默Notch1基因能够抑制膀胱癌细胞的增殖.

T3N0M0食管鳞癌中Notch1的表达及对肿瘤复发转移的预测

目的 了解单次跨膜受体蛋白Notch家族成员1表达异常是否为食管鳞癌术后早期复发转移的危险因素之一,为T3N0M0期患者术后早期辅助化疗的选择提供依据.方法 通过免疫组化方法检测40例T3N0M0期食管鳞癌患者和8例正常食管组织的Notch1的表达情况,将病例分为Notch1(+)组和Notch1(-)组,对两组患者性别、年龄和肿瘤分化程度进行方差分析,并追踪分析两组患者的无疾病进展期(PFS)和总生存期(0S).结果 Notch1在食管鳞癌组织中表达明显低于正常食管组织(P＜0.05),52.5％(21/40)病例中Notch1表达阴性,47.5％(19/40)病例中Notch1表达阳性.Notch1表达阳性组患者的PFS(月)较表达阴性组的PFS长,差异有统计学意义(16.63±7.38 vs.12.19±5.48,P＜0.05),但两组患者OS(月)比较无统计学差异(25.89±4.67vs.23.05±4.47,P=0.056).结论 肿瘤组织中Notch1阴性表达的患者术后容易复发转移,Notch1表达阴性可能是食管鳞癌术后早期复发转移的危险因素之一,有该危险因素的T3N0M0患者提示需要早期术后辅助化疗.

宫颈癌及癌前病变组织中Notch1及HPV16 E6/E7表达的研究

目的 探讨Notch1受体和人乳头瘤病毒16感染在宫颈癌前病变和宫颈癌发生发展中的作用.方法 采用免疫组化SP法检测18例宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)和35例宫颈癌标本中Notch1受体及HPV16 E6/E7蛋白的表达,以34例正常宫颈组织及慢性宫颈炎组织作为对照.比较各组间Notch1及HPV16 E6/E7表达的差异,并分析Notch1与HPV16 E6/E7表达的关系.结果 Notch1蛋白在细胞胞浆、胞核及胞膜中表达,HPV16 E6/E7在细胞核中表达.从对照组到CIN组到宫颈癌组,Notch1及HPV16 E6/E7的表达均逐渐增强(P<0.01).Notch1的阳性表达与宫颈癌不同分期、分化程度、淋巴结是否转移无关(P>0.05).在宫颈癌组中Notch1与HPV16 E6/E7的表达均呈正相关性(P<0.01).结论 Notch1表达与HPV16 E6/E7感染可能与CIN及宫颈癌的发生密切相关,两者在宫颈癌的发病机制中可能协同发挥作用.

卵巢上皮性癌组织中Notch1、Jagged1和NICD蛋白表达的意义及癌细胞中γ-分泌酶活性的初步探讨

目的 了解Notch1、Notch配体(Jagged1)及Notch细胞内区(NICD)在卵巢上皮性癌(卵巢癌)组织中的表达及其临床意义;初步探讨卵巢癌细胞系SKOV3细胞中γ-分泌酶活性,及γ-分泌酶抑制剂——氮-[氮-(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰]-S-苯基甘氨酸丁酯(DAPT)对SKOV3细胞γ-分泌酶活性的影响.方法 (1)选取2004年3月到2007年7月于北京大学第一医院住院并接受治疗的卵巢癌患者共43例,选取2009年10月到2012年5月于本院因卵巢良性上皮性肿瘤行卵巢肿物剥除或附件切除的11例患者作为对照,应用免疫组化法检测卵巢癌及卵巢良性上皮性肿瘤组织中Notch1、Jagged1及NICD蛋白的表达,分析其与卵巢癌患者临床病理指标的关系.(2)体外培养卵巢癌细胞系SKOV3、永生化卵巢表面上皮细胞系T29细胞,采用基于Gal4-VP 16/UAS系统和双荧光素酶报告基因系统的检测方法对SKOV3和T29细胞中的γ-分泌酶活性进行测定,并测定加入50 μmol/L的DAPT后γ-分泌酶活性的变化.结果 (1) Notch1蛋白在卵巢癌组织中的免疫组化综合评分为(6.7±2.2)分,与卵巢良性上皮性肿瘤组织的(5.4±2.7)分比较,差异无统计学意义(P=0.153);Jagged1及NICD蛋白在卵巢癌组织中的综合评分分别为(5.3±2.4)、(5.3±2.3)分,显著高于卵巢良性上皮性肿瘤组织的(1.6±1.4)、(3.1±1.7)分(P＜0.01).Notch1、Jagged1及NICD蛋白的表达与卵巢癌患者的年龄、家族史、腹水、血清CA125水平、肿瘤长径、手术病理分期、病理分化程度及病理类型均无关(P均＞0.05).Notch1、Jagged1和NICD蛋白表达的强弱与卵巢癌患者的5年生存率及中位生存时间均无关(P均＞0.05),Notch1、Jagged1、NICD蛋白(+++)表达与其(+)～(++)表达的卵巢癌患者的死亡风险的危险度比(HR)分别为0.771、1.648和1.316(P均＞0.05).(2) DAPT处理前,SKOV3细胞的γ-分泌酶活性为(100.0±5.3)％,明显高于T29细胞的(12.2±1.4)％(P=0.019).DAPT(50 μmol/L)处理后,SKOV3细胞的γ-分泌酶活性降至(6.6±0.8)％,DAPT处理前、后比较,差异有统计学意义(P=0.001).结论 Notch1信号传导通路中的Jagged1和NICD蛋白可能在卵巢癌的发生中发挥作用.卵巢癌细胞的γ-分泌酶活性高于卵巢上皮细胞,γ-分泌酶可能成为治疗卵巢癌的靶点.

