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维甲酸促进三氧化二砷诱导的细胞凋亡作用
目的:观察三氧化二砷(As2O3)对非急性早幼粒细胞性白血病(acute prom y elocytic leukemia, APL)急性髓性白血病细胞的体外作用以及维甲酸(retinoic acid, R A )与As2O3之间的相互作用.方法:用维甲酸敏感(HL-60S)及维甲酸耐药(HL-60R)急性髓性白血病细胞株HL-60作为体系, 应用细胞计数及台盼蓝试验观察细胞活力及生长.采用细胞形态、DNA 片段梯度、末端核苷酸酶标记及流式细胞法观测细胞凋亡.结果: As2O3(0.5～4 μmol·L-1)抑制 HL -60R细胞生长,抑制能力与As2O3浓度及作用时间呈正相关;RA不仅促进HL-60S而且促进HL-60R 对As2O3的敏感性.结论:As2O3对细胞的抑制作用不局限于PML/RARα阳性细胞;As2O3可能对非APL急性髓性白血病有治疗作用 ,RA 与As2O3合用可能发挥更佳效果.
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载体介导的RNAi技术对HL-60细胞hTERT基因、蛋白表达和细胞增殖的影响
目的：探讨载体介导的靶向人端粒酶反转录酶（htert）基因 rna 干扰（rnai）对白血病 Hl-6细胞 htert 基因、蛋白表达和细胞增殖的影响。方法采用靶向 htert 基因 rnai 的重组质粒 psilecer1.0-U6/htert 转染 Hl-60细胞,以空载体质粒 psilecer1.0-U6转染组、转染试剂及空白组作对照，将转染后24h、72h、120h 的细胞用 rt-Pcr 检测细胞 htert 基因 mrna 的表达，Western-blot 检测细胞 htert 蛋白的表达，Mtt 检测细胞增殖活性。结果转染psilecer1.0-U6/htert 质粒24h、72h 和120h 后，Hl-60细胞 htert 基因、蛋白表达水平均低于各对照组（p ＜0.05），细胞增殖抑制率高于各对照组（p ＜0.05）。htert 基因、蛋白和细胞增殖抑制率在转染 psilecer1.0-U6/htert 质粒24h、72h 和120h 组间无明显差异（p ＞0.05），在3个对照组间也无明显差异（p ＞0.05）。结论载体介导的靶向htert 基因的 rnai 技术能在体外抑制 Hl-60细胞 htert 基因和蛋白的表达，增加细胞凋亡，抑制增殖。
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二烯丙基二硫诱导HL-60细胞G2/M期生长阻滞的分子机制研究
目的探讨二烯丙基二硫(DADS)诱导HL-60细胞G2/M期细胞生长阻滞的分子机制.方法用不同浓度的DADS处理HL-60细胞,分别作用0,6,12,24,48 h后用MTT法测定细胞增殖活性;用流式细胞术和有丝分裂指数测定细胞增殖周期;用Western blot检测p38丝裂原活化蛋白(p38 MAPK)及Cdc25B和Cdc2激酶的表达和磷酸化水平;用RT-PCR检测p38 MAPK mRNA的表达.结果 DADS抑制HL-60细胞增殖呈浓度依赖性,且DADS(20 μmol/L)与ATRA(10 nmol/L)对HL-60细胞增殖活性影响相近(P>0.05);DADS 20 μmol/L作用HL-60细胞12 h后能引起G2/M期细胞百分数增高并达到大值,而此时有丝分裂指数明显下降(P<0.05);同时,磷酸化p38 MAPK蛋白及p38 MAPK mRNA的表达达到高峰(P<0.05), 并引起Cdc25B和Cdc2磷酸化水平的相应变化.而p38特异性抑制剂SB202190(10 μmol/L)能阻断DADS对HL-60细胞增殖的抑制作用(P<0.05).结论 DADS能启动HL-60细胞G2/M控制点,它的激活可能与磷酸化p38MAPK的活化有关.
关键词： 有丝分裂素激活蛋白激酶类 HL-60 细胞 细胞周期 二烯丙基二硫 -
EGCG抑制HL-60细胞增殖作用的机制研究
目的 探讨EGCG抑制白血病HL-60细胞增殖的作用机制.方法 采用软琼脂集落形成实验和绘制细胞生长曲线,检测EGCG对HL-60细胞增殖的影响;FCM及DNA凝胶电泳法检测ECCG处理HL-60细胞后的凋亡情况;实时荧光定量RT-PCR和Wester blotting检测AKT1的表达.结果 细胞生长曲线和软琼脂集落形成实验结果均显示EGCG呈浓度依赖性抑制HL-60细胞的增殖(P＜0.05);FCM及DNA凝胶电泳法结果显示EGCG呈浓度依赖性诱导HL-60细胞的凋亡(P＜0.05).实时荧光定量RT-PCR和Wester blotting结果显示EGCG浓度升高,HL-60细胞中AKT1的表达降低.结论 EGCG可能通过下调AKT1的表达,促进细胞凋亡,发挥其对HL-60细胞增殖的抑制作用.
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柔红霉素对人急性早幼粒细胞白血病细胞株 HL-60细胞及干扰素调节因子1、8、9表达的影响
目的：研究柔红霉素(Daunorubicin,DNR)对人急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株 HL-60细胞中干扰素调节因子1(IRF1)-mRNA、干扰素调节因子8(IRF8)-mRNA、干扰素调节因子9(IRF9)-mRNA表达的影响。方法将 HL-60细胞株设为 HL-60组、HL-60+DNR组,同时取3例正常人外周血白细胞为 NC 组。HL-60组为未加药处理组, HL-60+DNR组为小剂量DNR持续作用 HL-60细胞10 d。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测 IRF1-mRNA、IRF8-mRNA、IRF9-mRNA 转录水平,每组实验重复3次。结果与 NC组相比,IRF1-mRNA、IRF8-mR-NA转录水平在 HL-60组显著下调(P<0.05),而 HL-60+DNR组显著上调(P<0.05)；与 NC组相比,IRF9-mRNA转录水平在 HL-60+DNR显著上调(P<0.05),在 HL-60组则表现为下调,但无统计学差异(P>0.05)。结论 DNR可上调 HL-60细胞中的IRF1、IRF8、IRF9表达水平。APL经DNR治疗后,可能通过上调IRF1、IRF8、IRF9的表达诱导白血病细胞的凋亡,促进其成熟,促进病情的缓解。
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白杨素诱导白血病细胞 HL -60凋亡及其机制
目的：检测白杨素诱导白血病细胞 HL -60凋亡及其机制。方法：分别利用 MTT 实验和 Annexin V- FITC/ PI 双染实验检测细胞增殖和凋亡。Western blot 技术检测相关通路蛋白变化。结果：白杨素可以明显诱导白血病细胞 HL -60凋亡。白杨素处理后细胞的 p - AKT 蛋白水平明显下降。结论：白杨素能够通过AKT 通路诱导 HL -60细胞凋亡。
