冬夏季节变化对大鼠甲状腺及下丘脑细胞IP3的影响

目的 从时藏理论入手研究"肾主骨",并对藏象的实质进行研究.方法 以"肾主骨,以应冬气"相关的甲状腺轴和对光敏感的高位节律调节器松果腺为切入点,选择了完成跨膜信号转换的重要信使三磷酸肌醇(IP3)为研究对象.结果 正常对照组的下丘脑IP3含量表现为冬低夏高;甲状腺IP3含量呈现冬低夏高.摘除松果腺手术组则显示下丘脑与甲状腺正常冬夏季节差异消失.结论 下丘脑及甲状腺IP3季节性变化对骨代谢产生一定的影响,这与中医肾主骨、应冬、主蛰藏的认识是一致的.

头穴透刺对脑梗死大鼠ET、IP3、Mg2+、PDGFR-β的影响研究

目的：观察头穴透刺对脑梗死大鼠ET、IP3、Mg2+、PDGFR-β的影响。方法线栓法造模；行头穴透刺，一般针刺，药物注射治疗；2个疗程后检测ET、IP3、Mg2+、PDGFR-β。结果头穴透刺组明显提升大鼠PDGFR-β表达和降低ET、IP3、Mg2+的含量，与一般针刺组、药物治疗组对比差异有统计学意义（P＜0.01）。结论头穴透刺通过对ET、IP3、Mg2+、PDGFR-β调节发挥脑保护作用。

大承气汤对大鼠肠平滑肌细胞内磷酸二酯酶的影响

目的　探讨大承气汤的"通里功下"作用与肌醇脂质信号系统的关系，进一步阐明大承气汤的作用机制。方法　采用反相高效液相色谱法分别测定了手术对照组、肠梗阻模型组、不同剂量大承气汤组的大鼠肠平滑肌细胞内磷酸二酯酶 (PDE) 的含量。结果　体内实验发现：50%，100%，250% 大承气汤可使肠梗阻大鼠肠平滑肌细胞内 PDE 含量明显升高 (P＜0.05)。体外实验发现：50%，100%，250%大承气汤可使肠便阻大鼠肠平滑肌细胞内 PDE 含量明显升高 (P＜0.05)。结论　大承气汤可使大鼠肠平滑肌细胞内钙调蛋白 (CaM) 活性提高，由此推断，大承气汤的通里攻下作用很可能是通过激活肌醇脂质 (IP3) 信号转导系统使胃肠道平滑肌细胞内 Ca2+ 释放增加，再通过 CaM 间接地激活一系列的蛋白激酶而实现。

大承气汤颗粒剂对大鼠肠平滑肌细胞内三磷酸肌醇的影响

观察了大承气汤颗粒剂对大鼠肠平滑肌细胞内三磷酸肌醇(IP3)的影响.体内外实验发现:50%,100%,250%大承气汤可使肠梗阻大鼠肠平滑肌细胞内 IP3 含量明显升高 (P＜0.05).IP3 可介导肠道平滑肌的收缩,大承气汤的通里攻下,增强胃肠道推进功能的作用很可能是通过激活肌醇脂质 IP3 信号转导系统使胃肠平滑肌细胞内 Ca2+释放增加,再通过钙调蛋白间接地激活一系列的蛋白激酶而实现的.

丹芪葛酮对SHR肥厚心肌Gaq/11,PLC-β3及IP3浓度的影响

目的 观察丹芪葛酮对肥厚心肌中Gaq/11,PLC-β3蛋白及IP3浓度的干预,并探讨其逆转心肌肥厚的作用机制.方法 对自发性高血压大鼠(SHR)行腹主动脉部分缩窄术制作心肌肥厚模型,随机分为非用药组(ND组)、卡托普利组(CAP组)和丹芪葛酮组(DGH组),每组各8只,另设正常Wister大鼠为对照组(CG组).于连续用药8周后取材,测定全心重/体重(HW/BW)、左室重/体重(LVW/BW)、左心室肌组织中Gaq/11,PLC-β3、蛋白及IP3浓度变化.结果 DGH组LVW/BW为(3.48±0.29)g/kg,与ND组比较有统计学意义(P＜0.05).左心室肥厚时,Gaq/11蛋白和PLC-β3岛蛋白表达无明显性差异,IP3浓度为(2.05±0.52)nmol/L,明显高于CG组的(0.71±0.18)nmol/L(P＜0.01),应用丹芪葛酮和卡托普利治疗后,均有明显的干预作用.结论 肌醇磷脂途径可能参与心肌肥厚的病理过程,而丹芪葛酮组方有重塑心肌肥厚的作用.

目的:研究ATP对人中性粒细胞内三磷酸肌醇和钙离子的作用.方法:使用结合法测定三磷酸肌醇,根据Fura-2AM荧光变化测定钙离子浓度.结果:ATP刺激细胞三磷酸肌醇的形成和钙离子的释放.结论:ATP促进人中性粒细胞释放elastase酶可能与刺激细胞内三磷酸肌醇的形成和钙离子的释放有关.