Notch1信号途径参与低氧诱导的Jurkat细胞侵袭转移的作用机制研究

目的 研究Notch1信号途径在低氧诱导的Jurkat细胞侵袭转移过程中的作用.方法 分别在低氧和常氧环境下体外培养Jurkat细胞,观察细胞侵袭转移能力的变化,同时检测Notch1信号途径,基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达变化.采用RNA干扰的方法阻断Notch1信号途径后,观察Jurkat细胞侵袭转移能力的改变以及MMP-2和MMP-9的变化情况.结果 低氧能够促进Jurkat细胞的侵袭转移能力,同时在低氧环境下,Notch1信号途径能够被激活以及MMP-2和MMP-9的表达增加.阻断Notch1信号途径后,Jurkat细胞侵袭转移能力下降,而MMP-2和MMP-9的表达也下调.结论 在低氧条件下,Jurkat细胞侵袭转移能力增加,其机制可能通过激活Notch1信号途径促使MMP-2和MMP-9的表达增加来实现的.

乳腺癌组织Notch1和JAG1蛋白表达与分子分型相关性研究

目的 Notch信号通路在乳腺癌中存在异常表达,但在不同分子分型乳腺癌中的表达情况鲜见报道.本研究将探讨不同分子分型乳腺浸润性导管癌组织中Notch1和JAG1蛋白表达及其与临床病理特征之间的关系.方法 收集滨州医学院附属医院病理科2012-01-06-2014-12-30存档的乳腺浸润性导管癌病例240例,根据ER、PR、HER2、Ki-67免疫组化结果分为管腔A型、管腔B型、HER2过表达型及三阴性型4组,每组60例,采用免疫组化En-Vision法检测不同分子分型乳腺癌中Notch1、JAG1蛋白的表达情况,对各分型乳腺癌组织的阳性表达率进行统计学分析.结果 各分型乳腺癌组织中Notch1的阳性表达差异有统计学意义(P=0.010,P＜0.05),其中三阴性乳腺癌(86.67％)与管腔A型(56.67％)比较(P＜0.001),HER2过表达型(83.33％)与管腔A型(56.67％)比较,差异均有统计学意义,P＜0.001;Notch1的阳性表达与淋巴结转移相关(P=0.017,P＜0.05),与临床分期(P=0.005,P＜0.01)、组织学分级(P=0.009,P＜0.01)显著相关,与ER表达(rs=-0.206,P=0.001,P＜0.01)、PR表达(rs=-0.187,P=0.005,P＜0.01)显著负相关,而与患者年龄、肿块大小无关.各分型乳腺癌组织中JAG1的阳性表达差异有统计学意义(P=0.035,P＜0.05),以三阴性乳腺癌阳性表达率高,但各组间两两比较差异无统计学意义;JAG1阳性表达与ER表达(rs=-0.142,P=0.015,P＜0.05)、PR表达(rs=-0.127,P=0.035,P＜0.05)呈负相关;Notch1和JAG1之间无明显相关性.结论 Notch1阳性表达与ER、PR表达显著负相关,与乳腺癌的组织学分级、淋巴结转移及临床分期密切相关,并在HER2过表达型,尤其是三阴性乳腺癌组织中存在高表达,有可能成为三阴性乳腺癌新的治疗靶点.

