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TRAIL诱导的白血病细胞凋亡过程中的基因差异表达
目的分离鉴定重组可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(rsTRAIL)在诱导Jurkat T淋巴细胞白血病细胞凋亡过程中差异表达的基因.方法采用抑制性差减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)及PCR技术筛选差异表达的基因.采用狭缝杂交和Northern印迹技术鉴定差异基因片段;以DNA自动序列分析仪测定所获cDNA核苷酸顺序.结果获得了6个差异表达的基因片段,4个在TRAIL诱导的白血病细胞凋亡过程中被抑制,2个被激活;其中,A14、X1、D1、A23和C5等5个基因片段为新基因,其GeneBank登记号分别为AW731601、AW731602、AW731603、AW731604和BE239235.Northern印迹显示,基因D1在Jurkat和MCF-7中的表达明显高于其它肿瘤细胞,提示该基因可能具有肿瘤特异性.结论TRAIL诱导的细胞凋亡过程,涉及多种基因表达的改变.
关键词： 肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体 白血病细胞 差异表达基因 -
携带肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体重组腺相关病毒的构建及鉴定
目的:构建一种携带肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)基因的重组腺相关病毒(recombined adeo-associated virus,rAAV)载体.方法:实验于2005-09/2006-04在中山大学附属第一医院普通外科实验室完成.首先构建携带可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体基因的穿梭质粒pAAV-sTRAIL,利用磷酸钙共沉淀法将穿梭质粒共转染入HEK293细胞中,采用细胞内质粒DNA同源重组法构建重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL.以噬斑分析法筛选单克隆重组腺相关病毒;聚合酶链反应法鉴定阳性重组腺相关病毒;氯化铯密度梯度离心法纯化病毒;紫外分光光度仪测定病毒颗粒数及纯度,噬斑分析法测定病毒感染滴度;Western blot检测rAAV-sTRAIL在293细胞中的表达情况.结果:成功构建了重组腺相关病毒载体rAAV-sTRAIL,制备的病毒纯度好、滴度高,且在293转导细胞中能有效表达目的基因sTRAIL.结论:构建的重组腺相关病毒载体rAAV-sTRAIL,为组织工程相关细胞转基因构建及临床应用提供先进的载体系统.
关键词： 肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体 腺相关病毒 基因治疗 -
蛋白酶体抑制剂联合TRAIL杀伤骨肉瘤细胞的研究
目的 观察蛋白酶体抑制剂与肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)对骨肉瘤细胞株MG-63的杀伤作用.方法 骨肉瘤细胞株MG-63分别经蛋白酶体抑制剂Z-LLL-CHO和(或)TRAIL作用24 h,采用MTT法检测细胞毒性作用,流式细胞仪定量分析凋亡细胞所占比例,并镜下观察细胞形态学改变. 结果 0.5 μmol/L的Z-LLL-CHO与500 ng/ml的TRAIL合用于MG-63细胞24 h后,细胞存活率为61.6%±1.3%,明显高于单用Z-LLL-CHO(0.5 μmol/L )时的96.6%±0.2%及单用TRAIL(500 ng/ml)时的89.5%±0.7%(P＜0.01).流式细胞术、电镜及荧光显微镜观察证实,协同性杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡实现.结论 蛋白酶体抑制剂能增强TRAIL杀伤骨肉瘤细胞和诱导骨肉瘤细胞的凋亡.
关键词： 凋亡 蛋白酶体抑制剂 肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体 骨肉瘤 -
TRAIL对3AO裸鼠移植瘤治疗作用的实验研究
目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对3AO裸鼠皮下及腹腔移植瘤的治疗作用.方法:将5×106和2×107对数生长期的3AO分别接种于BALB/C裸鼠右下肢皮下和腹腔内;待皮下组移植瘤长至0.25cm3,腹腔移植瘤组移植后96h,随机分为5组.裸鼠皮下和腹腔移植瘤A、B组为TRAIL组,剂量分别为0.5μg/ml和1μg/ml;C组为TRAR0.5μg/ml加cDDP 1.5ng/kg,D组为cDDP 3mg/kg;E组为对照组(将生理盐水分别注射于瘤周和腹腔),观察移植瘤成瘤率、裸鼠生存期和生存期延长率.同时观察停药后1d、1周、2周裸鼠移植瘤细胞的细胞凋亡率及CD95、Apo2.7、P53、Bc1-2基因表达的变化.结果:(1)A、B、C和D组裸鼠皮下移植瘤的抑制率分别为23%、49.1%、62.3%和52.6%,差异有显著性(P＜0.05);(2)腹腔移植瘤组:A、B、C、D组裸鼠移植瘤的成瘤率分别为89.1%、72.3%、51.7%和61.5%;差异有显著性(P＜0.05);(3)TRAIL作用裸鼠移植瘤后CD95与Apo2.7的表达均升高,P53基因表达稍升高,Bc1-2基因表达降低.结论:(1)TRAIL对人卵巢癌裸鼠移植瘤有明显的抑制作用,TRAIL能明显降低裸鼠的成瘤率及死亡率,延长生存期;(2)其机制可能与基因CD95、Apo2.7、Bcl-2的调节有关.