白香丹含药血清对大鼠海马神经元中5-羟色胺2C受体的表达及其下游信号通路中IP3的影响

目的 观察白香丹胶囊含药血清对原代海马神经元中5-羟色胺2C受体(5-HTR2C)蛋白表达水平及下游信号通路中IP3含量的影响,探讨其可能的中枢作用机制.方法 采用情志刺激为主多因素造模法制备经前期综合征(PMS)肝气逆证大鼠模型,给予白香丹干预,制备大鼠含药血清,结合中药血清药理学,对体外培养的新生大鼠原代海马神经元进行不同血清干预,运用Western blot方法检测海马神经元中5-HTR2C蛋白表达水平,运用ELISA法检测各组海马神经细胞内IP3的含量.结果 与正常血清组相比,PMS肝气逆模型血清组海马神经元的5-HTR2C蛋白表达水平和下游信号通路中IP3含量均明显升高(P<0.01,P<0.01),白香丹含药血清能够明显降低5-HTR2C蛋白表达水平和IP3的含量(P<0.01,P<0.01).结论 PMS肝气逆证模型大鼠血清使海马神经元中5-HTR2C蛋白表达异常升高,同时,可引起第二信使IP3含量升高;白香丹胶囊可能通过降低5-HTR2C蛋白表达水平,改变其下游信号通路中IP3的含量而发挥疗效.

关于唾液分泌机制的研究(Ⅱ)

目的:研究生理状态下细胞内Ca2+池的分布以及IP3引起Ca2+释放的量,以进一步了解唾液分泌机制.方法:利用全细胞膜片钳技术对分离的大鼠颌下腺腺泡细胞进行膜电流测量.结果:乙酰胆碱引起定量Ca2+释放;光分解Caged IP3引起定量Ca2+释放;电流振动是细胞内Ca2+浓度振动性变化的结果.结论:IP3敏感的细胞内Ca2+池其释放量依赖于IP3浓度,主要分布在CL-通道存在的细胞膜下.

滨蒿内酯抑制组胺诱导的哮喘豚鼠气道平滑肌细胞内钙释放

目的 研究滨蒿内酯(scoparone,Sco)剂量依赖性舒张气管平滑肌及降低气道高反应性的可能作用靶点及途径,为进一步将其开发成为平喘的中药新药提供药理学理论依据.方法 建立卵蛋白诱导的哮喘豚鼠模型,通过离体豚鼠气管环的舒缩实验及应用倒置荧光显微成像系统测定培养的ASMCs[Ca2+]i浓度的方法,分析Sco预先给药及直接作用对ASMCs[Ca2+]i的影响.结果 显示无论细胞外含钙或无钙,组胺具有收缩ASM环及升高培养的ASMC[Ca2+]i作用,哮喘组明显高于对照组(P＜0.05),预先给予Sco组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);在细胞外无钙时10-4MSco直接作用培养的ASMCs,可明显抑制各浓度组胺诱导的ASMCs[Ca2+]i的上升(P＜0.05).结论 预先给予Sco及直接作用都可不同程度改善哮喘豚鼠ASMCs对不同浓度组胺的高反应性,这可能与Sco抑制哮喘豚鼠ASMCs IP3介导的内钙释放途径有关.

复心汤对大鼠原代心肌细胞IP3-Ca2+/CaM-CaN通路的影响

目的 研究用复心汤含药血清培养的大鼠原代心肌细胞中IP3-Ca2+/CaM-CaN通路的表达情况,并与缬沙坦干预后的心肌细胞模型进行比较,观察复心汤对心肌细胞的干预效果,进一步探讨复心汤抗心衰的作用靶点及机制,为临床及科研提供一条新思路.方法 健康成年的雄性Wistar大鼠50只,随机分为空白对照组、复心汤低剂量组、复心汤中剂量、复心汤高剂量组、西药(缬沙坦)组,分别给予生理盐水,低、中、高剂量复心汤及缬沙坦每天1次灌胃1周,末次灌胃后腹主动脉采血并分离血清,血清经灭活、滤菌.含药血清干预原代心肌细胞后分别采用Elisa、激光共聚焦成像技术、Western blot法检测心肌中IP3、Ca2+、CaM及CaN的表达情况及或定量分析.结果 复心汤高剂量组及西药组IP3表达量较空白组明显降低,有显著统计学意义(P＜0.01);复心汤中、高剂量及西药组CaM、CaN表达量明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);与西药组相比,复心汤高剂量组IP3、CaM、CaN表达量差异无显著统计学意义(P＞ 0.05);Ca2+荧光探针荧光强度由高到低依次是空白组,复心汤低、中、高剂量组,西药组.表明高剂量复心汤治疗心衰的效果与缬沙坦相当.结论 复心汤治疗心衰可能与IP3-Ca2+/CaM-CaN通路有关.