miR-34a可能靶向Notch1影响乳腺癌细胞对阿霉素的敏感性

目的 探讨miR-34a过表达影响乳腺癌细胞对阿霉素(ADR)药物敏感性的机制.方法 采用实时荧光定量PCR法检测miR-34a在MCF-7和MCF-7/ADR乳腺癌细胞中的表达情况.将miR-34a模拟物及阴性对照转染MCF-7/ADR细胞,将miR-34a抑制物及阴性对照转染MCF-7细胞.采用Western blot法和实时荧光定量PCR法检测转染前后MCF-7和MCF-7/ADR细胞中 Notch1蛋白及mRNA的表达情况.采用四甲基偶氮唑蓝法和流式细胞术检测miR-34a过表达是否影响乳腺癌细胞对ADR的敏感性.结果 MCF-7和MCF-7/ADR细胞中miR-34a的表达水平分别为1.00和0.02,MCF-7/ADR细胞较MCF-7细胞明显下调(P＜0.05);MCF4和MCF4/ADR细胞中 Notch1 mRNA的表达水平分别为1.00和2.10 ±0.20,MCF-7/ADR细胞较MCF-7细胞明显上调(P＜0.05).MCF-7/ADR细胞转染miR-34a模拟物后,Notch1蛋白及mRNA的表达下调;MCF-7细胞转染miR-34a抑制物后,Notch1蛋白及mRNA的表达上调.转染miR-34a抑制物和阴性对照后,ADR对MCF-7细胞的IC50分别为(0.51±0.03) μmol/L和(0.29 ±0.21) μmol/L,差异有统计学意义(P＜0.05);转染miR-34a模拟物和阴性对照后,ADR对MCF-7/ADR细胞的IC50分别为(39.28±4.12) μmol/L和(116.33±16.80) μmol/L,差异有统计学意义(P＜0.05).与转染阴性对照+ADR组比较,转染模拟物+ADR组MCF-7/ADR细胞的凋亡增加;转染抑制物+ADR组MCF-7细胞的凋亡减少.结论 miR-34a负向调控Notch1在mRNA和蛋白水平的表达,miR-34a过表达可增加乳腺癌细胞对ADR的药物敏感性.

过表达Notch1对小细胞肺癌细胞的增殖和神经内分泌标志物表达的抑制作用

目的 研究Notch信号通路对小细胞肺癌(SCLC)细胞增殖及神经内分泌标志物表达的调控作用.方法 采用包含Notch1胞内段(NIC)的重组质粒转染NCI-H446细胞,并建立稳定转染株.实验细胞分为3组,即NIC转染组、空质粒转染组和未转染组.应用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法,连续6 d测定各组细胞的增殖活性.应用细胞爬片、免疫细胞化学染色法以及Western blot技术,对神经元特异性烯醇化酶(NSE)和嗜铬素蛋白A(CgA)的表达量进行检测.结果 MTT法检测结果 显示,NIC转染组细胞的增殖活性明显降低,其连续6 d测得的吸光度(A)值均小于空质粒转染组和未转染组(均P<0.05).免疫细胞化学染色结果 显示,NIC转染组、空质粒转染组和未转染组cgA染色的阳性单位(Pu)值分别为8.81±0.77、38.10±1.55和38.97±0.80;NSE染色的PU值分别为7.21 ±0.59、28.25±1.46和30.57±1.31;NIC转染组CgA和NSE的Pu值均显著小于空质粒转染组和未转染组(均P<0.01).Westem blot检测结果 显示,NIC转染组、空质粒转染组和未转染组CgA条带的灰度值分别为0.54±0.03、0.99±0.05和1.00;NSE条带的灰度值分别为0.43±0.02、1.07±0.09和1.00;NIC转染组CgA和NSE条带的灰度值均显著小于空质粒转染组和未转染组(均P<0.01).结论 Notch1在SCLC中可能是一种抑癌基因,其介导的Notch信号通路的上调能抑制SCLC细胞的增殖和神经内分泌标志物的表达.

Notch1和血管内皮生长因子在出血性颅内动静脉畸形患者中的表达

目的 研究Notch1和血管内皮生长因子(VEGF)在出血性颅内动静脉畸形(AVM)中的作用.方法 回顾分析温州医学院神经外科手术治疗的AVM患者,共35例,根据病史和影像学特点,将AVM患者分为出血性AVM组(简称出血组)27例、非出血性AVM组(简称非出血组)8例,应用免疫组化、荧光实时定量PCR分别检测两组畸形血管团内Notch1和VEGF的表达差异及相关性.结果 ①在出血组和非出血组中,Notch1和VEGF在畸形血管团内皮细胞均表达明显,但两组Notch1、VEGF表达阳性率比较,差异均无统计学意义.②出血组的Notch1 mRNA水平为1.9±1.7,高于非出血组的1.5±0.6;出血组的VEGF mRNA水平为4.2±3.0,高于非出血组的2.9+2.7,但两组比较差异均无统计学意义.③ 经Spearman相关分析,颅内AVM的Notch1与VEGF的阳性细胞率(r= 0.638,P<0.05)及其mRNA水平(r== 0.611,P<0.05)均呈正相关.结论 Notch1、VEGF在出血性AVM和非出血性AVM中均表达升高;但在出血性AVM中无特异性,Notch1与VEGF可能协同参与颅内AVM的形成.