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实验性兔动脉粥样硬化病变中TRAIL、DR5的表达及意义
目的:探讨肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)通过死亡受体-5(DR5)途径诱导的细胞凋亡与动脉粥样硬化(AS)的关系.方法:采用球囊拉伤腹主动脉加高胆固醇饮食的实验方法,建立兔AS模型;血管超声检查明确腹主动脉斑块的形成情况,然后取静脉血和腹主动脉组织,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测AS组及正常组兔血清中可溶性TRAIL(sTRAIL)和可溶性DR5(sDR5)的浓度,免疫组化染色检测AS组及正常组腹主动脉壁TRAIL和DR5的蛋白表达.并比较两组间各项参数的差异.结果:AS组兔血清中sDR5浓度显著高于正常组(P＜0.05),而两组兔血清中sTRAIL浓度差异无统计学意义(P＞0.05).AS组兔腹主动脉的TRAIL、DR5蛋白表达强度显著高于正常组(P＜0.05),染色呈棕褐色,粗颗粒状,群集于中膜、脂质沉积处和斑块纤维帽处,高倍镜下,棕褐色颗粒主要分布在胞浆和胞核内;正常组兔腹主动脉内膜、中膜也有少量TRAIL、DR5表达,染色呈浅棕色,颗粒细小,分布散在.结论:TRAIL通过死亡受体途径诱导的细胞凋亡对AS的发生和发展起一定的促进作用,TRAIL及其受体DR5可能是AS的重要影响因子.
关键词： 动脉硬化 肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体 死亡受体-5 细胞凋亡 -
肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体对人卵巢癌细胞株体外作用的实验研究
目的:探讨肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)对人卵巢癌细胞株体外生长抑制作用.方法:采用RT-PCR技术,检测正常人卵巢上皮细胞及人卵巢癌细胞株3AO、SKOV3、OV-CAR3TRAIL受体DcR1、DcR2、DR4、DR5的表达.MTT法测定不同浓度TRAIL对3AO、SKOV3、OVCAR3的生长抑制率,并以顺铂做对照;采用流式细胞技术观察TRAIL作用于3AO后的细胞凋亡率及细胞周期的变化;扫描电镜及HE染色,观察TRAIL及顺铂作用3AO后的细胞形态学变化.结果:①TRAIL能有效抑制3AO、SKOV3、OVCAR3的生长,并具有时效性和量效性(P＜0.05);②不同浓度的TRAIL作用于3AO后,在细胞周期G1期前出现明显的亚二倍体细胞凋亡峰,并呈现典型的细胞凋亡形态.结论:①TRAIL可有效的抑制卵巢癌细胞株的生长,并具有量效性、时效性;②TRAIL可通过不同的途径诱导细胞凋亡.
关键词： 肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体 卵巢肿瘤 细胞调亡 -
西黄丸含药血清增加TRAIL对RBE细胞的抑瘤作用及其机制
[目的]探讨西黄丸含药血清与肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL)单独或联合对人胆管癌细胞RBE增殖和凋亡的影响及其机制.[方法]制备高、中、低剂量西黄丸含药血清;人胆管癌细胞RBE分别用西黄丸含药血清、人重组可溶性TRAIL蛋白(rsTRAIL)及两者联合处理;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;分别用免疫荧光染色结合流式细胞术和RT-PCR检测TRAILR1/DR4和TRAIL R2/DR5在细胞表面及mRNA水平的表达.[结果]高剂量西黄丸含药血清可以抑制RBE细胞增殖,诱导其凋亡,较对照组差异有统计学意义(P＜0.01);中、低剂量西黄丸含药血清未见上述抑瘤作用;rsTRAIL以剂量依赖性方式抑制RBE细胞增殖,诱导其凋亡;低剂量西黄丸含药血清联合rsTRAIL处理后,RBE细胞增殖抑制率和凋亡率明显高于单用rsTRAIL组,比较差异有统计学意义(P＜0.05).低剂量西黄丸含药血清单独或联合rsTRAIL作用于RBE细胞36 h后,死亡受体TRAIL R1/DR4和TRAIL R2/DR5在细胞表面和mR-NA水平的表达均较对照组细胞明显增强,差异均有统计学意义(P＜0.01).[结论]西黄丸含药血清增强TRAIL对人胆管癌细胞RBE的增殖抑制和凋亡诱导效应,其机制可能与西黄丸含药血清上调RBE细胞TRAIL死亡受体表达相关.
关键词： 西黄丸 肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体 胆管癌 细胞凋亡 -
TRAIL联合美伐他汀增强对SWO-38细胞的抑瘤作用及其机制研究
目的 探讨肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)单独或联合美伐他汀对人胶质瘤细胞SWO-38增殖和凋亡的影响及其作用机制. 方法 人胶质瘤细胞SWO-38分别用人重组可溶性TRAIL蛋白(rsTRAIL)、美伐他汀及两者联用处理;MTT法检测细胞增殖情况;双染色流式细胞仪检测细胞凋亡情况;间接免疫荧光染色结合流式细胞技术检测细胞表面TRAIL R_1/DR_4和TRAIL R_2/DR_5分子表达;RT-PCR方法检测TRAIL R_1/DR_4和TRAIL R_2/DR_5 mRNA表达. 结果 rsTRAⅡ,和美伐他汀在单用或联用时均可抑制SWO-38细胞增殖,诱导其凋亡,并在一定范围内呈时间、剂量依赖性;联合用药组细胞增殖抑制率和凋亡率明显高于单用rsTRAIL或美伐他汀组,比较差异有统计学意义(P<0.05).美伐他汀单独或联合rsTRAIL作用于SWO-38细胞72 h后,死亡受体TRAIL R_1/DR_4和TRAIL R_2/DR_5在细胞表面的表达明显较对照组细胞增强,其mRNA表达水平亦相应增加,比较差异均有统计学意义(P<0.05). 结论 rsTRAIL与美伐他汀联合使用可增强对人胶质瘤细胞SWO-38的增殖抑制和凋亡诱导效应,其机制可能是美伐他汀增加SWO-38细胞TRAIL R_1/DR_4和TRAIL R_2/DR_5 mRNA表达、上调细胞表面TRAIL死亡受体从而增加其对rsTRAIL的敏感性.
关键词： 肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体 美伐他汀 神经胶质瘤 细胞增殖 细胞凋亡
