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酸性成纤维细胞生长因子和肝细胞生长因子在肝干细胞分化成熟中的作用

王悍；滕皋军；缪竞陶；张贵祥

关键词：大鼠 Sprague-Dawley 肝干细胞细胞培养成纤维细胞生长因子酸性肝细胞生长因子细胞角质素

摘要： 目的初步探讨了酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)及肝细胞生长因子(HGF)对大鼠胎肝干细胞分化成熟的影响.方法采用胶原酶消化法分离胎龄13 d的SD大鼠胎肝细胞,分别接种于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组细胞培养瓶中进行体外培养.Ⅰ组:培养液中含酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)和肝细胞生长因子(HGF);Ⅱ组:培养液中含aFGF;Ⅲ组:培养液中含HGF;Ⅳ组培养液中无细胞因子,此组作为对照组. 检测在相同培养时间(第3、5、7、9、11天)细胞培养上清液中甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(ALB)的含量;并用免疫细胞化学法鉴定在无细胞因子干预培养3 d后,胎肝干细胞对细胞角质素-19(CK-19)的表达.结果Ⅰ组、Ⅱ组及Ⅲ组分别与Ⅳ组比较,在相同培养时间的培养上清液中AFP的含量均较少,而ALB的含量均较多,且差异均有显著性意义(AFP:t=6.264,3.221,2.591, P<0.05;ALB: t=6.324,2.145,2.954, P<0.05);Ⅱ组和Ⅲ组相同培养时间的培养上清液中AFP及ALB的含量差异均无显著性意义(AFP:t=0.501, P>0.05;ALB: t=0.616, P>0.05);而Ⅳ组分别与Ⅱ组和Ⅲ组比较,在相同培养时间的培养上清液中ALB的含量均较少,而AFP的含量均较多,差异也均有显著性意义(AFP:t=3.221,2.591, P<0.05;ALB: t=2.145,2.954, P<0.05);免疫细胞化学染色显示:在30个细胞玻片中,所有细胞标本的CK-19+细胞均在50%以上,22个细胞玻片(73.33%)CK-19+细胞>90%.结论采用胶原酶消化法可从胎龄13 d的大鼠胎肝中分离出肝干细胞;aFGF及HGF均能促进肝干细胞向肝细胞分化成熟,并且两者有一定的协同作用.

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