Temporal lobe epilepsy is associated with astrogliosis. Notch1 signaling can induce astrogliosis in glioma. However, it remains unknown whether Notch1 signaling is involved in the pathogenesis of epilepsy. This study investigated the presence of Notch1, hairy and enhancer of split-1, and glial fibrillary acidic protein in the temporal neocortex and hippocampus of lithium-pilocar-pine-treated rats. The presence of Notch1 and hairy and enhancer of split-1 was also explored in brain tissues of patients with intractable temporal lobe epilepsy. Quantitative electroencephalo-gram analysis and behavioral observations were used as auxiliary measures. Results revealed that the presence of Notch1, hairy and enhancer of split-1, and glial ifbrillary acidic protein were en-hanced in status epilepticus and vehicle-treated spontaneous recurrent seizures rats, but remain unchanged in the following groups:control, absence of either status epilepticus or spontaneous recurrent seizures, and zileuton-treated spontaneous recurrent seizures. Compared with patient control cases, the presences of Notch1 and hairy and enhancer of split-1 were upregulated in the temporal neocortex of patients with intractable temporal lobe epilepsy. Therefore, these results suggest that Notch1 signaling may play an important role in the onset of temporal lobe epilepsy via astrogliosis. Furthermore, zileuton may be a potential therapeutic strategy for temporal lobe epilepsy by blocking Notch1 signaling.

Notch1在喉鳞状细胞癌中的表达及意义

目的 研究Notch1在喉鳞状细胞癌(简称喉鳞癌)组织及体外培养Hep-2细胞中的表达及其与喉鳞癌病例临床病理资料之间的关系.方法 应用量子点超敏免疫荧光(QDs immunofluorescence)染色法检测Notch1蛋白在95例喉鳞癌、31例声带息肉组织标本及Hep-2细胞中的表达.结果 Notch1在95例喉鳞癌组织中表达阳性率为88.4％,其表达主要定位于细胞质和细胞核.在喉鳞癌组织中Notch1的表达与T分级、临床分期和淋巴结转移有显著相关性.Notch1在喉鳞癌组织细胞核中的阳性表达与T分级、临床分期、病理分级和淋巴结转移有显著相关性.喉鳞癌细胞Hep-2中Notch1表达阳性,且主要定位于细胞质和胞膜中.结论 Notch1与喉鳞癌的发生发展有着重要关系,其作用的具体机制有待深入研究.

Notch1-Jagged1信号在变应性鼻炎中的表达及意义

目的 探讨Notch1-Jagged1信号在变应性鼻炎(AR)模型小鼠各发病阶段鼻黏膜及AR患者血清中的表达及意义.方法 将36只小鼠分为正常对照组、卵清蛋白(OVA)基础致敏组及OVA/AR组,每组12只.造模后对各组小鼠进行AR症状评分,苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠鼻黏膜中嗜酸粒细胞浸润情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测外周血中总IgE水平;流式细胞术检测脾脏中调节性T细胞(Treg细胞)比例变化;Western blot法检测鼻黏膜中Notch1、Jagged1的表达水平;多重液相蛋白定量技术(cytometric bead array,CBA)检测脾脏淋巴细胞中Th1/Th2/Th17相关细胞因子水平.收集2017年6-10月期间就诊于武汉大学人民医院耳鼻咽喉头颈外科的50例AR患者和30例对照组人群的血清,ELISA法检测血清中Notch1、Jagged1的表达情况.多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用LSDt检验;应用Pearson相关分析评价Notch1与各细胞因子相关性.结果 与正常对照组比较,基础致敏组小鼠的症状、鼻黏膜嗜酸粒细胞浸润情况及血清总IgE水平的差异无统计学意义;OVA/AR组小鼠的症状、鼻黏膜嗜酸粒细胞浸润情况及血清总IgE水平明显升高[(6.11±0.78)分((x)±s,下同)比(0.67±0.50)分,(77.67 ±5.61)个比(10.33±0.82)个,(106.80±11.91) pg/ml比(82.45±19.80) pg/ml,t值分别为19.471、34.848、2.542,P值均＜0.05].与正常对照组比较,基础致敏组小鼠脾脏中Treg细胞比例上升,OVA/AR组Treg细胞比例下降[(10.29±0.47)％比(9.28±0.16)％,(8.49±0.15)％比(9.28±0.16)％,t值分别为5.838、4.540,P值均＜0.01].与正常对照组比较,基础致敏组与OVA/AR组小鼠鼻黏膜中的Notch1表达均上升(1.04±0.05比0.71 ±0.05,1.83 ±0.10比0.71 ±0.05,t值分别为9.293、31.363,P值均＜0.01);OVA/AR组Jagged1表达上升(0.41±0.04比0.21±0.01,t=13.472,P＜0.01).相关分析发现Notch1与IL-6、IL-10表达呈正相关(r值分别为0.98、0.87,P值均＜0.01).与对照组比较,AR组患者血清的Notch1、Jagged1表达明显上升[(1 135.0 ±254.9)pg/ml比(436.0±139.3)pg/ml,(1 200.2±401.0) pg/ml比(559.9±124.2)pg/ml,t值分别为13.99、11.94,P值均＜0.01].结论 Notch1受体与配体在AR发病过程中高表达,Notch1-Jagged1信号轴通过上调IL-6、IL-10的表达促进了AR的发生、发展.