补脾方药对脾虚大鼠壁细胞内三磷酸肌醇(IP3)含量的影响

目的:观察脾虚大鼠模型壁细胞内IP3含量的变化及补脾方药党参、白术、补中益气汤对其的影响. 方法:大鼠壁细胞采用EDTA-Pronase酶消化法,采用竞争蛋白结合法测定大鼠壁细胞内IP3含量. 结果:大黄脾虚模型大鼠壁细胞内IP3含量显著低于正常组,经党参、白术、补中益气汤治疗后,IP3含量有不同程度的升高,尤以党参组明显. 结论:脾虚证可能与壁细胞内IP3含量生成量减少相关,补脾方药对其有一定的调节作用.

UTP对猪冠状动脉平滑肌细胞BKCa通道作用机制的研究

目的:利用膜片钳技术,研究UTP对急性酶分离的猪冠状动脉平滑肌细胞上BKCa通道的作用,探讨生理条件下UTP调节BKCa通道的机制.方法:应用Cell-attached技术记录急性酶分离的猪冠状动脉平滑肌细胞上BKCa电流.用pCLAMP9.0软件系统进行数据采集及分析.结果:在Cell-attached膜片上,80 μM UTP可明显激活BKCa通道(P＜0.05,n=21).PLC抑制剂U73122可抑制UTP对BKca的激活作用(P＜0.05,n＝5).PKC激动剂PMA(10nM),可使BKCa通道开放概率明显降低(P＜0.05,n=9).UTP(80μM)预处理细胞之后,IP3抑制剂 2APB(80μM),可使BKCa通道开放受抑(P＜0.05,n=6).结论:在Cell-attached 膜片上,UTP能激活猪冠脉平滑肌细胞BKCa通道.PLC信使转导通路中的IP3介导的胞内Ca2+释放是UTP激活BKCa通道的重要途径.

磷酸肌醇系统与缺血性心律失常

目的:探索磷酸肌醇(IP3)系统在心律失常中的作用.方法:应用光盘检索有关资料,进行综合评述.结果:IP3增加胞内Ca3+浓度,形成钙超载.结论:IP3在心律失常中起重要作用.

GnRH-Ⅰ类似物对离体大鼠胃壁细胞三磷酸肌醇含量的影响

目的:探讨促性腺激素释放激素(GnRH)-Ⅰ类似物阿拉瑞林对离体大鼠胃壁细胞内三磷酸肌醇(IP3)含量的影响.方法:体外分离大鼠胃壁细胞并给予不同浓度的阿拉瑞林孵育,利用标记的[3H]-IP3,采用放射免疫分析法检测了壁细胞内IP3的含量.结果:当加入终浓度分别为0.001、0.01、0.1、1 μmol/L的阿拉瑞林时,大鼠胃壁细胞内IP3的含量逐渐增加,呈剂量依赖性,当阿拉瑞林为1 μmol/L时,IP3的含量达到高峰;同时随着药物作用时间的延长,IP3的含鼍也会增加,当阿拉瑞林作用5 min时,IP3的含量达到峰值,随后开始下降;磷酸二脂酶(PLC)抑制剂Compound 48/80温育细胞后,再加入阿拉瑞林孵育,可使IP3的含量轻度增加,但与PLC抑制剂组相比,无统计学意义(P0.05);IP3受体阻滞剂heparin温育细胞后,再加入阿拉瑞林孵育,壁细胞内IP3含量略有上升,与只加入Heparln组相比无统计学意义.结论:在体外GnRH-Ⅰ类似物可使大鼠胃壁细胞内IP3的含量明显增加,说明IP3参与了GnRH-Ⅰ类似物对大鼠胃壁细胞功能调控的信号转导过程.

PLC及IP3R拮抗剂对弥漫性轴索损伤后继发性脑损伤的治疗作用

目的 研究弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAI)后PLC及IP3R抑制剂对DAI引发的脑水肿及神经元变性、损伤程度的影响,阐明PLC及IP3R抑制剂对DAI后继发性损伤的治疗作用.方法 采用头颅冠状面瞬间加速旋转装置,制作大鼠颅脑DAI模型,并使用侧脑室穿刺给药的方法注射PLC抑制剂U73122及IP3R抑制剂光溜海绵素C(Xestospongin,XeC).采用干湿重法测量脑组织含水量,ELISA测量脑脊液及动脉血中血清白蛋白(Alb)浓度并计算比值(QAlb),免疫组化法测量β-淀粉样前体蛋白(β-APP)的阳性面积及Western blot方法测量PLC的磷酸化程度.结果 DAI后6h大鼠脑组织含水量已明显增加,24 h到达顶点,之后逐步下降,在5d时恢复到损伤前水平,XeC及U73122干预明显降低了损伤后24 h脑组织含水量.ELISA结果显示DAI后6h及24 h脑脊液中Alb浓度及QAlb明显升高,之后下降至损伤前水平,XeC及U73122干预对DAI引起的脑脊液中Alb浓度及QAlb升高无明显影响.免疫组化结果显示DAI后24 h的β-APP的阳性面积较损伤前明显升高,XeC及U73122干预显著降低了DAI后24 h的β-APP阳性面积.结论 DAI后脑水肿的形成是由细胞毒性水肿及血管源性水肿共同构成的;PLC及IP3R抑制剂降低了DAI后的细胞毒性水肿及神经元变性、损伤程度,对DAI后的继发性脑损伤具有治疗作用.