Notch1在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育中的表达

目的：探讨Notch1在小鼠下颌第一磨牙胚胎发育过程中的组织学分布。方法制作ICR小鼠下颌第一磨牙不同发育阶段的冰冻组织切片,对小鼠下颌第一磨牙自牙胚发育起始期至出生后2天不同发育阶段组织的Notch1分布情况进行免疫组织化学染色。结果 Notch1在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育起始期和蕾状期牙板上皮上方或其包绕的口腔上皮中表达,在牙板上皮中没有表达。自帽状期至钟状期,Notch1在牙胚的中间层表达,而在内釉上皮中无表达。至牙釉质和牙本质分泌期,Notch1仍在颈环部位的中间层表达。此外,Notch1还在牙胚发育不同时期的间充质、牙乳头和早期牙髓中表达。结论 Notch1可能在小鼠下颌第一磨牙发育过程中的牙上皮特别是内釉上皮的细胞分化,以及牙囊和牙乳头细胞分化及分化完成后的牙髓干细胞的稳定性方面有重要作用。

Notch1蛋白在小鼠下颌切牙发育中的表达

目的：探讨Notch1在小鼠下颌切牙牙胚发育过程中的组织学分布。方法制作ICR小鼠下颌切牙不同发育阶段的冰冻组织切片,对小鼠下颌切牙牙胚自牙胚发育起始期至钟状晚期不同发育阶段组织Notch1的分布情况进行免疫组织化学染色。结果 Notch1在小鼠下颌切牙发育蕾状期牙胚的口腔侧上皮中表达,而在和间充质相邻的牙胚上皮中没有表达。从帽状期至钟状期,Notch1在牙胚的中间层表达,而在内釉上皮中没有表达。钟状期的唇侧颈环部位星网状层和部分牙上皮细胞也表达Notch1。此外,Notch1还在牙胚发育不同时期的间充质、牙乳头和早期牙髓中表达。结论 Notch1可能在小鼠下颌切牙发育过程中的牙上皮,特别是内釉上皮的细胞分化,以及牙囊和牙乳头细胞分化及分化完成后的牙髓干细胞的稳定性方面有重要作用。

MicroRNA-34a通过Notch1对膀胱肿瘤细胞株T24增殖的影响

目的 探讨膀胱肿瘤细胞株中microRNA-34a(miR-34a)与Notch1的相互作用关系以及过表达miR-34a对T24细胞增殖的影响.方法 通过生物信息学软件预测miR-34a与Notch1的作用位点,并通过荧光素酶实验验证两者的直接调控关系.在膀胱癌细胞株T24过表达miR-34a,采用实时定量PCR和蛋白印迹检测Notch1表达水平的变化；分别通过新型四唑氮盐(MTS)实验和流式细胞术检测细胞增殖、凋亡以及细胞周期的变化.结果 T24细胞中荧光素酶报告基因实验显示,miR-34a在膀胱癌细胞中能与报告基因结合,使萤火虫荧光强度减弱(P=0.006).过表达miR-34a后,T24细胞内源性Notch1的mRNA水平和蛋白水平均明显下调；T24细胞生长明显受抑(P＜0.001),并呈现一定时间依赖性；凋亡率增加(P=0.003),G0-G1期细胞显著增多(P=0.002).结论 过表达miR-34a能通过降低靶基因Notch1的表达,抑制膀胱肿瘤细胞的增殖.